chủng vi sinh vật có khả năng đối kháng nấm Phytophthora sp gây bệnh trên cây có múi
Do những tác động bất lợi kể trên của thuốc hóa học, việc sử dụng vi sinh vật thay thế các loại thuốc hóa học được coi là sự thay thế bền vững để kiểm soát sâu bệnh và mầm bệnh thực vật (Chandler et al., 2011). Do vậy chúng tôi sử dụng nguồn xạ khuẩn và vi khuẩn lưu trữ tại Bộ môn Công nghệ Vi sinh- Học viện Nông nghiệp Việt Nam chúng tôi đã tuyển chọn trong tổng số 80 chủng xạ khuẩn, 30 chủng vi khuẩn. Kết quả tuyển chọn đã tim được 1 chủng xạ khuẩn 38 và 2 chủng vi khuẩn VK1 và VK2 có khả năng đối kháng với nấm gây bệnh trên cây có múi. Vì vậy, chúng tôi tiến hành nghiên cứu một số đặc điểm hình thái, sinh lý-sinh hóa của chủng xạ khuẩn 38 và 2 chủng vi khuẩn VK1 và VK2.
Chủng xạ khuẩn 38 có khuẩn lạc hình tròn, tâm lồi. Màu trắng xám. Sau 7 ngày nuôi cấy, màu sắc khuẩn lạc chuyển sang màu xám. Sau 24h đã xuất hiện hệ sợi, sợi phân nhánh, xuất hiện cuống sinh bào tử dạng xoắn. Sau 36h, cuống sinh bào tử dần duỗi thẳng, xuất hiện bào tử. Dựa theo hệ thống phân loại màu của
White (W). Khi dùng que cấy lấy khuẩn lạc lên thì thấy khuẩn lạc mềm, sợi cơ chất dính chặt vào mặt thạch và không sinh sắc tố. Chủng vi khuẩn VK1 Khuẩn lạc tròn, nhỏ, mép trơn, bề mặt nhày là trực khuẩn Gram âm. Chủng vi khuẩn VK2 khuẩn lạc tròn, nhỏ, mép trơn, bề mặt khô là trực khuẩn Gram dương.
Kết hợp các đặc điểm sinh học và phương pháp sinh học phân tử, chủng vi khuẩn VK1 có quan hệ họ hàng gần gũi với loài Pseudomonas aeruginosa và đặt tên cho chủng này là Pseudomonas aeruginosa VK1, chủng vi khuẩn VK2 có quan hệ họ hàng gần gũi với loài Bacillus velezensis và được đặt tên cho chủng này là Bacillus velezensis VK2, chủng xạ khuẩn 38 có quan hệ họ hàng gần gũi với loài Streptomyces mutabilis và được đặt tên cho chủng này là
PHẦN 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1. KẾT LUẬN
1. Phân lập được 5 chủng nấm DB1, HDB, HQC, RB, DB5 trong đó hai chủng nấm DB5, HDB có khả năng gây bệnh cây trên cây có múi. Cả 2 chủng nấm nghiên cứu đều không có khả năng sinh enzyme cellulase, phát triển tốt ở môi trường giàu dinh dưỡng.
2. Chủng HDB có hệ sợi phân nhánh, không có vách ngăn, chuỗi bào tử hình chùm, bào tử hình tròn. Chủng DB5 có hệ sợi phân nhánh, không có vách ngăn, chuỗi bào tử hình chùm, bào tử hình quả chanh. Kết hợp các đặc điểm sinh học và phương pháp sinh học phân tử đặt tên cho chủng DB5 là Phytophthora colocasiae DB5.
3. Tuyển chọn được chủng xạ khuẩn 38 và 2 chủng vi khuẩn VK1, VK2 đối kháng với nấm HDB và DB5. Chủng 38 có khuẩn lạc hình tròn, tâm lồi. Màu trắng xám. Sau 7 ngày nuôi cấy, màu sắc khuẩn lạc chuyển sang màu xám. Sau 24h đã xuất hiện hệ sợi, hệ sợi phân nhánh, xuất hiện cuống sinh bào tử dạng xoắn. Sau 36h, cuống sinh bào tử dần duỗi thẳng, xuất hiện bào tử. Chủng vi khuẩn VK1 có khuẩn lạc tròn, nhỏ, mép trơn, bề mặt nhày là trực khuẩn Gram âm. Chủng vi khuẩn VK2 khuẩn lạc tròn, nhỏ, mép trơn, bề mặt khô, trực khuẩn Gram dương.
