- Máy xét nghiệm các thông số máu tự động SN195, Nhật Bản; máy cắt lát mô bệnh học Microtome Sartorius Werke (Đức); máy đo điện tâm đồ Cardisuny 501b35H
Chương III KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU
3.1. Đặc điểm sinh học của các đại diện thuộc chi vi tảo biển Schizochytrium3.1.1. Phân lập các chủng Schizochytrium spp. từ các mẫu lá cây thu thập ở vùng 3.1.1. Phân lập các chủng Schizochytrium spp. từ các mẫu lá cây thu thập ở vùng rừng ngập mặn ở Việt Nam
Chúng tôi đã tiến hành thu thập mẫu lá cây rơi rụng, đang trong giai đoạn phân hủy tại các vùng rừng ngập mặn thuộc 5 tỉnh gồm Tiên Yên- Quảng Ninh, Diêm Điền- Thái Bình, Tĩnh Gia-Thanh Hóa, Thị Nại- Bình Định và đảo Phú Quốc- Kiên Giang làm nguyên liệu để phân lập các chủng thuộc chi Schizochytrium. Một số đặc điểm về nơi thu mẫu được trình bày ở bảng 3.1.
Bảng 3.1. Một số đặc điểm của vị trí thu mẫu
Ghi chú: 1: Độ mặn của nước nơi các mẫu lá được thu thập; 2
: Các mẫu lá thuộc họ Đước (Rhizophoraceae) hoặc rong, cỏ biển đang trong giai đoạn phân hủy
Khuẩn lạc của Schizochytrium có màu trắng sữa, khi quan sát dưới kính hiển vi quang học cho thấy các tế bào hình cầu xếp sát nhau, mạng lưới ngoại chất phát triển phía rìa ngoài của nhóm tế bào (Hình 3.1 A, B). Từ 120 mẫu lá thu thập, chúng tôi đã phân lập được 33 chủng Schizochytrium spp. Các chủng phân lập được đều
Địa điểm thu mẫu Tọa độ điểm thu mẫu Độ mặn (‰)1 Mẫu lá2 Tiên Yên-Quảng Ninh 21018’42,45”N
107025’16,91”E
26 Màu nâu và đen
Diêm Điền- Thái Bình 20035’12,96”N 106036’29,22’’E
22 Màu nâu và đen
Tĩnh Gia- Thanh Hoá 19035’12,96’’N 106036’29,22’’E
25 Màu nâu và đen
Thị Nại- Bình Định 130 49’07,57’’N 1090 15’30,11’’E
15-26 Màu nâu và đen
Phú Quốc-Kiên Giang 10000’56,44’’N 104000’31,79’’E
sinh ra động bào tử hai roi; các tế bào trưởng thành phân đôi liên tiếp tạo thành 4, 8 hoặc cụm tế bào (cluster).
3.1.2. Tuyển chọn một số chủng thuộc chi Schizochytrium tiềm năng cho việc sản xuất DHA xuất DHA
Việc tuyển chọn các chủng thuộc chi Schizochytrium tiềm năng cho việc sản xuất DHA trước tiên được dựa trên khả năng sinh trưởng (tạo sinh khối) và hàm lượng lipit tích lũy ở các điều kiện nuôi trong phòng thí nghiệm. 33 chủng sau khi phân lập, làm sạch được nuôi riêng rẽ trên môi trường lỏng M1 để xác định các thông số như mật độ tế bào, khối lượng khô và hàm lượng lipit sau 5 ngày nuôi cấy. Kết quả được trình bày trên bảng 3.2.
Như vậy, chúng tôi chọn được 4 chủng tiềm năng có khả năng sinh trưởng và hàm lượng lipit tổng số cao trên tổng số 33 chủng đã phân lập là PQ6, PQ7, TH16 và TB17 để tiến hành những nghiên cứu sâu hơn. Lượng sinh khối thu được vào
Hình 3.1. Khuẩn lạc nuôi cấy trên đĩa thạch (A) và chụp dưới kính hiển vi
quang học (B, độ phóng đại 100 X) của chủng Schizochytrium sp. PQ6, PQ7,
TH16 và TB17 (mũi tên chỉ mạng lưới nội chất)
A
khoảng 11,64-18,60 g khô/l và hàm lượng lipit tổng số dao động từ 30,44-38,67% khối lượng khô.
