i- Biểu thị kết quả
3.1.2.6 Cách đếm Staphylococcus aureus [3]
Ậ- Nguyên lý
Phương pháp đếm Staphylococcus aureus dựa vào việc trang rộng 0.25ml mẫu
thực phấm đồng nhất và các mẫu đã pha lỗng lên mặt thạch Baird-Parker. Mơi trường này cĩ chứa nhiều chất ức chế khác nhau, mà khơng gây trở ngại cho sự phát
triển của S.aureus. Khả năng của S.aureus khử potassium tellurite và thủy phân lịng
đỏ trứng trong mơi trường đưa tới vùng trẻo điên hình chung quanh khuẩn lạc đen
đặc trang cho S.aureus. Đe xác nhận S.aureus ta dùng test làm coagulase. Coagulase
là chất do S.aureus sinh ra làm đơng cục huyết tương người và độn vật.
Cĩ nhiều yếu tố tác động đến sự đáng tin cậy của sự phát hiện và cách đếm S.anreus.
Trong số những yếu tố quan trọng đĩ cĩ trạng thái sinh lý của sinh vật, thế cạnh tranh của S.aureus trong mơi trường mẫu và giới hạn mơi trường dùng đê phân lập. cần lưu ý
rằng sinh lý của S.aureus thay đổi khác nhau.
4- Vi khuân kiêm chứng
Staphylococcus aureus : dương tính phát triên nhiều Staphvỉococcus epidermidis: âm tính
phát triên bị ức chế BacUlus cereus : âm tính, phát triến bị ức chế4- Cách làm
> Chuân bị mẫu thực phấm đồng nhất
> Pha lỗng
> Nuơi cấy: hút 0.25ml dung dịch thực phẩm đồng nhất đã pha lỗng cho lên đĩa
thạch Baữd-Parker đã làm khơ mặt và trang bằng que thủy tinh uốn cong vơ khuấn. Mỗi đậm độ pha lỗng phải cấy hai đĩa.
> ủ ấm: đĩa đã lật ngược được ủ 37°c trong 24h và 48h
> Đem khuẩn lạc ( nghi là S.aureus)
Sau 24h chọn những đĩa cĩ từ 30-300 khuẩn lạc, màu đen và bĩng, rìa trắng hẹp và bao quanh bằng một vùng trong lan vào trong mơi trường. Những khuẩn lạc này đều nghi là
S.aureus .
Đánh dấu vị trí những khuẩn lạc này và ủ lại các đĩa thêm 24h nữa.
Đem tất cả các khuẩn lạc xuất hiện ở trên đã phát triển trong thời gian ủ ấm kéo dài 24h nữa.
Khuẩn lạc của một số chủng của S.aureus cĩ thê bao quanh một vùng đục mờ sau 24h. Một số lớn các chủng cĩ thê biểu hiện sau 48h. Mặt khác S.aureus
Đ[z] án mơn hizlc GVHD:Huỳnh Quang PhMc
ĐI?] tài: Cà Phê Trang
khơng cĩ coagulase cĩ thể biểu hiện sự trong ở quanh khuẩn lạc sau 48h. Cho nên test đơng huyết tương phải tiến hành đối với những khuẩn lạc khả nghi.
Tất cả các khuấn lạc xuất hiện vùng trong sau 24h và sau 48h ủ ấm đều phải test coagulase.
i- Xác định Test coagulase
Chuyển khuẩn lạc khả nghi S.aureus sang ổng nghiệm cĩ chứa 5ml canh thang tim ĩc hãm và ủ ấm 35 — 37°c.
Theo dõi hiện tượng đơng sau 6h. Đơng rõ (+3) dốc ngược ổng mà cục đơng
khơng đơi vị trí là (+4) được coi như phản ứng của S.aureus .
4- Tính tốn khuẩn lạc
Số S.aureus phải tính từ tỷ lệ % của những khuẩn lạc được xác nhận với tống số khuấn lạc nghi ngờ rồi nhân số đĩ với 4 (0.25ml trang lên mặt) với độ pha lỗng.
