2. Nội dung nghiên cứu x
2.6.1.6. Xác định hàm lượng acrylamide trong mẫu cà phê
Mục đích: Xây dựng đường chuẩn để xác định hàm lượng acrylamide ở mẫu phân tích.
Cách tiến hành: Sự thay đổi của mật độ quang (OD) tới nồng độ của acrylamide được xác định bằng phương pháp quang phổ dựa theo nghiên cứu của Palanti S. và cộng sự, 2015 với một vài thay đổi.
Cân một lượng 1mg acrylamide tinh khiết vào (1) 1000ml và sau đó định mức lên đúng thể tích với nước cất. Dùng pipette lấy ra 0.5ml chuyển vào bình định mức (2) 100ml, dùng NaOH 1M thêm vào lên đúng thể tích thu được dung dịch acrylamide với nồng độ 5 ng/ml (dung dịch gốc chuẩn A). Từ dung dịch gốc chuẩn A chuẩn bị dãy ống nghiệm với
37
các nồng độ acrylamide lần lượt là 0, 0.25; 0.5; 0.75; 1.00; 1.25; 1.50, 1.75; 2.00; 2.25; 2.50 ng/ml (bảng 2.3). Sau đó dãy dung dịch này được quét bằng máy quang phổ UV-Vis UH5300 ở dải bước sóng từ 210 – 250nm.
Bảng 2.3. Thành phần dãy ống nghiệm dùng để xây dựng đường chuẩn acrylamide
ĐC 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 Dd acrylamide (5 ng/ml), ml 0 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 0.3 0.35 0.4 0.45 0.5 NaOH 1N, ml 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 4 Nước cất, ml 1 0.95 0.9 0.85 0.8 0.75 0.7 0.65 0.6 0.55 0.5 Hàm lượng, ng/ml 0 0.25 0.50 0.75 1.00 1.25 1.50 1.75 2.00 2.25 2.50 OD 210 – 250nm
- Xử lý mẫu cà phê xác định hàm lượng acrylamide
Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng phương pháp xử lý mẫu dựa trên nghiên cứu
của Dange V. U. và cộng sự, 2018 với một số hiệu chỉnh.
Các mẫu cà phê sau khi được xử lý hoặc chưa xử lý với enzyme L-Asparaginase ở những điều kiện khác nhau được nghiền thành bột mịn. Mỗi mẫu được đồng nhất hóa với việc thêm nước (tỷ lệ mẫu : nước là 1:20) và khuấy trong vòng 20 phút.
Các mẫu đã đồng nhất được đem đi ly tâm ở tốc độ 4000 rpm trong vòng 20 phút. Thu lấy dịch ly tâm, lọc qua giấy lọc 20µm và xác định thể tích của dịch trích Dange V. U. và
cộng sự, 2018. Tiến hành pha loãng mẫu sao cho độ hấp thụ nằm trong khoảng thích hợp.
Đo độ hấp thụ acrylamide
Tiến hành đo độ hấp thụ ở bước sóng tối đa nhận được ở trên là 224 nm (Zhan, K., và
cộng sự, 2014) và sử dụng mẫu trắng theo phương pháp xây dựng đường chuẩn acrylamide.