4. Kết hợp các đặc điểm sinh học và phương pháp sinh học phân tử, đặt tên cho chủng vi khuẩn VK1 là Pseudomonas aeruginosa BAMCPA0748 VK1, chủng vi khuẩn VK2 là Bacillus velezensis VK2, chủng xạ khuẩn 38 là
Streptomyces mutabilis 38.
5.2. KIẾN NGHỊ
1. Nghiên cứu sự ảnh hưởng của điều kiện nuôi cấy đến khả năng đối kháng của các chủng vi sinh vật với nấm Phytophthora gây bệnh trên cây có múi. 2. Tiến hành các thí nghiệm đánh giá cả trong điều kiện invitro và invivo
với các phương pháp và nồng độ khác nhau để thu được kết quả tốt nhất.
3. Ứng dụng các chủng vi sinh vật đối kháng vào sản xuất chế phẩm sinh học để nâng cao năng suất và chất lượng cây trồng.
TÀI LIỆU THAM KHẢO I. Tài liệu tiếng Việt:
1. Lê Thị Hiền, Đinh Văn Lợi, Vũ Thị Vân, Nguyễn Văn Giang (2014). Phân lập và tuyển chọn các chủng xạ khuẩn đối kháng nấm bệnh cây. Tạp chí Khoa học và Phát triển. 12. (5).tr. 656-664.
2. Lương Đức Phẩm (2004).Công nghệ vi sinh vật học. Nhà xuất bản Nông Nghiệp 3. Lương Đức Phẩm (2011). Sản xuát và sử dụng chế phẩm sinh học trong nông
nghiệp. Nhà xuất bản Giáo dục Việt Nam, Hà Nội.
4. Nguyễn Lân Dũng (chủ biên) (2012). Vi sinh vật học. Nhà xuất bản Khoa học và Kỹ thuật, Hà Nội.
5. Nguyễn Lân Dũng, Nguyễn Đình Khuyến, Phạm Văn Ty (2002), Vi sinh vật học, Nhà xuất bản Giáo Dục, Hà Nội.
6. Nguyễn Lân Dũng, Phạm Văn Ty, Nguyễn Đình Quyến (1997), Vi sinh vật học – tập II, Nhà xuất bản Đại học và Trung học chuyên nghiệp, Hà Nội.
7. Nguyễn Thành Đạt (2000). Sinh học vi sinh vật, Nhà xuất bản Giáo dục.
8. Nguyễn Thị Phong Lan, Võ Thị Thu Ngân, Trần Phước Lộc, Trần Hà Anh (2015). Tuyển chọn các chủng xạ khuẩn (Streptomyces spp.) đối kháng nấm Pyricularia grisea gây bệnh đạo ôn hại lúa. Tạp chí Khoa học và Phát triển. 13. (8).tr. 1442-1451. 9. Nguyễn Xuân Cảnh, Lê Thị Chinh, Phạm Hồng Hiển, Trịnh Thị Vân (2018),
Tuyển chọn và nghiên cứu đặc điểm sinh học của chủng xạ khuẩn có khả năng đối kháng nấm Aspergillus flavus gây bệnh trên cam quýt, Tạp chí Nông nghiệp và phát triển nông thôn.
10. Phạm Thị Tâm (2014). Nghiên cứu nấm Phytophthora Palmivora gây bệnh thối đen quả ca cao và vài vi sinh vật đối kháng trong phòng trừ bệnh. Nhà xuất bản DHKHTN, Hà Nội.
11. Tô Thị Nhã Trầm (2007). Khảo sát ảnh hưởng của dịch nấm Phytophthora Capcasi và tác nhân hóa lý ảnh hưởng đến sự sinh trưởng và khả năng tạo đợt biến trên cây tiêu (Piper nigrum L.) nuôi cấy mô.
