5.1. KẾT LUẬN
Từ kết quả nghiên cứu này có thể đƣa ra một số kết luận sau: 1. Đặc tính sinh học
- Phân lập thành công 4 chủng virus PEDV từ 15 mẫu lợn đƣợc chẩn đốn dƣơng tính bằng kỹ thuật RT-PCR. Mơi trƣờng tế bào Vero là dịng tế bào thích hợp cho sự nhân lên của virus. Để phân lập thành công virus PEDV cần bổ sung mơi trƣờng phân lập thích hợp đó là mơi trƣờng DEME có 10% TPB, 10mg/ml trypsin và 0,02% dịch chiết nấm men. Bệnh tích tế bào đƣợc biểu hiện rõ với các đám tế bào bị dung giải màng tế bào, nhân tế bào co cụm lại với nhau hình thành các thể hợp bào, quan sát rõ bằng kính hiển vi soi ngƣợc.
- Các chủng virus PEDV phân lập đƣợc có hiệu giá từ 104.25/25µl đến 105.50/25µl.
- Nghiên cứu khả năng gây bệnh tích tế bào bắt đầu xuất hiện sau 24 giờ gây nhiễm là sớm nhất. Tế bào sau gây nhiễm sẽ bị phá hủy hoàn toàn sau 84 giờ gây nhiễm.
2. Đặc điểm gây bệnh
- Các lợn Yorkshire mắc PEDV có các triệu chứng lâm sàng: lợn ủ rũ, mệt mỏi, bỏ ăn, bỏ bú, lợn bị tiêu chảy nặng, phân lỏng màu vàng ở lợn con (100%), gầy sút giảm cân (80,00%), nằm chồng đống, thích nằm trên bụng mẹ (46,67%).
- Các bệnh tích đại thể thƣờng gặp ở các cơ quan khi lợn mắc PEDV chủ yếu gặp ở đƣờng tiêu hóa: ruột căng phồng chứa đầy dịch vàng bên trong, có khi chứa hơi căng mọng, thành ruột mỏng (100%), có khi sung huyết ruột, gan sƣng, túi mật căng, dịch mật đặc (86,67%). Dạ dày chứa thức ăn khơng tiêu, sữa vón đơng 100%. Một số cơ quan khác cũng có bệnh tích nhƣng khơng phải đặc trƣng của bệnh.
- Một số bệnh tích vi thể của bệnh: dạ dày xuất huyết (73,33%,), sung huyết tập trung nhiều ở các cơ quan nhƣ hạch ruột (100%), ruột, phổi, dạ dày đồng chiếm (80,00%). Thâm nhiễm tế bào là tổn thƣơng chiếm tỷ lệ lớn trên các cơ quan: Hạch ruột (66,67%), ruột (73,33%), phổi (80,00%). Thối hóa tế bào
trên các cơ quan nhìn chung có tỷ lệ thấp hơn, đặc biệt tập trung trên thận (80%), hạch ruột (66,67%). Hoại tử tế bào xảy ra ít hơn trên các cơ quan (20 – 60%).
5.2. KIẾN NGHỊ
Cần nghiên cứu các đặc điểm triệu chứng lâm sàng và các bệnh tích đại thể của bệnh PEDV trên lợn ở các độ tuổi khác nhau.
Tiếp tục ứng dụng phản ứng RT-PCR với các loại mẫu bệnh phẩm khác nhƣ nƣớc bọt, thực quản… để chẩn đoán phát hiện sớm virus khi lợn mắc PEDV từ đó đƣa ra những biện pháp điều trị bệnh đạt hiệu quả cao giảm thiệt hại cho ngƣời chăn nuôi.
Nghiên cứu sự tập trung chủ yếu của virus PEDV khi phân lập trong tế bào Vero và trong môi trƣờng dinh dƣỡng.
Tiến hành các nghiên cứu sâu hơn về sinh học phân tử để có thể thu đƣợc những kết quả có giá trị thực tiễn cao.
TÀI LIỆU THAM KHẢO
Tiếng Việt:
1. Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phƣợng và Lê Ngọc Mỹ (1995). Bệnh đƣờng tiêu hóa ở lợn. NXB Nơng Nghiệp.
2. Đào Trọng Đạt, Phan Thanh Phƣợng, Lê Ngọc Mỹ và Huỳnh Văn Kháng (2000). Bệnh ở lợn nái và lợn con, NXB Nông Nghiệp.
3. Hồ Văn Nam, Nguyễn Thị Đào Nguyên và Phạm Ngọc Thạch (1997). Giáo trình chẩn đốn lâm sàng thú y, NXB Nông Nghiệp Hà Nội.
4. Nguyễn Bá Hiên và Huỳnh Thị Mỹ Lệ (2011) , Giáo trình Bệnh Truyền nhiễm thú y, NXB Đại học Nông nghiệp Hà Nội.
5. Nguyễn Ngọc Hải, Chẩn đoán bệnh động vật bằng kỹ thuật phân tử. NXB Nông Nghiệp Hà Nội.
6. Nguyễn Nhƣ Thanh, Nguyễn Bá Hiên và Trần Thị Lan Hƣơng (1997). Giáo trình vi sinh vật thú y, NXB Nông Nghiệp Hà Nội.
7. Nguyễn Tất Toàn và Đỗ Tiến Duy (2001). Một số yếu tố liên quan và đặc điểm sinh học của dịch tiêu chảy cấp trên heo con theo mẹ tại một số tỉnh phía Nam”. Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập XX, số 2, 2013.
