3. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài
3.3.4. Nghiên cứu xác định độ pH phù hợp để sinh tổng hợp protein tái tổ hợp
nhưng độ đậm của băng không có sự khác biệt lớn. Như vậy, sau 2-3 giờ tăng sinh chủng E.coli BL21- pET32/RoTAT1.2 rồi cảm ứng IPTG 4 giờ, mức biểu hiện kháng nguyên tái tổ hợp RoTAT 1.2 là tương đương nhau.
3.3.4. Nghiên cứu xác định độ pH phù hợp để sinh tổng hợp protein tái tổ hợp RoTAT 1.2 RoTAT 1.2
Các loài vi sinh vật khác nhau có thể sinh trưởng tốt trong môi trường có pH khác nhau. Hầu hết các vi khuẩn sinh trưởng được trong điều kiện pH tối thiểu là 4 và tối đa là 9, pH thích hợp là khoảng 6-8. Trong nghiên cứu này, chủng E. coli
BL21- pET32/RoTAT1.2 mang plasmid tái tổ hợp được tăng sinh trong 3 bình thủy tinh ở cùng điều kiện nuôi cấy với pH bằng 6; 7; 8 và 9 trong 3 giờ sau đó cảm ứng 4 giờ với IPTG. Dịch tăng sinh tế bào ở các bình nuôi cấy được thu lại để kiểm tra hàm lượng protein bằng phương pháp điện di SDS-PAGE (hình 3.8).
Hình 3.8 Mức độ biểu hiện kháng nguyên RoTAT 1.2 ở các giá trị Ph
khác nhau
1: thang protein chuẩn, 2-5: protein thu được từ dịch tăng sinh chủng E.coli BL21- pET32/RoTAT1.2 ở pH là 6, 7, 8 và 9
Kết quả hình 3.8 cho thấy, pH môi trường có ảnh hưởng lớn đến khả năng biểu hiện protein tái tổ hợp RoTAT 1.2 của chủng E. coli BL21- pET32/RoTAT1.2.
Mẫu nuôi cấy với pH môi trường là 9 (đường chạy số 5) có băng protein mờ nhất hay lượng protein thu được là thấp nhất. Ngược lại với các mẫu có pH môi trường là 6,0; 7,0 và 8 (đường chạy 2, 3 và 4), băng protein đích xuất hiện tương đối giống nhau và đậm hơn so với băng protein ở môi trường có pH là 9. Như vậy, trong môi trường có pH 6,0; 7,0 và 8 mức biểu hiện của protein đích biểu hiện tốt và không khác nhau nhiều. Tuy nhiên, chúng tôi cho rằng pH = 7 là pH phù hợp nhất để biểu