- Máy xét nghiệm các thông số máu tự động SN195, Nhật Bản; máy cắt lát mô bệnh học Microtome Sartorius Werke (Đức); máy đo điện tâm đồ Cardisuny 501b35H
2.5.12. Nghiên cứu sử dụng sinh khối tảo S mangrovei PQ6 làm giàu luân trùng (Brachionus plicatilis) và Artemia
(Brachionus plicatilis) và Artemia
2.5.12.1. Xác định lượng tảo và thời gian làm giàu thích hợp cho luân trùng và Artemia
Thí nghiệm gồm 7 công thức với các nồng độ sinh khối tảo khô khác nhau bao gồm 50, 100, 150, 200, 250, 300, 350 mg/l. Ở tất cả các công thức thì luân trùng và
Artemia nauplii được làm giàu ở thời điểm 7 h và 15 giờ. Thí nghiệm được lặp lại 3 lần.
Luân trùng và Artemia được nuôi trong xô nhựa 10 lít với mật độ làm giàu tương ứng là 1000 cá thể/ml và 300 cá thể/ml, ở nhiệt độ từ 27÷29oC; độ mặn 28÷30‰; sục khí liên tục. Sau các thời điểm làm giàu, sinh khối luân trùng và Artemia sẽ được thu lại bằng lưới gas với kích thước lỗ lưới tương ứng là 50 µm; 250 µm để loại bỏ chất bẩn và thức ăn thừa để xác định hàm lượng lipit, thành phần và hàm lượng các axít béo.
2.5.12.2. So sánh việc sử dụng sinh khối S. mangrovei PQ6 tươi, khô và chất cường
hoá Golden Power trong việc làm giàu Artemia
Với nồng độ tảo và thời gian làm giàu tối ưu, trong thí nghiệm này chúng tôi sử dụng chất làm giàu có nguồn gốc từ dầu cá có tên thương mại là Golden Power do Hà Lan sản xuất làm đối chứng dương - A1 (0,3 g/l). Đối chứng âm-A2 là Artemia không được làm giàu. Các công thức thí nghiệm sử dụng sinh khối tươi chủng PQ6 – A3 (1,5 g/l) và sinh khối khô chủng PQ6 (sấy ở 105oC) – A4 (0,3 g/l).
Bào xác của Artemia được tiến hành ấp nở theo hướng dẫn của nhà sản xuất (cân 3 g bào xác cho vào 1 lít nước biển có độ mặn 28‰, sục khí liên tục). Sau khi
Artemia được nở ra, dùng vợt có kích thước 100 µm thu sinh khối và chuyển sang
nước biển sạch có độ mặn 28‰, sau 6 giờ tiếp theo sử dụng vợt thu sinh khối Artemia
sang nước biển sạch để chia vào các lô thí nghiệm. Sinh khối Artemia được chia đều ra các lô thí nghiệm như trên, sau đó bổ sung Golden Power và sinh khối chủng PQ6 theo công thức thí nghiệm (Golden Power và sinh khối chủng PQ6 đều được trà qua lưới lọc có kích thước mắt lưới 65 µm). Thí nghiệm được tiến hành ở 28oC, sục khí liên tục, thời gian làm giàu 15 giờ. Sau 15 giờ, Artemia được thu sinh khối để phân tích hàm lượng lipít tổng số và thành phần axit béo.
2.5.12.3. So sánh việc sử dụng sinh khối S. mangrovei PQ6 tươi, men bánh mì và vi tảo
biển quang tự dưỡng
Thí nghiệm nuôi và làm giàu luân trùng: Trong thí nghiệm này, chúng tôi tiến
được nuôi bằng vi tảo biển quang tự dưỡng và men bánh mì. Ở lô 5 và 6, luân trùng được làm giàu bằng men bánh mì và sinh khối chủng PQ6. Cách bố trí thí nghiệm được chỉ ra ở bảng 2.2. Mật độ luân trùng được xác định bằng buồng đếm Sedgwick- Rafter.
