4.2.1. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn mắc PEDV
Triệu chứng lâm sàng là dấu hiệu bất thƣờng đƣợc biểu hiện ra bên ngoài mà chúng ta có thể chẩn đoán qua các phƣơng pháp khám bệnh lâm sàng nhƣ: nhìn, sờ nắn, gõ và nghe. Những triệu chứng lâm sàng của lợn đƣợc quan sát kết hợp với thu thập thông tin từ cán bộ thú y, chủ trang trại nơi có lợn mắc PEDV. Kết quả triệu chứng lâm sàng đƣợc trình bày ở bảng 4.7.
Bảng 4.7. Triệu chứng lâm sàng chủ yếu của lợn mắc PEDV
STT Triệu chứng lâm sàng Số con quan sát Số con biểu hiện Tỷ lệ (%) 1 Ủ rũ, mệt mỏi, 15 15 100
2 Tiêu chảy, phân lỏng màu vàng 15 15 100
3 Gầy sút giảm ăn 15 12 80,00
4 Nôn 15 8 53,33
5 Nằm chồng đống, nằm trên bụng
mẹ 15 7 46,67
6 Sốt 15 5 33,33
7 Khó thở 15 2 13,33
Kết quả nghiên cứu triệu chứng lâm sàng của lợn mắc PEDV cho thấy: Triệu chứng lâm sàng của lợn thay đổi phụ thuộc vào chủng virus, trạng thái
miễn dịch của đàn, cũng nhƣ điều kiện quản lý chăm sóc, sự đồng nhiễm của các loại virus, vi khuẩn gây tiêu chảy khác. Qua theo dõi trên các nhóm lợn cho thấy rằng:
Các biểu hiện chính của lợn mắc PEDV gồm: Tiêu chảy (100%), sốt (33,33%), ủ rũ, mệt mỏi (100%), chán ăn, bỏ ăn, gầy sút, nôn. Lợn còn có hiện tƣợng nằm dồn đống (46,67%)có thể do bị tiêu chảy mạnh nên thân nhiệt giảm chúng thích nằm tụ lại. Hiện tƣợng tiêu chảy là biểu hiện đặc trƣng và phổ biến nhất của lợn mắc PEDV tuy nhiên ở các nhóm đối tƣợng khác nhau các biểu hiện tiêu chảy lại có đặc trƣng riêng. Ở lợn con theo mẹ phân màu vàng, chứa nhiều cặn sữa trắng không tan nhiều nƣớc là triệu chứng chính, đặc trƣng và điển hình nhất của bệnh và chiếm tỉ lệ 100%. Từ các đặc trƣng của lợn con theo mẹ mắc tiêu chảy có thể nghĩ đến do nhiễm PEDV đó là có tỉ lệ mắc và tỉ lệ chết rất cao, bệnh diễn biến nhanh, ồ ạt, sử dụng kháng sinh không hiệu quả. Nghiên cứu này tập trung chủ yếu vào nhóm lợn con theo mẹ vì đây là nhóm lợn chịu ảnh hƣởng và hậu quả nặng nề nhất do PEDV gây ra. Bên cạnh đó nhóm lợn thịt và lợn nái cũng có biểu hiện tiêu chảy phân lỏng, màu xi măng, nhiều nƣớc dẫn đến hiện tƣợng mất nƣớc, tai cụp, mắt trũng sâu bụng hóp. Lợn thƣờng ủ rũ, bỏ ăn, sốt 40-41°C và có kèm theo nôn mửa. Tuy tỉ lệ mắc cao nhƣng các nhóm lợn này lại có tỉ lệ chết rất thấp đây là điều khác biệt của bệnh do virus PEDV gây ra so với các virus gây bệnh khác. Ngoài ra trong quá trình quan sát, lợn bị tiêu chảy còn có hiện tƣợng nằm tụ lại, dồn đống, lông xơ xác, da khô, bẩn, dính phân xung quanh hậu môn, chân. Phân lợn về sau chuyển sang màu tro xám, sền sệt nhƣ màu xi măng, mùi hôi rất khó chịu. Khi điều tra cho thấy lợn nái thƣờng phát bệnh đầu tiên, sau đó là lợn con theo mẹ, cuối cùng mới là lợn trƣởng thành. Lợn nái chỉ có biểu hiện tiêu chảy 1-3 ngày rồi qua khỏi, lợn thịt 5-6 ngày biểu hiện triệu chứng. Nhìn chung lợn thịt và lợn nái mắc bệnh nhƣng thƣờng qua khỏi và tỉ lệ chết rất thấp. Lợn con theo mẹ sau 3 ngày nhiễm thƣờng tiêu chảy ồ ạt, mất nƣớc, gầy sút nhanh, chết rất nhanh do mất nƣớc nhiều, những con sống đƣợc hơn 7 ngày sau khi mắc thì sẽ khỏi và hồi phục dần dầ