II. Tài liệu tiếng Anh:
12. Agrios G. N. (2005). Plant Pathology. Amsterdam: Elsevier Academic Press 13. Appiah AA, Bridge PD and Flood J (2003). Inter- and intraspecific morphometric
variation and characterization of Phytophthora isolates from cocoa. Plant Pathol; 52 (2).pp.168.
14. Arnau J, Conejero V, Fagoaga C, Hinarejos C, Rodrigo I, Tuset JJ, Pina JA, Navarro L (2001). Increased tolerance to Phytophthora citrophthora in transgenic orange plants constitutively expressing a tomato pathogenesis related PR-5. Molecular Breeding; 7. pp. 175-185.
15. Bressan W (2003) Biological control of maize seed pathogenic fungi by use of actinomycetes. Biocontrol, 48.pp.233–240.
16. Charu Singh, Ramendra Singh Parmar, P Jadon, A Kumar. Characterization of actinomycetes against phytopathogenic fungi of Glycine max (L.). Asian J Pharm Clin Res, Vol 9, S uppl. 1, 2016, 216-219.
17. Chaudhary HS, Yadav J, Shricastava AR, Singh S, Singh AK, Gopalan N (2013) Antibacterial activity of actinomycetes isolated from different soil samples of Sheopur (A city of central India).
18. Cooke DEL, Drenth A, Duncan JM, Wagels G, Brasier CM. (2000). A molecular phylogeny of Phytophthora and related Oomycetes. Fungal Genet Biol.
19. Dhanasekaran D., Thajuddin N., Panneerselvam A. (2012). Applications of Actinobacterial Fungicides in Agriculture and Medicine. Fungicides for plant and Animal Diseases. pp. 1-27.
20. Drenth and Irwin (2001). Routine DNA base Diagnostic Tesst for Phytophthora. Front Plant Sci.
21. Heffer V and Powelson ML. The Plant Health Instructor. Laboratory Exercises in Plant Pathology. Oregon State University, USA.
22. Ivana Puglisi, Alessandro De Patrizio, Loenardo Schena, Thomas Jung, Maria Evoli, Antonella Pane, Nguyen Van hoa, Mai Van Tri, Sandra Wright, Mauritz Ramstedt, Christer Olsson, Roberto Faedda, Gaetano Magnano di San Lio, Santa Olga Cacciola (2017) Two previously unknown Phytophthora species associated with brown rot of Pomelo (Citrus grandis) fruits in Vietnam. PLoS One.
23. Jung T, Stukely MJC, Hardy GEStJ, White D, Paap T, Dunstan WA, Burgess TI (2011). Multiple new Phytophthora species from ITS Clade 6 associated with natural ecosystems in Australia: evolutionary and ecological implications. Persoonia. 26. pp. 13–39.
24. Marmur J. (1961). A Procedure for the Isolation of Deoxyribo-nucleic Acid from Micro-Organism. Journal of Molecular Biology. 3. (2). pp. 208 - 218.
25. Mee Kyung Sang, Anupama Sharestha, Du-Yeon Kim, Kyungseok Park, Chun Ho Pak, Ki Deok Kim (2013) Biocontrol of Phytophthora Blight and Anthracnose in Pepper by Sequentially Selected Antagonistic Rhizobacteria against Phytophthora capsici. Plant Pathol J. 29(2).pp.154–167
26. Selvakumar Dharmaraj, B. Ashokkumar, K. Dhevendaran. (2010). Isolation of marine Streptomyces and the evaluation of its bioactive potential. African Journal of Microbiology Research. 4 (4). pp. 240 - 248.
27. Sharifah Farhana Syed-Ab-Rahman, Lilia C. Carvalhais, Elvis Chua, Yawen Xiao, Taylor J.Wass, Peer M. Schenk (2018) Identification of Soil Bacterial Isolates Suppressing Different Phytophthora spp. and Promoting Plant Growth. Front Plant Sci.