Bảng 2.2. Sơ đồ thí nghiệm nuôi và làm giàu luân trùng
Lô thí nghiệm Lô 1 Lô 2 Lô 3 Lô 4 Lô 5 Lô 6
Mật độ luân trùng ban đầu
(ct/ml) 10 10 10 10 400 400
Men bánh mì
(g/ triệu luân trùng ngày) - - 0,5 1 1 -
Mật độ tảo
(tế bào/luân trùng/ngày) 40000 40000 20000 - - -
Schizochytrium (g sinh khối
tươi/ triệu luân trùng ) - - - - - 1
Chaetoceros gracilis + - + - - - Chlorella sp. + - + - - - Isochrysis galbana - + + - - - Nannochloropsis occulata - + + - - - Độ mặn 28‰ 28‰ 28‰ 28‰ 28‰ 28‰ Nhiệt độ (oC) 28 28 28 28 28 28 Sục khí + + + + + +
Thời gian nuôi
hoặc làm giàu 7 ngày 7 ngày 7 ngày 7 ngày 7 giờ 7 giờ
Ghi chú: “-”: không sử dụng; “+”: có sử dụng
2.5.12.4. Sử dụng sinh khối S. mangrovei PQ6 làm giàu Artemia và luân trùng làm
Phương pháp làm giàu luân trùng và Artemia bằng sinh khối tảo Schizochytrium:
- Đối với luân trùng: Mật độ làm giàu tối ưu là 200 con/ml. Sử dụng 1 g sinh khối tươi chủng PQ6cho 1.000.000 cá thể luân trùng. Lượng tảo sử dụng chia làm 2 lần, mỗi lần cách nhau 6 giờ. Sục khí liên tục, thời gian cường hóa 7 giờ thu sinh khối làm thức ăn cho ấu trùng cá chẽm.
- Đối với Artemia: sinh khối tươi chủng PQ6 được sử dụng để làm giàu Artemia theo tỷ lệ 0,6 g/100.000 con/lít. Lượng tảo được chia 2 lần, cách nhau 6 giờ, sục khí liên tục, sau 15 giờ làm giàu thu sinh khối Artemia làm thức ăn cho ấu trùng cá chẽm.
Làm giàu luân trùng và Artemia bằng A1 DHA Selco:
100% A1 DHASelco +10% dầu mực, xay trong thời gian 1phút. Hỗn hợp được sử dụng để làm giàu luân trùng và Artemia. Đối với luân trùng, thời gian làm giàu là 7 giờ. Artemia được làm giàu 15 giờ trước khi sử dụng cho ấu trùng cá ăn. Sự tương quan giữa mật độ (cá thể/ml) với lượng thức ăn A1 DHA Selco (g) được chỉ ra trên bảng 2.3.
Bảng 2.3. Sự tƣơng quan giữa mật độ (cá thể/ml) với thức ăn A1 DHA Selco (g)
Mật độ (cá thể /ml) A1 DHA Selco (g) <100 0,80 100-150 0,75 150-200 0,70 200-250 0,60 250-300 0,55 300-350 0,50 350-400 0,45 400-450 0,40 450-500 0,35 500-1000 0,30 1000-1500 0,25 >1500 0,20
Bố trí thí nghiệm:
Các lô thí nghiệm được bố trí theo kiểu ngẫu nhiên. Thí nghiệm được bố trí trong bể composit dung tích 1 m3, mật độ ương 60 ấu trùng/lít. Mỗi lô thí nghiệm lặp lại 3 lần:
+/ Lô thí nghiệm: Ấu trùng cá Chẽm được cho ăn bằng luân trùng và Artemia đã được làm giàu bằng sinh khối chủng PQ6;
+/ Lô đối chứng: Ấu trùng cá Chẽm được cho ăn bằng luân trùng và Artemia được làm giàu bằng A1 DHA Selco.
Chế độ chăm sóc và quản lý: Áp dụng theo quy trình ương nuôi cá Chẽm của Trung tâm Quốc gia giống Hải sản miền Trung. Hàng ngày theo dõi nhiệt độ, độ mặn, pH bằng các dụng cụ chuyên dùng.
Các chỉ tiêu theo dõi và đánh giá: - Đo chiều dài của ấu trùng cá Chẽm
Tiến hành lấy mẫu cá 1 tuần/lần, lấy ngẫu nhiên 30 cá thể /bể. Chiều dài của cá được tính là khoảng cách từ mõm cá đến hết đuôi. Khi cá còn nhỏ đo cá bằng trắc vi thị kính, khi cá lớn thì đo bằng thước kẻ có chia vạch đến mm.