8. Nguyễn Tất Tồn, Nguyễn Đình Qt và Huỳnh Văn Kháng (2012). Đặc điểm dịch tễ và chẩn đốn bệnh đƣờng ruột do Coronavirus,NXB Nơng Nghiệp. 9. Nguyễn Văn Điệp và Nguyễn Thị Lan (2013). Bệnh tiêu chảy dịch trên lợn
(Porcine Epidemic Diarrhea), những thông tin cơ bản cho công tác chẩn đốn, phịng và trị bệnh”. Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập XX, số 2, 2013.
10. Trịnh Văn Thịnh (1995). Bệnh lợn ở Việt Nam, NXB KHKT, Hà Nội.
11. Võ Trọng Hốt, Trần Đình Miên, Võ văn Sự, Vũ Đình Tơn, Nguyễn Khắc Tích và Đinh Thị Nơng (2000). Giáo trình chăn ni lợn. NXB Nơng nghiệp Hà Nội.
Tiếng Anh:
12. Ana Carvajal, Ignacio Lanza, Rafael Diego, Pedro Rubio, Pedro Cármenes (1995). “Seroprevalence of porcine epidemic diarrhea virus infection among different types of breeding swine farms in Spain”. Pre Vet Med 23: 33-40.
13. Bridgen A, Duarte M, Tobler K, Laude H, Ackermann M. (1993). “Sequence determination of the nucleocapsid protein gene of the porcine epidemic diarrhoea virus confirms that this virus is a coronavirus related to human coronavirus 229E and porcine transmissible gastroenteritis virus”. J. Gen. Virol. 74 (Pt 9):1795–1804 14. Callebaut P, Debouck P, Pensaert M. (1982). “Enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of the coronavirus-like agent and its antibodies in pigs with porcine epidemic diarrhea”. Vet Microbiol. 7:295–306.
15. Callebaut P, DeBouck P. (1981). “Some characteristics of a new porcine coronavirrus và detection of antibody by ELISA” Proe 5b
Int Congr Virol, p. 420.
16. Chasey D, Cartwright SF. (1978). “Virus-like particles associated with porcine epidemic diarrhea”. Res Vet Sci. Sep; 25 (2):255–256. 2.
17. Chae C, Kim O, Choi C, Min K, Cho WS, Kim J, Tai JH. 2000. “Prevalence of porcine epidemic diarrhoea virus and transmissible gastroenteritis virus infection in Korean pigs”. Vet. Rec. 147: 606–608.
18. DeBouck P, Callebaut P, và Pensaert M. (1982). “ Prevalence of the porcine epidemic diarrhea (PEDV) virus in pig population of the different contries” Proc Congrt Int Pig Vet Soc 7: 53.
19. Debouck P. and Pensaert M. (1980). “Experimental infection of pigs with a new porcine enteric coronavirus, CV777”. Am. J. Vet. Res., 41, 219-223.
20. Hofmann M và Wyler R. (1987). “Serolgishe Untersuchung uber das Vorkommen der Epizootischen Virusdiarrhoe dẻ Schweine (EVD) in der Schewiz”. Schewiz Arch Tierhilkd 129: 437 - 442.
21. Hofmann M, Wyler R. (1988). “Propagation of the virus of porcine epidemic diarrhea in cell culture”. J. Clin. Microbiol. 26:2235–2239.
22. Hofmann M và Wyler R. (1989) “Quantitation, biological và physiochemical properties of the cell culture – apdapted porcine epidemic diarrhea coronavirus (PEDV)”. Vet Microbiol 20:131 - 142.
23. Kadoi K., Sugioka H., Satoh T. và Kadoi BK. (2002). “The propagation of a porcine epidemic diarrhea virus in swine cell line New Microbiol”. 25: 285 -290.
24. Kweon CH., Kweon DJ., và An SH (1995). “Insolution of porcine epidemic diarrhea virus (PEDV) infection in Korea”. Korean J Vet Rec 35:349 -358.
25. Kocherhans., R, Bridgen (2001). “Completion of the porcine epidemic diarrhea coronavirus (PEDV) genome serotype”.23(3): 135- 246.
26. Lee HK, Yeo SG, (2003). “Propagation of pocine epidemic diarrhea virus. Chinjin 99 in Korea”. Vet Clin 20: 150 -154.
27. Ishikawa K, Sekiguchi H, Ogino T, Suzuki S. (1997) “Direct and rapid detection of porcine epidemic diarrhea virus by RT-PCR” J Virol Methods. 69(1-2): 191-5.
28. Pensaert, M.B., de Bouck P. (1978). “A new coronavirus-like particle associated with diarrhea in swine”. Arch. Virol. 58:243–247.
29. Pensaert, M.B., (1986). “Porcine epidemic diarrhe In: A.D Leman et al. (Editors), Diseases of Swine”. Iowa State University Press, Ames, IA.
30. Pensaert, M.B., (1989). “Porcineepidemic diarrhea In: M.B. Pensaert (Editor), Virus Infectionsof Porcines”. Elsevier, Amsterdam.
31. Pensaert, M. and Callebaut, P., (1982). “Porcine epidemic diarrhea (PED) caused by coronavirus present knowledge”. Proc.7th
IPVS Congress, July 1982, Mexico. Edited by the Scientific Committee of the 7th IPVS Congress,p. 52. 32. Peenseart and Van Rech K. (1998). “Porcine epidemic diarrhea porcine
respiratory coronavirus”. 423 -436.
33. Rodak and S.Nakai (2004), Porcine Epidemic Diaarrhea Virrus Emergence in the US: Status Report, Diagnostics, Observations.
34. http://www.iowapork.org/FileLibrary/States/IA/PEDV%20update%20-4. 35. %20Diagnostics-transmission-management-%20reporting.pdf.
36. http://www.usda.gov/documents/pedv-summary-actions.pdf. https://www.aasv.org/shap/issues/v10n2/v10n2p81.pdf.