MỘT SỐ HÌNH ẢNH MINH HỌA TRIỆU CHỨNG LÂM SÀNG CỦA LỢN YORKSHIRE MẮC PEDV
Hình 4.10. Lợn Yorkshire gây sút cân, gầy còm
Hình 4.11. Lợn Yorkshire nôn mửa
Hình 4.12. Lợn Yorkshire nằm dồn đống Hình 4.13. Phân dính hậu môn, chân
4.2.2. Bệnh tích đại thể chủ yếu của lợn yorkshine mắc PEDV
Các mẫu bệnh phẩm đƣợc gửi về phòng thí nghiệm trọng điểm thú y, khoa thú y có biểu hiện lâm sàng mắc bệnh PEDV tiến hành chẩn đoán bằng kỹ thuật RT-PCR, theo dõi, quan sát, ghi lại những triệu chứng lâm sàng chủ yếu sau đó tiến hành mổ khám quan sát các biến đổi bệnh tích đại thể trên các cơ quan, tổ chức, chụp ảnh bệnh tích, ghi lại hồ sơ mẫu, biên bản mổ khám và lƣu mẫu lại. Kết quả quan sát biến đổi bệnh tích đại thể của lợn mắc PEDV đƣợc trình bày tại bảng 4.8.
Bảng 4.8. Bảng kết quả biến đổi bệnh tích đại thể chủ yếu của lợn Yorkshire mắc PEDV
STT Biến đổi bệnh lý đại thể Số lợn
quan sát
Số lợn có bệnh tích
Tỷ lệ (%)
1 Ruột non căng phồng, chứa đầy dịch màu
vàng,thành ruột mỏng 15 15 100
2 Dạ dày căng phồng, chứa sữa không tiêu 15 15 100
3 Hạch màng treo ruột sƣng, xuất huyết 15 15 100
4 Gan sƣng, túi mật căng, dịch mật đặc 15 13 86,67
5 Hạch bẹn nông sƣng, xuất huyết 15 12 80,00
6 Thận sƣng và xuất huyết 15 12 80,00
7 Lách nhồi huyết, xuất huyết, rìa lách sƣng
nhẹ. 15 3 20,00
8 Phổi tụ huyết, xuất huyết điểm, có bọt khí ở
Từ kết quả ở bảng 4.8 cho thấy bệnh tích đại thể chủ yếu của lợn mắc PED tập trung ở các cơ quan tiêu hóa và hệ thống các hạch, các cơ quan khác có tổn thƣơng nhƣng không nhiều trong đó:
Ruột: 100% lợn có bệnh tích thành ruột non mỏng, nhạt màu hơn bình thƣờng chứa đầy dịch màu vàng, lợn cợn trong lòng ruột và xuất huyết (hình ảnh 4.16). Các đoạn không tràng và hồi tràng phồng to, chất chứa trong đƣờng ruột loãng, do đó lợn bị tiêu chảy, giảm hấp thu nên con vật còi cọc, chậm lớn và chết do mất nƣớc và điện giải.
Cùng với các bệnh tích ở ruột hạch màng treo ruột sƣng to, xuất huyết chiếm 100%. Các ống dƣỡng chấp nổi rõ, niêm mạc ruột có hiện tƣợng xuất huyết lan tràn.
Hạch bẹn nông: Hạch bẹn nông sƣng to hơn bình thƣờng 2-3 lần mầu đỏ thẫm, xuất huyết lấm tấm trên bề mặt hạch cắt hạch ra có chút dịch hồng phớt chảy ra (hình ảnh 4.18). Bên cạnh đó hạch màng treo ruột cũng có những những tổn thƣơng nhƣ sƣng, xuất huyết chiếm 100%, các hạch khác ít biến đổi.
Dạ dày: Dạ dày căng phồng chứa nhiều sữa không tiêu chiếm 100%, ở một số con thấy có xuất huyết. Niêm mạc dạ dày sung huyết nhẹ, thành dạ dày mỏng.
