Sau khi đã thực hiện các khảo sát, chúng tôi thực hiện tách chiết polysaccharide với các thông số chiết nhƣ sau:
- Nhiệt độ: 70 ºC - Thời gian: 7 h
- Tỉ lệ nguyên liệu dung môi: 1/30
- Phƣơng pháp chiết: Chiết hồi lƣu nhiều lần (3 lần)
Chúng tôi tiến hành chiết 6 mẫu có khối lƣợng bằng nhau (5 g) và điều kiện chiết nhƣ trên. Kết quả nhƣ sau:
Bảng 4-9 Hàm lƣợng polysaccharide thu đƣợc sau thí nghiệm
Mẫu Hàm lƣợng polysaccharide (%) 1 2 3 4 5 6 3,09 3,08 3,11 3,03 3,05 3,08
Sau đó, chúng tôi đánh giá độ lặp lại của thí nghiệm và khoảng tin cậy của số liệu
Bảng 4-10 Độ lặp lại của phƣơng pháp
Mẫu Polysaccharide (%) Polysaccharidetb (%) S RSD (%) RSDH(%)
1 2 3 4 5 6 3,09 3,08 3,11 3,03 3,05 3,08 3,073 0,029 0,944 3,38
SVTH: Lê Trọng Quang
Nguyễn Thanh Tùng 66
Từ kết quả ở bảng 4-10 chúng tôi thấy rằng: RSD < ½RSDH, điều này cho thấy các thí nghiệm có độ lặp lại tốt.
Khoảng tin cậy của số liệu thực nghiệm
Với độ tin cậy 0,95 và số bậc tự do f = n -1 = 5, ta có t (0,95;5) = 2,571. Suy ra ε = 0,03. Vậy tỷ lệ Polysaccharide trong mẫu linh chi Vina là: 3,073 ± 0,03 (p=0,95; n= 6).
Dựa trên các quy trình chiết xuất Polysaccharide của các tác giả đã tham khảo (BAO và cộng sự 2001; Hung và cộng sự, 2008; Janardhanan K.K và cộng sự, 2008; Lu Ting-Jang* and Yi-Wei Chang, 2004; Wu Rong-Tsun, Taipei (TW), 2000) cũng nhƣ dựa trên các tính chất của Polysaccharide và các thành phần chính có trong nấm linh chi, chúng tôi rút ra các nhận xét sau:
- Các tạp chất có thể có trong kết tủa Polysaccharide là protein, acid uronic và một lƣợng ít các chất có phân tử lƣợng nhỏ. Theo (Hung, Wei-Ting., Shwu-Hay Wang, Chung-Hsuan Chen and Wen-Bin Yang, 2008; Lu Ting-Jang* and Yi-Wei Chang, 2004) không cần loại các tạp chất trên vì chúng không ảnh hƣởng đến các phản ứng trong phƣơng pháp phenol-acid sulfuric và quá trình xác định thành phần monosaccharide. Vì vậy có thể bỏ qua quá trình loại tạp ban đầu bằng các dung môi kém phân cực và phân cực trung bình (ether petroleum, EtOH).
- Hoạt chất Polysaccharide của nấm linh chi là thành phần tan trong các dung môi phân cực nhƣ nƣớc, NaOH, CH3COOH, ... và không tan trong EtOH 96º. Vì vậy, chúng tôi dùng EtOH 96º.
- Quy trình tách chiết Polysaccharide đạt hiệu suất gần nhƣ tối đa so với kết quả hàm lƣợng polysaccharide đã khảo sát của mẫu nấm linh chi.