- Từ axitlactic tạo thành, tinh chế và có thể ứng dụng vào nhiều ngành công nghiệp khác nhau.
3.8.Phương pháp xác ñịnh gián tiếp số lượng tế bào bằng cách ñếm các khuẩn lạc phát triển trên môi trường thạch [5].
CÁC PHƯƠNG PHÁP SỬ DỤNG TRONG THÍ NGHIỆM
3.8.Phương pháp xác ñịnh gián tiếp số lượng tế bào bằng cách ñếm các khuẩn lạc phát triển trên môi trường thạch [5].
phát triển trên môi trường thạch [5].
Cách tiến hành:
- Nhúng các ống nghiệm hay lọ chứa 10-25ml môi trường nuôi cấy thích hợp cho vi sinh vật nghiên cứu có chứa thành phần thạch trong 1 cốc có chứa chứa nước (nước có chiều cao bằng chiều cao của thạch trong ống nghiệm), gia nhiệt ñể làm tan chảy thạch.
- Làm nguội thạch trong bể ổn nhiệt (kiểm tra nhiệt ñộ trong bể nước nhờ một nhiệt kế). Chú ý không ñể cho thạch nguội xuống dưới 50oC
- Sử dụng pipet có cài nút bông ñể cấy 1ml mẫu (ở các ñộ pha loãng khác nhau) vào các ñĩa petri ñã ñánh dấu trước, ñổ ngay môi trường thạch ñã làm nguội vào ñĩa. Xoay tròn ñĩa theo chiều kim ñồng hồ và ngược lại ñể phân bố ñều các chất trên ñĩa, lưu ý phải lắc cẩn thận ñể tránh chất lỏng bắn lên trên nắp ñĩa. Tiến hành cấy mẫu ở mỗi ñộ pha loãng với ba ñĩa thạch giống nhau. Chỉ tiến hành từ 10 – 20 phút, kể từ khi pha loãng mẫu cho ñến khi cho thạch vào ñĩa cuối cùng.
- Để yên cho thạch ñông lại
Sau khi ñã cấy mẫu vào môi trường, ñể cho bề mặt thạch khô, ñem ñĩa vào trong tủ ấm và ñặt úp ngược ñể tránh gây nhiễm do chất lỏng ứa ra từ bề mặt trên của thạch khi ñĩa vừa ấm lên, ñồng thời tránh các giọt nước ngưng tụ dưới nắp ñĩa rơi xuống bề mặt thạch.
Tính kết quả: Khi kết thúc thời gian nuôi cấy, ñếm số khuẩn lạc trên môi trường thạch như sau:
vùng I, II, III, IV
- Đếm số khuẩn lạc trong từng vùng. Nhớ ñánh dấu các khuẩn lạc ñã ñếm - Số lượng tế bào vi sinh vật trong 1ml mẫu ñược tính theo công thức sau:
Số tế bào/ml mẫu D
Vn n
*
=
Trong ñó: n là số khuẩn lạc trung bình trong một ñĩa petri ở một mật ñộ pha loãng nhất ñịnh.
V là thể tích dịch mẫu ñem cấy (bằng 0,1 ml ñối với phương pháp cấy gạt và 1ml ñối với phương pháp ñổ ñĩa)