Gan: Bệnh tích chủ yếu gan hơi sƣng, túi mật căng, dịch mật đặc chiếm 86,67%, thỉnh thoảng có trƣờng hợp sung huyết nhẹ, đôi khi không thấy bệnh tích (hình ảnh 4.21).
Thận: Bệnh tích ở thận khi lợn mắc PEDV khá điển hình. Hiện tƣợng thận sƣng và xuất huyết (hình ảnh 4.19) chiếm tỷ lệ 80%.
Lách: Lách nhồi huyết, xuất huyết chiếm 20%. Hiện tƣơng rìa lách sƣng tù do hệ thống gan lách bị ứ máu giống nhƣ gan.
Phổi: Có hiện tƣợng tụ huyết, xuất huyết điểm nhƣng không đƣợc điển hình chiếm 20%, có bọt khí ở phổi (hình ảnh 4.20). Đây không phải bệnh tích đặc trƣng của PEDV, mức độ biến đổi của phổi phụ thuộc vào tiến triển của bệnh cũng nhƣ sự kế phát của các bệnh khác.
Tim: Có hiện tƣợng mỡ vành tim, tích nƣớc vàng nhạt trong xoang bao tim, cơ tim mềm nhão hơn bình thƣờng.
MỘT SỐ HÌNH ẢNH BỆNH TÍCH ĐẠI THỂ CỦA LỢN YORKSHIRE MẮC PEDV
Hình 4.16. Ruột chứa dịch lỏng màu vàng
Hình 4.17. Thành ruột mỏng chứa đầy hơi
Hình 4.18. Hạch bẹn nông sưng to Hình 4.19. Thận xuất huyết điểm
4.2.3. Bệnh tích vi thể chủ yếu của lợn Yorkshine mắc PEDV
Nghiên cứu các đặc điểm gây bệnh vi thể có vai trò quan trọng trong việc nghiên cứu bệnh lý học, có thể giúp hiểu đƣợc đích tác động của virus cũng nhƣ các tổn thƣơng bệnh lý ở cấp độ mô tế bào.
Các cơ quan có bệnh: Phổi, gan, lách, thận, tim, ruột và hạch đƣợc lấy để quan sát bệnh tích vi thể. Kết quả nghiên cứu các tổn thƣơng vi thể của lợn mắc PEDV đƣợc trình bày ở bảng 4.9.
Bảng 4.9. Biến đổi bệnh tích vi thể ở một số cơ quan của lợn con theo mẹ mắc PEDV
STT Cơ quan Tổn thƣơng vi thể Xuất huyết (n=30) Sung huyết (n=30) Thoái hóa tế bào (n=30) Hoại tử tế bào (n=30) Thâm nhiễm tế bào viêm (n=30) Dƣơng tính Tỷ lệ % Dƣơng tính Tỷ lệ % Dƣơng tính Tỷ lệ % Dƣơng tính Tỷ lệ % Dƣơng tính Tỷ lệ % 1 Dạ dày 22 73,33 24 80,00 18 60,00 18 60,00 6 20,00 2 Hạch ruột 18 60,00 30 100 20 66,67 18 60,00 20 66,67 3 Ruột 22 73,33 24 80,00 12 40,00 12 40,00 22 73,33 4 Phổi 6 20,00 24 80,00 8 26,67 6 20,00 24 80,00 5 Gan 12 40,00 10 33,33 18 60,00 12 40,00 12 40,00 6 Thận 6 20,00 6 20,00 24 80,00 4 20,00 18 60,00 7 Lách 12 60,00 10 33,33 6 30,00 4 20,00 8 40,00 8 Tim 4 13,33 4 13,33 2 6,67 6 20,00 6 20,00
Từ kết quả ở bảng 4.9 cho thấy quá trình tổn thƣơng ở hạch, phổi, hạch ruột, gan, thận chủ yếu là sung huyết và xuất huyết, thâm nhiễm tế bào viêm và hoại tử tế bào.
Ruột: Ruột xuất huyết (73,33%), sung huyết nặng (80%), lông nhung bị gãy nát thành từng mảng có chỗ lông nhung bị rụng gần nhƣ niêm mạc ruột ở đó bị bào mòn, tế bào biểu mô bị thoái hóa (40%). Thâm nhiễm tế bào viêm chiếm 73,33% có nhiều bạch cầu đa nhân trung tính. Các tổn thƣơng trên ruột đều rất điển hình.
