a. Hoạt tính kháng vi sinh vâ ̣t kiểm đi ̣nh
Hoa ̣t tính kháng vi sinh vâ ̣t kiểm đi ̣nh được thực hiê ̣n dựa trên phương pháp dãy nồng đô ̣ trên môi trường lỏng. Đây là phương pháp thử hoa ̣t tính kháng vi sinh vâ ̣t kiểm đi ̣nh và nấm nhằm đánh giá mức đô ̣ kháng vi khuẩn ma ̣nh yếu của các mẫu thử thông qua các giá tri ̣ thể hiê ̣n hoa ̣t tính là MIC (minimum inhibitor concentration - nồng độ tối thiểu ức chế), IC50 (50% inhibitor concentration - nồng độ ức chế 50%), MBC (minimum bactericidal concentration - nồng độ tối thiểu diê ̣t khuẩn).
b. Các chủng vi sinh vâ ̣t kiểm đi ̣nh
Bao gồm những vi khuẩn và nấm kiểm đi ̣nh gây bê ̣nh ở người:
- Bacillus subtilis (ATCC 6633): Là trực khuẩn gram (+), sinh bào tử, thường không gây bê ̣nh
- Staphylococcus aureus (ATCC 13709): Cầu khuẩn gram (+) gây mủ các vết thương, vết bỏng, gây viêm ho ̣ng, nhiễm trùng có mủ trên da và các cơ quan nô ̣i ta ̣ng.
- Lactobacillus fermentum (N-4): Vi khuẩn gram (+), là loa ̣i vi khuẩn đường ruô ̣t lên men có ích, thường có mă ̣t trong hê ̣ tiêu hóa của người và đô ̣ng vâ ̣t.
- Escherichia coli (ATCC 25922): Vi khuẩn gram (-) gây một số bê ̣nh về đường tiêu hóa: Viêm da ̣ dày, viêm đa ̣i tràng, viêm ruô ̣t, viêm ly ̣ trực khuẩn.
- Pseudomonas aeruginosa (ATCC 15442): Vi khuẩn gram (-), trực khuẩn mủ xanh, gây nhiễm trùng huyết, các nhiễm trùng ở da và niêm ma ̣c, gây viêm đường tiết niê ̣u, viêm màng não, màng trong tim, viêm ruô ̣t.
- Salmonella enterica: Vi khuẩn gram (-), vi khuẩn gây bệnh thương hàn, nhiễm trùng đường ruô ̣t ở người và đô ̣ng vâ ̣t.
- Candida albicans (ATCC 10231): Là nấm men, thường gây bê ̣nh tưa lưỡi ở trẻ em và các bê ̣nh phu ̣ khoa.
c. Môi trường nuôi cấy
MHB (Mueller-Hinton Broth), MHA (Mueller-Hinton Agar); TSB (Tryptic Soy Broth); TSA (Tryptic Soy Agar) cho vi khuẩn; SDB (Sabourand - 2% dextrose broth) và SA (Sabourand - 4% dextrose agar) cho nấm.
2.2. Hóa chất và thiết bị
2.2.1. Hóa chất
- Các hóa chất dùng trong quá trình nghiên cứu chủ yếu là hexane, methanol, ethyl acetate, dichloromethan, acetone, FeCl3, Na2SO4TT...
- Sắc ký bản mỏng được thực hiện với các bản mỏng được tráng sẵn silicagel 60 F254 trên lá nhôm của hãng Merck.
2.2.2. Thiết bị
- Đèn soi tử ngoại CM - 24 gồm đèn hai bước sóng 254 nm và 365 nm. - Máy cô quay chân không EYELA N - 1200AV - WD Nhật Bản. - Bể siêu âm Elmasonic S 30H.
- Phổ khối lượng được đo trên máy LC-MS-Trap-SL tại Viện Hóa học, Viện hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
- Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1HNMR, 13C NMR, DEPT, được đo trên máy cộng hưởng từ hạt nhân NMR Spectromter, BRUCKER 500 MHz tại Viện Hóa học, Viện hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam.
- Cột sắc ký.
Hình 2.3. Buồng soi UV Hình 2.4. Máy cô quay chân không
2.3. Thực nghiệm
2.3.1. Nguyên liệu
Thu thập mẫu: lá của cây Lá giang tươi được thu hái ở xã Phước Thuận, huyện Tuy Phước, tỉnh Bình Định vào tháng 9/2018. Lá được thu hái phải còn xanh nguyên không bị úa vàng.
Xử lý mẫu: Cắt bỏ phần héo úa, dập nát, đem rửa sạch để ráo nước, phơi dưới ánh nắng mặt trời rồi đem sấy nhiệt độ từ 40 - 50oC trong 48 giờ đến
khô. Lượng lá khô được xay nhỏ rồi rây (kích thước lỗ rây khoảng (0,5 - 1 mm). Phần không lọt rây tiếp tục đem xay và rây lại đến khi đạt kích
thước cần thiết. Quá trình này lặp đi lặp lại đến khi không còn lá trên rây.