3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu
3.3.6.2 Quy trình tách chiết Triterpenoid
Dựa vào công thức cấu tạo bộ khung của các triterpenoid ở trên có thể nhận thấycác hợp chất này là các phân tử từ khơng phân cực đến phân cực trung bình, điều đó tùy thuộc vào các nhóm thế trên bộ khung cơ bản. Vì vậy, có thể sử dụng các dung mơi hữu cơ có độ phân cực trung bình nhƣ ethyl acetate, chloroform để tách chiết triterpenoid ra khỏi nguyên liệu ban đầu.
Quy trình tách chiết triterpenoid từ Ganoderma lucidum mà chúng tôi tham khảo theo tài liệu (Chen and Chen, 2003) đƣợc trình bày trên hình
Hình 3-4 Sơ đồ quy trình tách chiết triterpenoid (Trần Cao Sơn, 2010)
Giải thích quy trình:
Mẫu linh chi
C2H5OH, T ºC, t giờ, x 3 lần. Lọc
Bã DịchC2H5OH
Cô quay giảm áp Cao tồn phần
1. CHCl3
2. NaHCO3bão hịa x 3 lần
Dịch CHCl3 Dịch NaHCO3
1. HCl 6N đến pH = 4 2. CHCl3 x 2 lần
Dịch CHCl3 Dịch acid
Cô quay giảm áp
Triterpenoid acid
Cô quay giảm áp
Triterpenoid không acid
SVTH: Lê Trọng Quang
Nguyễn Thanh Tùng 46
Quá trình tách chiết bắt đầu với EtOH (EtOH 80º, 96º) để thu đƣợc cao TP tổng. TP tổng gồm phân đoạn triterpenoid acid và không acid.Phân đoạn acid đƣợc lắc qua muối NaHCO3 bão hịa, sau đó, acid hóa bằng HCl 6 N để thu đƣợc cấu trúc ban đầu của triterpenoid acid, chiết qua CHCl3 để thu đƣợc phân đoạn triterpenoid dạng acid. Phân đoạn triterpenoid không acid đƣợc tách ra ở lớp CHCl3, khi lắc qua dung dịch NaHCO3.
Từ quy trình trên chúng tơi đƣa ra một số nhận xét: - Sử dụng EtOH 96º để chiết cao TP tổng.
- Trong cao ethanol ngồi triterpenoid cịn có lẫn một số tạp chất khác, tinh chế triterpenoid bằng cách chiết qua CHCl3.
- Chiết qua dung dịch NaHCO3 để thu đƣợc các phân đoạn acid và không acid. - Các thông số nhƣ phƣơng pháp chiết, thời gian, nhiệt độ đƣợc lấy theo kết quả tốt nhất đã Dƣợc khảo sát ở mục 2.3.2.