Cao chiết MeOH (114,12 g) được hòa trong 250 mL nước cất và chiết với Hx. Quá trình chiết hexane được lặp lại 3 lần (1 lần × 100 mL) để đảm bảo chất tan trong Hx được chiết hết với Hx (kiểm tra bằng TLC). Phần dịch nước được chiết 4 lần với EA (4 lần × 60 mL) để đảm bảo chất được chiết hết với EA (kiểm tra bằng TLC). Gộp các dịch chiết EA lại rồi cô quay chân không loại dung môi thu được 10,031 g cao chiết EA.
Tiến hành đánh giá sơ bộ thành phần các chất có trong cao chiết EA qua phương pháp sắc ký bản mỏng với hệ dung môi Hx : EA = 2 : 0,3. Bản mỏng cho hiện với thuốc hiện Ce(SO4)2, kết quả được trình bày trong Chương 3.
Hình 2.7. Chiết dịch nước với dung môi EA của lá cây Lá giang
2.3.4.Định tính các lớp chất
Định tính triterpenoid
Thí nghiệm: Dùng phản ứng Liebermann - Burchard.
Thử trong ống nghiệm: Cho vào ống nghiệm 1 mL anhydride acetic, 1 mL chloroform, làm lạnh ống nghiệm rồi thêm 1 giọt acid H2SO4 đặc. Cho tiếp vào một mẫu nhỏ cao chất ở dạng rắn hoặc pha loãng trong chloroform. Nếu dung dịch đổi màu thành xanh dương, lục, cam hoặc đỏ thì chứng tỏ có triterpenoid.
Định tính steroid
Thí nghiệm: Dùng phản ứng Salkowski. Hòa tan mẫu thử (1 - 2 mg) trong 1 mL chloroform và nhỏ thêm 1 mL H2SO4 đặc. Nếu dung dịch đổi sang màu đỏ đậm, xanh, xanh - tím thì chứng tỏ mẫu có chứa steroid.
Định tính alkaloid
Thí nghiệm: Dùng thuốc thử Wagner. Hòa tan 1,27 g I2 và 2 g KI trong 20 mL nước cất. Thêm nước cho đủ 100 mL. Nhỏ vài giọt thuốc thử Wagner vào dung dịch acid loãng có chứa mẫu. Nếu có alkaloid sẽ xuất hiện kết tủa màu nâu.
Định tính flavonoid
Thí nghiệm: Hòa tan 0,1 g cặn chiết vào 5 mL ethanol trong ống nghiệm, sau đó rót một nữa sang ống nghiệm khác để đối chiếu. Nhỏ từng giọt H2SO4
đặc vào một trong hai ống nghiệm. Flavon và flavonol cho màu vàng đậm đến da cam, chalcon và aurone cho màu đỏ, flavonon cho màu từ cam đến đỏ.
Định tính các hợp chất phenol
Thí nghiệm: dùng thuốc thử FeCl3. Nhỏ từng giọt dung dịch FeCl31% trong ethanol vào ống nghiệm chứa mẫu dịch chiết. Nếu dung dịch xuất hiện màu xanh đen chứng tỏ dịch chiết có chứa các hợp chất phenol.