Dạ dày: Dạ dày có các tổn thƣơng sung huyết (80%), xuất huyết (73,33%), thoái hóa tế bào (60%). Các lông nhung ở dạ dày bị gãy nát, biểu mô bị bong tróc thành từng mảng, có nơi biểu mô bị bào mòn, tế bào biểu mô bị thoái hóa. Cũng giống nhƣ ruột, dạ dày cũng có hiện thâm nhiễm tế bào nhƣng không nhiều chỉ chiếm 20% ở những vị trí bị thâm nhiễm tế bào tập trung bạch cầu đa nhân trung tính.
Hạch ruột: Các hiện tƣợng biến đổi bệnh lý trên hạch chiếm tỷ lệ tƣơng đối cao hiện tƣợng hạch sung huyết (100%), thoái hóa tế bào, thâm nhiễm tế bào viêm cùng chiếm 66,67%, bên cạnh đó là hoại tử tế bào và xuất huyết chiếm 66,67%. Các tế bào lympho bị thoái hóa và thâm nhiễm tế bào viêm là các tế bào thực bào đƣợc minh họa ở hình, đặc biệt trong tế bào chất thƣờng chứa hạt nhỏ, thể vùi.
Hiện tƣợng thoái hóa tế bào mô hạch lan tràn ở miền vỏ hạch lympho trong hầu hết các tiêu bản. Ngoài ra, có sự xuất hiện của tế bào khổng lồ nhiều nhân hay còn gọi là thể hợp bào, xuất hiện các tế bào khổng lồ cũng là nguyên nhân dẫn tới việc khó khăn khi tìm các tế bào miễn dịch đa nhân trung tính, đơn nhân lớn, lympho bào, tƣơng bào.
Gan: Tế bào gan bị thoái hóa và thâm nhiễm tế bào viêm khá đặc trƣng. Từ bảng 4.9 cho thấy các biến đổi bệnh tích vi thể của gan chủ yếu là thoái hóa tế bào chiếm cao nhất 60% trong các hiện tƣợng biến đổi bệnh lý khác. Các hiện tƣợng thâm nhiễm tế bào, tăng sinh tế bào các nang lympho đều chiếm tỷ lệ thấp hơn là 40%. Trong khi đó sung huyết tại gan chiếm 33,33%.
Phổi: Phổi bị sung huyết và thâm nhiễm tế bào viêm, cả hai bệnh tích này chiếm tỷ lệ cao nhất tới 80%, thoái hóa tế bào (26,67%), xuất huyết, hoại tử tế bào ở phổi không nhiều chỉ chiếm 20%. Khi lợn mắc PED thấy rõ hiện tƣợng
sung huyết ở phổi, các mạch quản dãn rộng chứa đầy hồng cầu, hồng cầu tràn ngập vào lòng phế quản, ngoài ra còn tăng sinh tế bào và có hiện tƣợng hoại tử tế bào xơ, phù kẽ phổi ở một vài điểm trên tế bào chiếm tỷ lệ thấp. Thâm nhiễm tế bào đơn nhân lớn, bạch cầu đa nhân trung tính, lâm ba cầu.
Tim: Bệnh tích trên tim chủ yếu là thoái hóa cơ tim, cơ tim bị viêm, ngoài ra còn có hiện tƣợng thâm nhiễm tế bào viêm, hoại tử tế bào chiếm tỷ lệ 20%, còn lại các tổn thƣơng sung huyết, xuất huyết đều chiếm 13,33%, thoái hóa tế bào không đáng kể, cơ tim giãn rộng theo thời gian.
Thận: Khác với gan ở thận còn có các hiện tƣợng bệnh lý khác biệt nhƣ biến đổi kẽ thận, xuất huyết và xâm nhiễm chiếm tới 20%, cùng với các bệnh tích đặc trƣng trên thận nhƣ: Thâm nhiễm tế bào viêm (60%), thoái hóa tế bào chiếm 80%, một số tiêu bản thấy ống thận bị hoại tử, kẽ thận xuất huyết có nhiều hồng cầu tập trung, tế bào viêm thâm nhiễm chèn ép các ống thận, có các dạng tế bào thƣờng gặp nhƣ lympho, tổ chức tế bào (histyocyte), lâm ba cầu, có sự hoại tử xảy ra nhƣng không đáng kể.
