- Từ axitlactic tạo thành, tinh chế và có thể ứng dụng vào nhiều ngành công nghiệp khác nhau.
3.6.Xác ñịnh hàm lượng ñường khử bằng phương pháp so màu sử dụng axit dinitro salicylic (DNS) [6].
CÁC PHƯƠNG PHÁP SỬ DỤNG TRONG THÍ NGHIỆM
3.6.Xác ñịnh hàm lượng ñường khử bằng phương pháp so màu sử dụng axit dinitro salicylic (DNS) [6].
Mục ñích: Nhằm kiểm tra và ñiều chỉnh nồng ñộ dịch ñường sau thủy phân ñể
thuận lợi cho quá trình lên men.
Nguyên tắc: Dựa trên phản ứng tạo màu giữa ñường khử với thuốc thử axit dinitrosalicylic DNS. Cường ñộ màu của hỗn hợp phản ứng tỷ lệ thuận với nồng ñộ dịch ñường khử trong phạm vi nhất ñịnh. Dựa trên ñồ thị ñường chuẩn ñối với glucoza tinh khiết tính ñược hàm lượng ñường khử trong mẫu phân tích.
Dụng cụ: máy so màu
Hóa chất:
- Axit dinitrosalicylic DNS
- Muối tartrat kép KNaC4H4O6.4H2O - NaOH dung dịch 4N
Cho 5gam DNS và 300ml nước cất vào cốc, hòa tan hoàn toàn ở 50oC. Sau ñó cho thêm 50ml dung dịch NaOH 4N. Cuối cùng thêm 150gam muối tartrat kép, hòa tan hoàn toàn rồi cho vào trong bình ñịnh mức 500ml. Thêm nước cất tới vạch ñịnh mức. Đựng trong lọ thủy tinh màu sẩm. Nếu 1-2 ngày sau thấy xuất hiện cặn lắng thì ñem lọc cặn. Chuẩn 3ml thuốc thử DNS bằng HCl 0,1N với chỉ thị phenolphthalein, nếu hết 5-6ml HCl là ñược. (Nếu cần thêm NaOH ñể ñạt môi trường mạnh cho thuốc thử).
Tiến hành:
dấu phẩy) từ 0,12 – 0,42gam. Hòa tan ñường glucoza bằng nước cất và ñịnh mức tới 1 lít.
+ Tiến hành ño OD ở bước sóng 540nm với các mẫu phân tích, trong ñó mẫu phân tích là: 2ml dịch ñường +1 ml DNS, cho vào ống nghiệm nút chặt, bỏ vào ñun sôi cách thủy 5 phút, lấy ra làm nguội rồi ñem ño OD. Mẫu ñối chứng là nước cất.
+ Vẽ ñồ thị chuẩn với trục tung là OD, trục hoành là nồng ñộ ñường (mg/l). - Xác ñịnh hàm lượng ñường khử trong mẫu.
+ Pha loãng mẫu sao cho hàm lượng ñường khử trong khoảng 0,12 – 0,42mg/ml rồi tiến hành ño xác ñịnh như trong phần dùng ñồ thị chuẩn.
+ Dựa vào ñồ thị chuẩn tra ñược hàm lượng ñường khử trong mẫu phân tích. Chú ý: Màu của hỗn hợp chỉ tạo ra trong môi trường kiềm, do vậy những mẫu axit phải ñược trung hòa trước khi ñem phân tích. Các mẫu ñun có thể ñể ñược một thời gian (20 phút trước khi ño).
Tính kết quả:
Lượng ñường khử tính: X = a.n.V
Trong ñó: X – Lượng ñường khử trong dung dịch cần xác ñịnh, gam. a – Lượng ñường khử trong mẫu ño, gam.
n – Hệ số pha loãng dịch V – Số thể tích dịch ño, ml
3.7. Thủy phân tinh bột hạt mít bằng chế phẩm enzyme α-amylaza và γ-amylaza [42],
[31].
Quá trình ñường hóa ñược thực hiện qua 2 giai ñoạn: - Quá trình dịch hóa: sử dụng enzyme α-amylaza
Tiến hành: cân 3g bột hòa trong 100ml nước cất. Sau khi hồ hóa, dùng HCl ñưa dịch về pH = 5,5 - 6, bổ sung 2ml enzyme, nâng ñến nhiệt ñộ 95oC, thời gian dịch hóa là 120 phút.
pH = 4.25, bổ sung enzyme γ – amylaza, tiến hành quá trình ñường hóa ở nhiệt ñộ 60oC trong thời gian từ 170 -180 phút.
Dịch sau lên men tiến hành lọc trên giấy lọc nhiều lần. Khảo sát nồng ñộ dịch ñường tạo thành nhằm ñiều chỉnh thích hợp cho quá trình lên men.