2. Nội dung nghiên cứu x
2.6.1.7. Xác định hàm lượng asparagine trong mẫu cà phê
Cân 10mg asparagine tinh khiết chuyển vào bình định mức (1) 100ml và sau đó định mức lên đúng thể tích bằng dung dịch HCL 1N. Dùng pipette lấy ra 2.5 ml chuyển vào bình định mức (2) 100ml, dùng HCl 1N thêm vào lên đúng thể tích thu được dung dịch asparagine với hàm lượng 2.5 µg/ml (dung dịch gốc chuẩn A).
Từ dung dịch gốc chuẩn A chuẩn bị dãy ống nghiệm với các hàm lượng asparagine lần lượt là 0.25, 0.5, 0.75, 1, 1.25, 1.5 µg/ml (bảng 2.4). Sau đó dãy dung dịch này được quét bằng máy quang phổ UV-Vis UH5300 ở dải bước sóng từ 190-240nm, sử dụng dung dịch HCl 1N làm mẫu đối chứng (blank).
38
Bảng 2.1. Thành phần ống nghiệm dùng để xây dựng đường chuẩn asparagine
Thành phần Blank 1 2 3 4 5 6
Dung dịch asparagine 2.5 µg/ml (ml) 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6
Dung dịch HCl 1N (ml) 5 4.9 4.8 4.7 4.6 4.5 4.4
Tổng thể tích (ml) 5 5 5 5 5 5 5
Hàm lượng asparagine (µg/ml) 0 0.25 0.5 0.75 1 1.25 1.5
- Xử lý mẫu cà phê xác định hàm lượng asparagine
Các mẫu cà phê sau khi được xử lý hoặc chưa xử lý với enzyme L-Asparaginase ở những điều kiện khác nhau được nghiền thành bột mịn. Mỗi mẫu được đồng nhất với việc thêm HCl 1N (tỷ lệ mẫu : HCl là 1:20) bịt kín miệng và khuấy từ trong vòng 12h, gia nhiệt ở khoảng 60 -70oC bằng glycerol.
Các mẫu sau khi đồng nhất xong thì tiến hành lọc qua giấy lọc 20µm và xác định thể tích. Tiến hành pha loãng mẫu sao cho độ hấp thụ nằm trong khoảng thích hợp.
- Đo độ hấp thụ asparagine
Tiến hành đo độ hấp thụ ở bước sóng tối đa nhận được ở trên là 208 nm và sử dụng mẫu trắng theo phương pháp xây dựng đường chuẩn asparagine.