3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu
3.3.5.1 Định lƣợng đƣờng tổng
Phƣơng pháp
Chúng tôi lựa chọn thực hiện định lƣợng đƣờng tổng theo phƣơng pháp phenol – sulfuric đã trình bày ở mục 2.3.2.1c
Thực hiện
Chiết đƣờng từ mẫu
Nghiền nguyên liệu cần định lƣợng, sau đó cân 1 g mẫu vào betcher 100 mL. Thêm vào 20 mL ethanol 96o, đặt lên nồi đun cách thủy, đun sôi 3 lần, mỗi lần sôi lấy ra để nguội rồi để lại trên bếp. Khuấy đều, để nguội, lọc qua giấy lọc (không cho cặn đổ lên giấy lọc). Sau đó thêm 10 mL ethanol 80o vào betcher đựng mẫu, khuấy đều, đun 2 lần tới sôi trên nồi cách thủy, để nguội, lọc, tiếp tục làm nhƣ vậy khoảng 2 – 3 lần. Sau đó đƣa cặn lên giấy lọc, tráng cốc 2 – 3 lần bằng ethanol 80o nóng (nƣớc tráng cũng cho cả lên lọc). Dịch lọc cho bay hơi ethanol ở nhiệt độ phòng hoặc đun nhẹ trên nồi đun cách thủy. Cặn khơ đƣợc hịa tan vào nƣớc đến 50 mL. Khi làm hiện màu có thể pha lỗng nếu nồng độ đƣờng quá cao.
Xây dựng đƣờng chuẩn
Lấy 7 bình định mức 100 mL, cho vào đó theo thứ tự: 1, 2, 3, 4, 5, 6 và 7 mL dung dịch saccharose 0,1%, cho nƣớc cất tới vạch mức. Từ mỗi bình hút ra 1 mL,
SVTH: Lê Trọng Quang
Nguyễn Thanh Tùng 36
cho thêm 1 mL dung dịch phenol 5%. Cẩn thận cho thêm 5 mL H2SO4 đậm đặc. Để 10 phút rồi lắc đều, giữ tiếp 10 – 15 phút ở nhiệt độ phòng. Trong mỗi ống nghiệm sẽ có tƣơng ứng 10, 20, 30, 40, 50, 60 và 70 µg saccharose. Đem đo mật độ quang ở bƣớc sóng π = 490 nm, vẽ đồ thị chuẩn.
Xác định đƣờng trong mẫu
Hút 1 mL dung dịch đƣờng cần xác định, tiến hành tƣơng tự nhƣ bƣớc xây dựng đƣờng chuẩn saccharose.
Tính kết quả
Hàm lƣợng đƣờng tổng chứa trong 100 g mẫu đƣợc tính theo cơng thức:
Trong đó x: Hàm lƣợng đƣờng tƣơng ứng trên đƣờng chuẩn (µg/mL). k: Hệ số pha lỗng.
V: Thể tích dịch đƣờng ban đầu (mL). v: Thể tích mẫu đem phân tích (mL). m: Trọng lƣợng mẫu (g).
Thực nghiệm
Tiến hành thực hiện định lƣợng đƣờng tổng của 3 mẫu linh chi (mỗi mẫu 1 g) với các bƣớc thực hiện và tính tốn kết quả nhƣ trên.