Hình 3 .3 Kết quả điện di protein tổng số của trên gel SDS-PAGE
Hình 3.6. Mức độ biểu hiện kháng nguyên RoTAT1 .2 ở các nhiệt độ nuôi cấy
1M: thang protein chuẩn; 1-3: protein thu được từ dịch tăng sinh chủng E. coli
BL21- pET32/RoTAT1.2 ở nhiệt độ 37oC, 30oC và 28oC,
Kết quả ở hình 3.6 cho thấy, yếu tố nhiệt độ ảnh hưởng rõ rệt đến khả năng biểu hiện kháng nguyên tái tổ hợp RoTAT 1.2 của chủng nghiên cứu. Ở nhiệt độ 28oC và 30oC không thấy xuất hiện băng protein ở kích thước 8 kDa, chứng tỏ protein tái tổ hợp RoTAT 1.2 không được tổng hợp ở những nhiệt độ nuôi cấy này. Nhiệt độ nuôi cấy là 37oC phù hợp cho sự biểu hiện protein tái tổ hợp RoTAT 1.2.
3.3.3. Nghiên cứu xác định mối tƣơng quan giữa mật độ vi khuẩn và mức độ biểu hiện gen mã hóa kháng nguyên RoTAT 1.2
Ngoài các yếu tố kể trên, mật độ vi khuẩn trong dịch tăng sinh có thể ảnh hưởng tới khả năng sinh tổng hợp protein tái tổ hợp RoTAT 1.2. Trong nghiên cứu này, mật độ vi khuẩn được xác định bằng mật độ quang học ở bước sóng 600nm
thông qua chỉ số OD60nm. Theo lý thuyết, nếu lượng tế bào quá ít khi cảm ứng bằng IPTG thì lượng protein tái tổ hợp được tổng hợp nhưng ở mức thấp, ngược lại, nếu lượng tế bào quá nhiều, tức là các tế bào đã bắt đầu chuyển sang giai đoạn suy thoái, khả năng biểu hiện protein ngoại lai kém, do đó lượng protein đích biểu hiện ra sẽ thấp. Bởi vậy, vấn đề mấu chốt là phải xác định được mật độ vi sinh vật mà tại đó lượng protein tái tổ hợp thu được là cao nhất. Thí nghiệm được bố trí như sau: vi khuẩn E.coli BL21- pET32/RoTAT1.2 được tăng sinh trong 3 bình nuôi cấy chỉ khác thời gian nuôi hoạt hóa của bình 1, 2 và 3 lần lượt là 2; 2,5 và 3 h rồi xác định OD600 để biết được mật độ quang học của các mẫu. Kết quả đo OD600 như sau: bình 1, 2, 3 có giá trị lần lượt là 0,8; 1,2 và 1,8. Tiếp tục bổ sung IPTG và thu mẫu sau 4 h cảm ứng. Kết quả được phân tích bằng điện di polyacrylamid hình 3.7.