3.3 Phƣơng pháp nghiên cứu
3.3.4.1 Định tính alkaloid
Phần 1: Bột nấm linh chi xay nhuyễn (5g) và dung dịch H2SO4 1% cho vào bình tam giác. Đun nhẹ trong 1 giờ. Lọc và lấy dịch lọc để thử nghiệm với cả 2 loại thuốc thử: Mayer, Dragendorff. Quan sát kết tủa, nếu có kết tủa theo qui định là dƣơng tính. Tuy nhiên, nếu khơng có kết tủa cũng chƣa thể kết luận là
SVTH: Lê Trọng Quang
Nguyễn Thanh Tùng 33
khơng có alkaloid mà phải tiếp tục thử nghiệm phần 2.
Phần 2: Bột xay nhuyễn (5g) ngâm trong dung dịch prollius là hỗn hợp gồm: chloroform : ethanol 950 : NH4OH đậm đặc, theo tỷ lệ là 8 : 8 : 1 (môi trƣờng phải có tính bazơ). Ngâm nguội trong 24 giờ, ở nhiệt độ phòng, thỉnh thoảng lắc trộn. Lọc và đuổi dung môi đến cạn, thu đƣợc cặn. Hòa tan cặn trong dung dịch HCl 1%, đun ấm cho dễ tan. Lọc và lấy dịch lọc để thử nghiệm với 2 loại thuốc thử: Mayer, Dragendorff.
Thuốc thử định tính alkaloid
Thuốc thử Mayer: Hòa tan 1,36 g HgCl2 trong 60 mL nƣớc cất và 5 g KI
trong 10 mL nƣớc cất. Thu hỗn hợp 2 dung dịch này lại và thêm nƣớc cất cho đủ 100 mL. Nhỏ vài giọt thuốc thử Mayer vào dung dịch acid lỗng có chứa alkaloid, nếu có chứa alkaloid thì sẽ xuất hiện tủa màu trắng hoặc vàng nhạt. Cần lƣu ý vì tủa tạo thành có thể hịa tan trở lại trong lƣợng thừa thuốc thử hoặc hịa tan bởi ethanol có sẵn trong dung dịch thử.
Thuốc thử Dragendorff: Hòa tan 8 g Nitrat bismuth Bi(NO3)3 trong 25 mL HNO3 30% (D = 1,18). Hòa tan 28 g KI và 1mL HCl 6 N trong 5 mL nƣớc cất. Hỗn hợp 2 dung dịch màu cam – đỏ đƣợc chứa trong bình sậm màu để che sáng, cất trong tủ lạnh, có thể giữ lâu vài tuần. Nhỏ thuốc thử Dragendorff vào dung dịch acid lỗng có chứa alkaloid nếu có alkaloid sẽ xuất hiện tủa màu cam – nâu.