i- Biểu thị kết quả
3.1.2.2 Cách đếm Clostridium Perfringens [3]
Ậ- Nguyên lý
Phương pháp này dựa vào đếm Clostridium Perfringens sử dụng kỹ thuật đố đĩa và
mơi trường chọn lọc SPS. Clostridium Perfringem khử sulphite thành sulphide, chất
này phản ứng với sắt trong mơi trường hình thành tủa sắt đen làm cho khuẩn lạc
Clostridium xuất hiện màu đen. Những khuẩn lạc này được làm test xác nhận. Kháng sinh ức chế tạp chất kỵ khí và kỵ khí tùy tiện.
4- Mơi trường và thuốc thử Mơi trường làm giàu, thịt băm Mơi trường thioglycolate lỏng Mơi trường peptone để pha
Đ[z] án mơn hizlc GVHD:Huỳnh Quang PhMc
ĐI?] tài: Cà Phê Trang
lỗng (0.1%)
Canh thang sinh nha bào Thạch SPS Thuốc nhuộm Gram i- Cách làm > Chuân bị đồng nhất mầu thực phấm > Pha lỗng > Nuơi cấy
Lấy lml thực phấm đồng nhất pha lỗng cho vào đĩa petri đánh dấu, mỗi độ pha lỗng dùng hai đĩa.
Rĩt 15-20 ml thạch SPS vào mồi đĩa, đảo đĩa cho thạch trộn đều với mẫu thực pham rồi đê cho mơi trường đơng lại.
> ủ ấm :
Lật úp đĩa và để trong bình kỵ khí. ủ ấm bình ở 35-37°C trong 24h
> Đem khuấn lạc ( nghi Clostridium Perfringens)
Chọn những đĩa cĩ 30 - 300 khuẩn lạc, đếm số khuẩn lạc và tính số lượng trong 1 g thực phẩm.
> Xác nhận
Chọn 10 khuẩn lạc điến hình trên đĩa mơi trường SPS cấy mỗi khuẩn lạc vào trong một ổng canh thang thioglycolate vừa làm thốt khí và làm nguội.
> ủ ấm 35°c trong 18 - 24h
Xét nghiệm từng ống bằng nhuộm Gram và chọn canh khuấn thuần khiết. Trực khuân Gram dương, mập , hai đầu tù.
Neu canh khuấn đều thuần khiết cấy vào các ống mơi trường nitrate di động, canh thang sinh nha bào và thịt băm. ủ ấm 35°c trong 24h
Mơi trường nitrat di động vi khuấn mọc theo đường cấy (C.Perfringens khơng di
động ) và khử nitrate bằng cách cho thêm 0.5ml dung dịch alpha- naphthyamine
và một lượng tương tự acid sulphanilic ('C.Perfringens hồn nguyên nitrate,
Đ[z] án mơn hizlc GVHD:Huỳnh Quang PhMc
ĐŨI tài: Cà Phê Trang
> Xét nghiệm canh thang nha bào: lấy cặn phết kính đe khơ, hơ lửa đê cố định. Nhuộm
malachite green 10 phút rửa nước rồi nhuộm saíranin trong vịng 15 giây, rửa, thấm, đê khơ và soi kính. Nha bào nhuộm màu xanh lá cây, tế bào sinh dưỡng bắt màu đỏ. 4 Tính tốn
Tính số C.Perfingens trong mẫu dựa vào tỷ lệ phần trăm những khuẩn lạc được làm
test, xác nhận là C.Perýìngens.
