i- Biểu thị kết quả
3.1.2.4 Cách phát hiện Salmonella [3]
4- Nguvên tắc
Phương pháp phát hiện này làm cho số lượng nhỏ Salmonella cĩ cơ hội phát triên
trong mơi trường lởng khơng lựa chọn ở 37°c để làm giàu trước. Một mơi trường và nhiệt độ như thế sẽ cho phép các vi khuấn khác phát triên, bởi thế tiếp theo nuơi cấy làm giàu trước trong mơi trường lỏng chọn lọc và ủ ấm ở 42 - 43°c, lần cuối thì cấy lên mơi
Đ[z] án mơn hizlc GVHD:Huỳnh Quang PhMc
ĐI?] tài: Cà Phê Trang
trường đặc chọn lọc và phân biệt, và sau khi ủ ấm ở 37°c thì kiểm tra về sự cĩ mặt các khuẩn lạc cĩ đặc điểm khả nghi là
Salmoneìỉa. Những khuấn này sau đĩ được kiêm tra về đặc điêm sinh hĩa và huyết
thanh của lồi Salmonella spp.
4- Cách làm
Đồng nhất mẫu thực phấm
Làm giàu vi khuấn trước ( pre-enrichment)
Chuyển lOml thực phẩm đồng nhất (25g mẫu đã khay với 225ml nước peptone) vào bình 500ml.
ử ấm ở 37°c ± 1 °c trong 16-20h. Làm giàu vi khuẩn ( enrichment)
Chuyến lOml ở mồi bình làm giàu trước vào lOOml mơi trường tetrathionate và lOml khác vào lOOml mơi trường seleite đã làm ấm tới 42-43°C.
ủ ấm 42-43°C trong 48h Ria ra đĩa
Sau 18-24h, từ mồi bình làm giàu ria lên một cặp đĩa petri; mơi trường thạch brillant green phenol red và thạch bismuth sulphite.
ủ ấm 37± l°c trong 20-24 h 24h sau lặp lại như trên
Kiểm tra khuẩn lạc Saỉmonelỉa các đĩa mơi trường đã ria cấy 24h và 48h để tìm khuẩn
lạc Saỉmoneỉỉa điên hình. 4- Xác định
Chọn 5 khuẩn lạc điên hình hoặc nghi ngờ tư mồi đĩa mơi trường ria lên đĩa thạch dinh dưỡng, ủ ấm 37°c trong 20-24h
Từ những khuan lạc biệt lập trên mơi trường cấy lên các mơi trường sau
> Thạch TSI: ria lên mặt thạch nghiêng và chọc sâu dưới đáy ống, ủ ấm 37°c trong
Đ[z] án mơn hizlc GVHD:Huỳnh Quang PhMc
ĐŨI tài: Cà Phê Trang ❖ Đáy
Vàng : lên men glucose
Đỏ hoặc khơng đơi màu : glucose khơng lên men Đen : sinh H2S
Cĩ bĩng hơi hoặc vỡ thạch: sinh hơi từ glucose
❖ Mặt nghiêng
Vàng: lactose hoặc sucrose lên men
Đở hoặc khơng đơi: lactose hoặc sucrose khơng lên men
> Thạch ure: ria trên mặt thạch: ủ ấm 37°c trong 24-48h. Màu hồng chỉ phản ứng
dương tính.
> Mơi trường LDC : cấy đúng dưới mặt mơi trường lỏng, ủ ấm 37°c trong 24h. Màu đỏ
tía saukhi mọc là phản ứng dương tính.
Thuổc thử beta-galactosidase: Lấy một quai khuẩn lạc cấy vào ống nghiệm cĩ 0.25ml nước muối. Thêm 1 giọt toluene. Để ống nghiệm trong chậu nước ấm 37°c một lúc, cho thêm 0.25ml thuốc thử beta-galactosidase và trộn đều. Lại để ống trong nước ấm 37°c trong 24h. Màu vàng là phản ứng dương tính.
> Mơi trường VP: lấy một quai cấy khuân lạc vào hai ống nghiệm đựng 0.2ml mơi
trường, ủ ấm một ống ở nhiệt độ phịng và ống cịn lại ở nhiệt độ 37°c trong 48h. Cho thêm vào mỗi ống 2 giọt dung dịch creatinine, 3 giọt dung dịch ethanolic naphthol và 2 giọt KOH. Lắc đều mồi khi cho thêm một thứ thuốc thử, và đọc kết quả trong vịng 15 phút. Màu hồng tới đỏ tươi là phản ứng dương tính.
> Mơi trường indole: cấy một khuẩn lạc vào mơi trường indole và ủ trong 37°c trong
24h. Cho thêm lml thuốc thử indole. Vịng đỏ hình thành là phản ứng dương.