Lách: Ít có biến đổi bệnh lý, một số tiêu bản có hiện tƣợng sung huyết, thâm nhiễm tế bào viêm.
MỘT SỐ HÌNH ẢNH BỆNH TÍCH VI THỂ
Hình 4.22. Biểu mô dạ dày đứt nát (HEx10)
Hình 4.23. Ruột non sung huyết, xuất huyết (HEx10)
Hình 4.24. Phổi sung huyết và thâm
nhiễm tế bào viêm (HE x 10)
Hình 4.25. Lông nhung ruột đứt nát (HE x 10)
Hình 4.26. Thâm nhiễm tế bào viêm ở ruột (HE x 40)
Hình 4.27. Thận sưng huyết, thâm nhiễm tế bào (HE x 10)
PHẦN 5. KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ
5.1. KẾT LUẬN
Từ kết quả nghiên cứu này có thể đƣa ra một số kết luận sau: 1. Đặc tính sinh học
- Phân lập thành công 4 chủng virus PEDV từ 15 mẫu lợn đƣợc chẩn đoán dƣơng tính bằng kỹ thuật RT-PCR. Môi trƣờng tế bào Vero là dòng tế bào thích hợp cho sự nhân lên của virus. Để phân lập thành công virus PEDV cần bổ sung môi trƣờng phân lập thích hợp đó là môi trƣờng DEME có 10% TPB, 10mg/ml trypsin và 0,02% dịch chiết nấm men. Bệnh tích tế bào đƣợc biểu hiện rõ với các đám tế bào bị dung giải màng tế bào, nhân tế bào co cụm lại với nhau hình thành các thể hợp bào, quan sát rõ bằng kính hiển vi soi ngƣợc.
- Các chủng virus PEDV phân lập đƣợc có hiệu giá từ 104.25/25µl đến 105.50/25µl.
- Nghiên cứu khả năng gây bệnh tích tế bào bắt đầu xuất hiện sau 24 giờ gây nhiễm là sớm nhất. Tế bào sau gây nhiễm sẽ bị phá hủy hoàn toàn sau 84 giờ gây nhiễm.
2. Đặc điểm gây bệnh
- Các lợn Yorkshire mắc PEDV có các triệu chứng lâm sàng: lợn ủ rũ, mệt mỏi, bỏ ăn, bỏ bú, lợn bị tiêu chảy nặng, phân lỏng màu vàng ở lợn con (100%), gầy sút giảm cân (80,00%), nằm chồng đống, thích nằm trên bụng mẹ (46,67%).
- Các bệnh tích đại thể thƣờng gặp ở các cơ quan khi lợn mắc PEDV chủ yếu gặp ở đƣờng tiêu hóa: ruột căng phồng chứa đầy dịch vàng bên trong, có khi chứa hơi căng mọng, thành ruột mỏng (100%), có khi sung huyết ruột, gan sƣng, túi mật căng, dịch mật đặc (86,67%). Dạ dày chứa thức ăn không tiêu, sữa vón đông 100%. Một số cơ quan khác cũng có bệnh tích nhƣng không phải đặc trƣng của bệnh.
- Một số bệnh tích vi thể của bệnh: dạ dày xuất huyết (73,33%,), sung huyết tập trung nhiều ở các cơ quan nhƣ hạch ruột (100%), ruột, phổi, dạ dày đồng chiếm (80,00%). Thâm nhiễm tế bào là tổn thƣơng chiếm tỷ lệ lớn trên các cơ quan: Hạch ruột (66,67%), ruột (73,33%), phổi (80,00%). Thoái hóa tế bào
trên các cơ quan nhìn chung có tỷ lệ thấp hơn, đặc biệt tập trung trên thận (80%), hạch ruột (66,67%). Hoại tử tế bào xảy ra ít hơn trên các cơ quan (20 – 60%).
5.2. KIẾN NGHỊ
Cần nghiên cứu các đặc điểm triệu chứng lâm sàng và các bệnh tích đại thể của bệnh PEDV trên lợn ở các độ tuổi khác nhau.
Tiếp tục ứng dụng phản ứng RT-PCR với các loại mẫu bệnh phẩm khác nhƣ nƣớc bọt, thực quản… để chẩn đoán phát hiện sớm virus khi lợn mắc PEDV từ đó đƣa ra những biện pháp điều trị bệnh đạt hiệu quả cao giảm thiệt hại cho