Bảng 3.2. Sinh trưởng và hàm lượng lipít tổng số của các chủng thuộc chi
Schizochytrium đã phân lập
Chủng Mật độ tế bào
(x 106 TB/ml)
Sinh khối khô (g/l)
Hàm lượng lipít (% KLK) Tiên Yên- Quảng Ninh
QN2 30,98 ± 0,56 10,76 ± 0,01 20,52 ± 0,07
QN15 31,12 ± 0,49 11,87 ± 0,02 19,34 ± 0,05
Diêm Điền- Thái Bình
TB11 20,48 ± 0,78 10,19 ± 0,02 17,56 ± 0,03 TB16 18,29 ± 0,67 9,81 ± 0,01 25,83 ± 0,05 TB17 39,31 ± 0,71 18,60± 0,03 35,75 ± 0,12 TB18 15,95 ± 0,40 8,91 ± 0,02 23,43 ± 0,04 TB23 17,17 ± 0,39 10,04 ± 0,04 13,85 ± 0,05 TB25 14,32 ± 0,37 8,93 ± 0,02 13,98 ± 0,06 TB27 15,34 ± 0,45 8,95 ± 0,01 12,54 ± 0,04 TB30 14,96 ± 0,39 9,96 ± 0,01 12,42 ± 0,03
Tĩnh Gia- Thanh Hóa
TH9 30,57 ± 0,83 10,87 ± 0,01 19,08 ± 0,02 TH11 36,00 ± 0,97 13,60 ± 0,03 21,78 ± 0,05 TH12 33,75 ± 0,51 11,10 ± 0,04 14,23 ± 0,05 TH13 35,60 ± 1,01 13,25 ± 0,05 22,61 ± 0,04 TH14 33,15 ± 0,83 12,25 ± 0,04 20,86 ± 0,07 TH16 35,63 ± 0,95 16,60 ± 0,07 30,44 ± 0,10 TH17 35,90 ± 0,93 13,14 ± 0,03 16,48 ± 0,04 TH21 33,25 ± 0,76 11,49 ± 0,01 16,67 ± 0,12 TH22 23,23 ± 0,36 8,17 ± 0,01 13,12 ± 0,07 TH23 23,92 ± 0,39 8,98 ± 0,02 15,26 ± 0,04
Thị Nại- Bình Định TN1 24,06 ± 0,67 8,96 ± 0,02 11,67 ± 0,02 TN2 28,17 ± 0,59 9,25 ± 0,02 10,45 ± 0,02 TN4 38,40 ± 0,67 12,81 ± 0,03 12,23 ± 0,04 TN5 33,30 ± 0,93 11,83 ± 0,02 11,34 ± 0,02 TN6 28,97 ± 0,85 9,32 ± 0,01 14,39 ± 0,05 TN12 30,32 ± 0,96 10,65 ± 0,03 12,57 ± 0,03 TN13 30,80 ± 0,76 10,38 ± 0,03 14,01 ± 0,03 TN14 30,88 ± 0,39 10,02 ± 0,01 15,60 ± 0,05 TN15 33,88 ± 0,35 12,32 ± 0,04 11,07 ± 0,02 TN16 31,25 ± 0,98 10,37 ± 0,02 14,06 ± 0,03 TN17 32,47 ± 0,67 11,24 ± 0,05 10,97 ± 0,02
Phú Quốc- Kiên Giang
PQ6 35,35 ± 0,72 11,64 ± 0,02 38,67 ± 0,07
PQ7 32,85 ± 0,66 17,99 ± 0,03 37,07 ± 0,06
Chú thích: sinh trưởng và hàm lượng lipit của các chủng được xác định sau 5 ngày nuôi cấy trên môi trường lỏng; KLK: khối lượng khô
3.1.3. Nghiên cứu đặc điểm sinh học cơ bản của một số chủng thuộc chi Schizochytrium tiềm năng Schizochytrium tiềm năng
3.1.3.1. Một số đặc điểm hình thái điển hình
Nhìn chung, các tế bào của 4 chủng được chọn là PQ6, PQ7, TH16 và TB17 đều có tế bào hình cầu, kích thước khác nhau dao động từ 6,0 ± 0,5 đến 20±1,0 µm. Động bào tử có hai roi lệch, hình ovan. Riêng chủng TB17 có xuất hiện tế bào dạng amip. Khi nuôi cấy trên môi trường thạch, cả 4 chủng đã chọn ra ở trên đều có mạng lưới ngoại chất rất phát triển, khuẩn lạc lớn. Các tế bào sinh dưỡng trưởng thành đều trải qua quá trình phân đôi liên tiếp từ 1 tạo thành 4, 8 tế bào hoặc thành cụm tế bào (cluster). Vì vậy, sơ bộ chúng tôi xác định chúng thuộc chi Schizochytrium. Hình 3.2 A là ảnh chụp tế bào của các chủng PQ6, PQ7, TH16 và TB17 chụp dưới kính hiển
vi quang học và điện tử quét (SEM). Hình 3.2.B là 1 số giai đoạn trong chu trình sống của chủng PQ6.
Hình 3.2A. Hình thái tế bào chụp dưới kính hiển vi điện tử quét- SEM (A) và kính hiển vi quang học ở độ phóng đại 400 lần (B)
PQ6 PQ7 x 7500 x 5000 TB17 x 5000 x 5000 TH16 A B
Hình 3.2B. Một số giai đoạn trong chu trình sống của chủng PQ6