Tiêu chí quan trọng để lựa chọn chủng làm ứng viên để sản xuất vaccine là khả năng phát triển thích ứng và nhân lên của virus PRRS trên môi trường nuôi cấy tế bào dòng Marc 145. Thông qua đánh giá độ biến động về trị số TCID50 từ đó xác định được thời điểm thu virus thích hợp là thời điểm có hiệu giá virus cao nhất và xây dựng đồ thị sinh trưởng của virus. Chủng virus 02HY được gây nhiễm trên môi trường tế bào Marc 145 một lớp với liều 0,1MOI, ủ ở 37oC, 5% CO2. Sau đó, tại mỗi thời điểm: 24, 48, 60, 72, 84, 96, 108, 120 giờ sau khi gây nhiễm tiến hành thu virus, xác định hiệu giá virus (TCID50) thu được và dựng đồ thị sinh trưởng của virus, đường biểu diễn sự nhân lên của virus dựa trên biến là Log10 TCID50/ml của virus ở mỗi thời điển thu virus khác nhau.
Bảng 3.6. Hiệu giá virus thu được tại các thời điểm thu hoạch Thời điểm thu
hoạch virus (giờ) 24 36 48 60 72 80 96 108 120
Hiệu giá virus (10X TCID50/ml) Lần 1 2,30 2,40 3,20 4,30 5,10 5,90 6,30 4,30 2,10 Lần 2 2,10 2,70 3,50 4,70 5,90 6,50 6,90 4,70 1,90 Lần 3 1,70 2,50 3,90 5,10 5,70 6,90 6,70 3,90 1,70 TB 2,03 ±0,30 2,53 ±0,15 3,53 ±0,35 4,70 ±0,40 5,70 ±0,42 6,43 ±0,50 6,63 ±0,30 4,30 ±0,40 1,90 ±0,20
Chú thích: TB là hiệu giá virus trung bình
Từ số liệu hiệu giá virus trung bình Bảng 3.6 xây dựng đường cong sinh
Hình 3.3. Đường cong sinh trưởng của chủng virus 02HY độc lực (Hiệu giá virus trung bình)
Bảng số liệu 3.6 và đồ thị sinh trưởng Hình 3.3 của chủng virus PRRS 02HY độc lực có thể nhận thấy: Sự nhân lên của virus trong môi trường nuôi cấy là một quá trình liên tục, sau gây nhiễm 24 giờ virus bắt đầu quá trình sinh trưởng, hàm lượng virus phát triển tăng dần theo thời gian nhiễm và đạt cao nhất vào khoảng thời điểm từ 80-96 giờ sau gây nhiễm là 106.43TCID50/ml đến 106.63TCID50/ml. Sau thời điểm 96 giờ, hiệu giá virus giảm nhanh chóng. Đến thời điểm 120 giờ sau gây nhiễm hiệu giá virus chỉ còn 101.90TCID50/ml. Từ đó rút ra kết luận: Thời điểm thu hoạch virus tốt nhất là 80-96 giờ sau gây nhiễm. Tại thời điểm này hàm lượng virus đạt cao nhất 106.63TCID50/ml và hiệu giá virus ổn định nhất. Với mục tiêu nghiên cứu, tạo được chủng virus PRRS nhược độc từ chủng virus độc lực cao ở Việt Nam làm giống gốc vaccine PRRS, qua các kết quả nghiên cứu trên chủng virus PRRS 02HY cho thấy: Chủng virus 02HY độc lực đảm bảo các tiêu chí làm ứng viên để tạo giống gốc cho sản xuất vaccine PRRS nhược độc, chủng 02HY được tiếp tục cấy truyền nhiều đời trên tế bào dòng Marc 145 để tạo chủng PRRS nhược độc.
3.2. Nghiên cứu tạo chủng virus PRRS nhược độc bằng cấy truyền liên tiếp 80 đời trên môi trường tế bào Marc 145