III. Tài liệu nguồn internet:
1. http://wasi.org.vn/tong-quan-ve-nam-phytophthora-capsici-gay-benh-chet-nhanh- tren-cay-ho-tieu-va-cac-bien-phap-phong-tru/ 2. https://dophyvn.com/tim-hieu-dac-tinh-cua-nam-phytophthora/ 3. https://edis.ifas.ufl.edu/hs261 4. http://www.cuctrongtrot.gov.vn/TinTuc/Index/3677 5. http://www.botanyvn.com/cnt.asp?param=edir&v=Rutaceae&list=familia 6. https://www.nextfarm.vn/mot-so-benh-ve-thoi-re-va-than-se-co-nguon-goc-tu-dat 7. https://sinhhocvietnam.vn/dac-tinh-cua-nam-phytophthora-gay-benh-vang-la-thoi-re/ 8. https://link.springer.com/article/10.1007/s11274-010-0400-0 9. http://www.hoinongdan.org.vn/sitepages/news/37/70459/bung-no-san-xuat-cay- an-qua-co-mui-mung-hay-lo 10. https://www.gso.gov.vn/default.aspx?tabid=621&ItemID=19037 11. http://iasvn.org/chuyen-muc/Benh-chet-nhanh-8211.html
PHỤ LỤC Trình tự chủng nấm DB5 GGGCACGGCGGATGGTTCATTCCCCCACTTAAACAACTTTCCTCGTGAGCCT TATCAACCTTTTTAGTGGGGGGTGTTGCTCGGCATTTTGCTGACCCGCCCCC TCTCATGGCGAATTTTGGGATTTCGGTCTGGTCTAGTAGCTTTTTGTTTTAAA CCATTTAACAATACTGATTATACTGTGGGGACGAAAGTCTCTGCTTTTAACT AGATAGCAACTTTCAGCAGTGGATGTCTAGGCTCGCACATCGATGAAGAAC GCTGCGAACTGCGATACGTAATGCGAATTGCAGGATTCAGTGAGTCATCGA AATTTTGAACGCATATTGCACTTCCGGGTTAGTCCTGGGAGTATGCCTGTAT CAGTGTCCGTACATCAAACTTGGCTTTCTTCCTTCCGTGTAGTCGGTGGAGG ATGTGCCAGATGTGAAGTGTCTTGCGGTTTGTGTGCCTTCGGGCCGAGGCTG CGAGTCCTTTGAAATGTACTGAACTGTACTTCTCTTTGCTCGAAAAGCGTGG TGTTGCTGGTTGTGGAGGCTGCCTGCGTGGCCAGTCGGCGGCCGGTTTGTCT GCTGCGGCGTTTAATGGAGGAGTGTTCGATTCGCGGTATGGTTGGCTTCGGC TGAACAGGCGCTTATTGTATGCTTTTCCTGCTGTGGCGTGATGGGCTGGTGA ACCGTAGCTGTGTGTGGCTTGGCTTTTGAACCGGCTTTGCTGTTGCGAAGTA GAGTGGCGGCTTCGGCTGTCGAGTGTCGATCCATTTTGGGAACTTTTGTGTG CGCTTTCGAGTGTGCATCTCAATTGGACCTGATTCCGGCAAG Trình tự chủng vi khuẩn VK1 AAGGGGGGTTCTTGGCCTCCCGTTTCAATGGCCTAGTTGGATTAGCTAGTGG TGGGTAAAGCCTACCAAGGCGACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATC AGTCCCNTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCTACGGGAGGCAGCAGTGGG AATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGNTGAAGA AGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGGAAGGGCAGTAAGTTA ATACCTTGCTGTTTTGACGTTACCAACAGAATAAGCACCGGCTAACTTCGTG CCAGCAGCCGCGGTAATACGAAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGG CGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTCAGCAAGTTGGATGTGAAATCCCCGGGCT CAACCTGGGAACTGCATCCAAAACTACTGAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTG GTGGAATTTCCTGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCA GTGGCGAAGGCGACCACCTGGACTGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGT GGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGTC GACTAGCCGTTGGGATCCTTGAGATCTTAGTGGCGCAGCTAACGCGATAAG TCGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAATTGACG GGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAG AACCTTACCTGGCCTTGACATGCTGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCC
TTCGGGAGCTCAGACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGA GATGTTGGGTTAAGTCCCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCAGC ACCTCGGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGT GGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTTACGGCCAGGGCTACACACGTGC TACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCCAAGCCGCGAGGTGGAGCTAATCCCA TAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGTC GGAATCGCTAGTAATCGTGAATCAGAATGTCACGGTGAATACGTTCCCGGG CCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCTCCAGAAGTAG CTAGTCTAACCGCAAGGGGGACGGTTACCACGGA Trình tự chủng vi khuẩn VK2 GGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTAAGGGGCGGAAACCCCCTA ACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCGTGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGT TCGCTCCCCACGCTTTCGCTCCTCAGCGTCAGTTACAGACCAGAGAGTCGCC TTCGCCACTGGTGTTCCTCCACATCTCTACGCATTTCACCGCTACACGTGGA ATTCCACTCTCCTCTTCTGCACTCAAGTTCCCCAGTTTCCAATGACCCTCCCC GGTTGAGCCGGGGGCTTTCACATCAGACTTAAGAAACCGCCTGCGAGCCCT TTACGCCCAATAATTCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTG CTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAGGTACCGTCAAGGTGCCGCC CTATTTGAACGGCACTTGTTCTTCCCTAACAACAGAGCTTTACGATCCGAAA ACCTTCATCACTCACGCGGCGTTGCTCCGTCAGACTTTCGTCCATTGCGGAA GATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTCTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAGT GTGGCCGATCACCCTCTCAGGTCGGCTACGCATCGTCGCCTTGGTGAGCCGT TACCTCACCAACTAGCTAATGCGCCGCGGGTCCATCTGTAAGTGGTAGCCG AAGCCACCTTTTATGTCTGAACCATGCGGTTCAGACAACCATCCGGTATTAG CCCCGGTTTCCCGGAGTTATCCCAGTCTTACAGGCAGGTTACCCACGTGTTA CTCACCCGTCCGCCGCTAACATCAGGGAGCAAGCTCCCATCTGTCCGCTCGA CTTGCATGTATTAGGCACGCCGCCAGCGTTCGTCCTGAGCAGAAT Trình tự chủng xạ khuẩn 38 ATTGACGTCCTTAANGNCTTGTAAACCTTGTTTCAGCAGGTAAGAAGTTAAA AGTGACGGTACTTGCAGAAGAAGCGCAGAATAACTACGTGCCAAGCAGCCG CCGGTAATACCTAGGGTATCAAGCGTGGTCCGGNATTTTTTTGGAGTTAAAG AGGCTCGTAGGCNGGCTTGTCANGTTCNTTTTTTAAATGCCCNGGGATTTAC CCCGGGGTCTGCAGTCGATACGNNNAGGATAGAGTTCGGTAGGAGAGATCG GAATTCTTGGTGTATCGGTGAAATGCGCAGATATCAGGAGGAACTCCGGTG GCGAAGGCGGATCTATGGGNCGATACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGG GGAACGAACAGGATTAGATCCCCTTGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGGCA
CTAGGTGTGGGCAACATTCCACGTCGTCCGTGCCGCAGCTAACGCATTAAGT GCCCTGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGGAATTGACGG GGGCCCGCACAAGCGGCGGAGCATGTGGCTTAATTCGATGCAACGCGAAGA ACCTTACCAACGGCTTGACATACACCGGAAAACCCTGGAGACAGGGTCCCC CTTGTGGTCGGTGTGGCAGGTGGTGCACGGGTGTCGTAAGCTCGTGTCGTGA GATGTTGGGTTAAGTCCGGCAAAGAGCGCAACCCGAGTCCAACCTTGCCAG CAGGCCCTCGTCGTGTTGGGGACTCACTGGAGAGCGCCGGGCTCAACTAAG CGGAAGGAGGGGGGGACGTCAAGTCATCATGCCCGGCCTGTCTTGGGATGC ACACGCGCTACAATCACCGGTACAATGAGATGCGATACCGCGAGGTGGAGC GAATCTCACAAAAACNGTCTCTCTTAGTACTGAGGTCTGTAACTAGCTCCCA TGAAGTAGGTGTCAATAGTAATTACTGATCAACAATCATGCCGTGAATACG TTCNNCCNGCGTTCTTCACCACGCCCGTCATCTCACCAAAGTCGGTAACACC ACCAGAAGGTGGCCCAACCCGTTAAGGGAGGGAGCTCCTTAAAGGTG