Chiều dài ấu trùng được tính theo công thức: L = X * a
Trong đó: L - chiều dài ấu trùng (mm)
X - số vạch lớn đo được trên trắc vi thị kính (vạch)
a - hệ số quy đổi (a = 0,025 nếu đo ở vật kính 40, a = 0,095-vật kính 10, a = 0,25- vật kính 4)
Xác định tỷ lệ sống của ấu trùng giai đoạn 30 ngày tuổi:
TLS (%) =
Nn n
* 100% TLS : Tỷ lệ sống
N : Số lượng cá thả ban đầu
2.5.12.5. Nghiên cứu sử dụng sinh khối S. mangrovei PQ6 làm giàu Artemia làm thức
ăn cho ấu trùng cua xanh (Scylla serrata Forskal, 1775)
Phương pháp làm giàu thức ăn sống và chế độ ăn ở các giai đoạn của ấu trùng
cua xanh: Sinh khối tươi chủng PQ6 được sử dụng làm thức ăn cho Artemia với tỷ lệ
600 mg /105 Artemia, cho ăn 2 lần cách nhau 6 giờ, khí được sục liên tục (DO > 4 ppm). Sau 15 giờ làm giàu, Artemia được dùng làm thức ăn cho ấu trùng cua Xanh. Đối với ấu trùng ở giai đoạn Z1 được ăn Artemia đã được làm giàu bằng sinh khối chủng PQ6 với chế độ ăn 2 lần /ngày vào lúc 6 giờ và 18 giờ. Mật độ ấu trùng cua xanh ban đầu thí nghiệm là 200-250 con/lít. Đối với ấu trùng ở giai đoạn Z2-Z4 được cho ăn Artemia naupli làm giàu bằng sinh khối chủng PQ6 với chế độ ăn 2 lần /ngày vào lúc 6 giờ và 18 giờ. Ấu trùng giai đoạn Z5 được ăn thức ăn chế biến.
Phương pháp định lượng: Trước khi định lượng tạm thời tắt sục khí vài giây để
tránh sự khuấy động quá mạnh. Dùng ống thu mẫu nhúng thẳng từ trên tầng mặt đến gần sát đáy để đảm bảo lấy mẫu được theo tầng nước;
Phương pháp đo kích thước ấu trùng Zoea: Tiến hành lấy mẫu ấu trùng Zoea ở
mỗi giai đoạn, sau khi cố định bằng dung dich lugol, chọn ngẫu nhiên 30 ấu trùng/mỗi giai đoạn có cơ thể nằm trên 1 đường thẳng để đo. Chiều dài của ấu trùng Zoea được tính là khoảng cách từ gốc gai trán đến cuối telsol khi thân ấu trùng Zoea nằm trên đường đường thẳng.
Cách xác định ấu trùng cua xanh chuyển giai đoạn: Lấy mẫu ấu trùng, quan sát
ấu trùng dưới kính hiển vi quang học. Nếu thấy tỷ lệ ấu trùng chuyển giai đoạn > 50% thì khi đó mới xác định tỷ lệ chuyển giai đoạn và tỷ lệ sống sót của ấu trùng cua xanh trong từng giai đoạn.
Xác định tỷ lệ sống sót của ấu trùng cua xanh trong từng giai đoạn: được tính
theo công thức sau:
TLS (%) = n/N * 100%
TLS: Tỷ lệ sống; N: Số lượng ấu trùng ban đầu; n: Số lượng ấu trùng mỗi giai đoạn
Thời gian chuyển giai đoạn (ngày): được tính theo công thức sau:
T : Thời gian chuyển giai đoạn (ngày) ; T1: Thời gian ấu trùng ở giai đoạn đầu (ngày); T2: Thời gian ấu trùng ở giai đoạn sau (ngày).
Cách lấy mẫu để đếm ấu trùng trong từng giai đoạn: mẫu được lấy bằng ống
thu mẫu ở các tầng nước khác nhau, ở các vị trí xung quanh bể. Sau đó sục khí đều cho ấu trùng phân tán đều. Tiếp theo tắt sục khí và lấy 100 ml mẫu và đếm số lượng ấu trùng bằng mắt thường.
- Công thức tính chiều dài ấu trùng : L= X*a
Trong đó: L – chiều dài ấu trùng (mm) ; X – số vạch lớn đo được trên trắc vi thị kính (vạch) ; A – hệ số quy đổi (a = 0,025 nếu đo ở vật kính 40, a= 0,095 nếu đo ở vật kính 10, a= 0,25 nếu đo ở vật kính 4).