3. Ý nghĩa khoa học và ý nghĩa thực tiễn của đề tài
3.7.1. Đánh giá khả năng phát hiện của bệnh của phản ứng ELISA trên mẫu
máu trâu, bò nghi nhiễm tiên mao trùng
Trong phản ứng ELISA, một mẫu huyết thanh được xem là có tương tác đặc hiệu nhấtvới một kháng nguyên khi giá trị OD của mẫu đó lớn hơn một giá trị ngưỡng (cut-off) đáng tin cậy. Thông thường, giá trị ngưỡng được tính dựa trên giá trị OD trung bình của một lượng lớn các mẫu âm tính với kháng nguyên mục tiêu. Số mẫu âm càng lớn thì giá trị ngưỡng càng đáng tin cậy.
Công thức xác định giá trị ngưỡng (cut off):
Cut off = OD trung bình của các mẫu âm + 2* STD lớn nhất của các mẫu âm
Số mẫu âm mà chúng tôi sử dụng dể tính giá trị ngưỡng là 15 mẫu. Giá trị ngưỡng tính được là 0,63.
Huyết thanh của trâu, bò nghi nhiễm bệnh tiên mao trùng được giữ trong tủ - 800C. 60 mẫu huyết thanh gồm 46 mẫu huyết thanh trâu và 14 mẫu huyết thanh bò được thu thập để phát hiện kháng thể đặc hiệu của T. evansi. Các mẫu máu của những con trâu,bò này được kiểm tra song song bằng phương pháp PCR để so sánh hiệu quả phát hiện. Kết quả được trình bày trong bảng 3.9.
Bảng 3.5. Kết quả xác định trâu, bò nhiễm bệnh tiên mao trùng bằng phƣơng pháp ELISA và PCR Kết quả phản ứng ELISA Kết quả phản ứng PCR Số mẫu dƣơng tính Số mẫu âm tính Tổng số Số mẫu dương tính 6 3 9 Số mẫu âm tính 2 49 51 Tổng số 8 52 60
Với 60 mẫu huyết thanh trâu, bò thu thập ngoài thực địa, phản ứng PCR đã phát hiện được 8 mẫu dương tính và 52 mẫu âm tính, tỷ lệ phát hiện dương tính đạt 13,3%; trong khi đó, phản ứng ELISA phát hiện được 9 mẫu dương tính và 51 mẫu âm tính, tỷ lệ phát hiện dược tính đạt 15%. So với phương pháp PCR, tỷ lệ trùng hợp ngẫu nhiên của các mẫu dương tính ELISA là: 6/(6+2) x 100%= 75% , tỷ lệ trùng hợp ngẫu nhiên của các mẫu âm tính ELISA là 49/(49+3) x 100%= 94%, tỷ lệ trùng hợp ngẫu nhiên tổng số là: (6+49)/60* 100%= 91,7%. Trong nghiên cứu này, độ nhạy và độ đặc hiệu của phản ứng ELISA đạt tới 94,12% và 99,44% và theo Holland, 2001[26]: độ nhạy của phản ứng PCR là 78,2%, độ đặc hiệu là 100%. Trong thực tế, ELISA là phương pháp phát hiện gián tiếp bệnh tiên mao trùng thông qua sự có mặt của kháng thể đặc hiệu với T. evansi trong khi đó PCR là phương pháp phát hiện trực tiếp sự có mặt của ký sinh trùng trong máu của vật chủ. Vì vậy, khi con vật mới mắc bệnh trong khoảng 1 tuần đầu, hàm lượng kháng thể tạo ra thấp có thể dẫn tới hiện tượng âm tính giả với phản ứng ELISA. Các trường hợp vật chủ mới khỏi bệnh, ký sinh trùng không còn tồn tại trong cơ thể nhưng kháng thể đặc hiệu vẫn tồn lưu trong máu dẫn tới hiện tượng dương tính giả của ELISA. Mặc dù vậy, phản ứng ELISA có ưu điểm nổi trội đó là có thể xét nghiệm cùng lúc nhiều mẫu bệnh phẩm, thời gian xét nghiệm nhanh, quy trình thực hiện đơn giản.
KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