Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.2.1.Phương pháp hóa học
2.2.1.1. Xác ñịnh hàm lượng tinh bột theo phương pháp thủy phân nhờ axit [6]
Nguyên tắc: Thủy phân tinh bột thành ñường bởi dung dịch HCl 2% ở ñiều kiện ñun sôi trong bình cách thủy với thời gian là 2 giờ. Dịch ñã thủy phân ñược làm nguội và trung hòa bằng NaOH với chỉ thị metyl da cam. Hàm lượng ñường trong dung dịch ñược xác ñịnh theo các phương pháp Graxianop (ñược trình bày ở mục 2.2.1.2 bên dưới). Từ hàm lượng ñường ñịnh lượng ñược, áp dụng công thức ñể xác ñịnh hàm lượng tinh bột của hạt mít, xem phụ lục 3.1 và 3.2
2.2.1.2. Xác ñịnh hàm lượng ñường khử bằng phương pháp Graxianop [6]
Nguyên tắc: Dựa vào phản ứng
2K3Fe(CN)6 + 2KOH 2K4Fe(CN)6 +H2O + O Tiếp theo oxi hóa ñường ñể tạo thành axit ñường CH2CH(CHOH)4 + O COOH(CHOH)4COOH Phản ứng tổng quát là:
4K3Fe(CN)6 + 4KOH + CH2CH(CHOH)6CHO 4K4Fe(CN)6+ COOH(CHOH)4COOH + 2H2O
2.2.1.3. Xác ñịnh hàm lượng axit lactic bằng phương pháp hóa học [12]
Nguyên lý
Oxy hóa axit lactic bằng ñồng sunfat, ở môi truờng axit sunfuric thành acetaldehyd. Acetaldehyd kết hợp với para-oxydiphenyl với sự có mặt của ion Cu2+, cho màu tím có thể ñịnh lượng bằng phương pháp so màu trên máy so màu.
Dụng cụ, vật liệu và thuốc thử:
- Máy so màu
- Dung dịch CuSO4 4% - Axit sunfuric ñậm ñặc - Axit sunfuric 10%
- Dung dịch chì axetat basic: + Chì axetat Pb(CH3COO)2 300gam + Chì oxyt (bột) 100gam
+ Nước cất 700gam
Nghiền nát chì axetat, cho vào chậu sứ với chì oxyt và nước cất, khuấy cho ñến khi tan hoàn toàn. Lọc và bảo quản trong chai nút kín.
- Dung dịch para oxydiphenyl 0,75% + Para oxydiphenyl 0,75gam + NaOH 2% vừa ñủ 100ml
Cách tiến hành và tính toán theo phụ lục 3.5.
2.2.1.4. Xác ñịnh hàm lượng ñường khử bằng phương pháp so màu sử dụng acid dinitro salicylic (DNS) [6].
Mục ñích: Nhằm kiểm tra và ñiều chỉnh nồng ñộ dịch ñường sau thủy phân ñể thuận lợi cho quá trình lên men.
Nguyên tắc: Dựa trên phản ứng tạo màu giữa ñường khử với thuốc thử axit dinitrosalicylic DNS. Cường ñộ màu của hỗn hợp phản ứng tỷ lệ thuận với nồng ñộ dịch ñường khử trong phạm vi nhất ñịnh. Dựa trên ñồ thị ñường chuẩn ñối với glucoza tinh khiết tính ñược hàm lượng ñường khử trong mẫu phân tích.
Phương pháp tiến hành ñược thể hiện ở phụ lục 3.6
2.2.1.5. Xác ñịnh hoạt lực của α- amilaza theo Rukhliadeva [6]
Nguyên tắc: Phương pháp dựa trên cơ sở thủy phân tinh bột bởi enzyme có trong dịch chế phẩm nghiên cứu tới các dextrin có phân tử lượng khác nhau. Đo cường ñộ màu tạo thành giữa tinh bột và các sản phẩm thủy phân của nó với iot bằng máy so màu quang ñiện sẽ tính ñược hoạt ñộ enzyme.
Đơn vị hoạt ñộ enzyme α- amilaza là lượng enzyme chuyển hóa ñược một gam tinh bột tan thành các dextrin có phân tử lượng khác nhau ở 30oC trong thời gian một giờ (pH cho amilaza của malt là 4.8 – 4.9, của nấm mốc là 4.7, của vi khuẩn là 6.0…).
Cách tiến hành xem phụ lục 3.3
2.2.1.6. Xác ñịnh hoạt lực của γ-amilaza theo phương pháp vi lượng của V.Y.Rodzevich, O.P.Korenbiakina [6]
Nguyên tắc: Phương pháp dựa trên cơ sở thủy phân tinh bột bởi enzyme γ- amilaza có trong chế phẩm nghiên cứu. Xác ñịnh lượng glucoza tạo thành sẽ tính ñược hoạt ñộ enzyme.
Đơn vị hoạt ñộ γ-amilaza là lượng enzyme tác dụng lên dung dịch tinh bột tan pH= 4,7 ở nhiệt ñộ 30oC trong thời gian một giờ giải phóng ñược 1mg glucoza.
Cách tiến hành xem phụ lục 3.4