- Năm 2012, Liang Haidong và cộng sự đã công bố nghiên cứu về việc sử dụng kết hợp gôm arabic, maltodextrin và protein đậu nành để tạo thành microencapsul
3Chất lƣợng thành
phẩm Yêu cầu
3.1 Hình thức - Thuốc tiêm đóng trong ống thủy tinh trung tính màu hổ phách, dung tích 5 ml, đáy bằng, cổ có eo, đầu ống hàn tròn kín.
- Nhãn in trên ống bằng sơn men, rõ nét.
3.2 Độ trong -Dung dịch trong suốt, màu vàng, không có cắn hay vật lạ
3.3 Thể tích 5,0-5,5 ml/ống
3.4 pH 6,0– 7,0
3.5 Định tính Chế phẩm phải thể hiện phép thử định tính của cao
ginkgo biloba
3.6 Định lượng Hàm lượng flavonoid glycosid trong chế phẩm từ 90% đến 110%
3.7 Độ vô khuẩn Chế phẩm phải vô khuẩn
3.8 Nội độc tố Không quá 6,0 đơn vị nội độc tố trên 1 ml chế phẩm
3.5.2.2. Phương pháp thử
Chỉ tiêu Phƣơng pháp thử
1 Hình thức Thử bằng cảm quan
2 Độ trong Thử theo DĐVN IV, phụ lục 5.12
3 Thể tích Thử theo DĐVN IV, phụ lục 1.14, mục B, phương pháp 1.
4 pH Dùng máy đo pH
5 Định tính Trên sắc ký đồ của phần định lượng, dung dịch thử phải cho các pic của quercetin, kaempferol và isorhamnetin.
6 Định lượng Định lượng flavonoid glycosid trong chế phẩm theo tiêu chuẩn cơ sở như sau:
- Thuốc thử (theo DĐVN IV)
Dung dịch acid hydroclorid 25% (TT) methanol (TT)
64 - Điều kiện sắc ký:
Cột C18, kích thước hạt 5 µm, chiều dài cột 25 cm, đường kính cột 4mm
Detector UV 370 nm
Pha động: Methanol – Dung dịch acid phosphoric (52:48) được lọc qua màng 0,45 µm, đuổi khí (điều chỉnh tỉ lệ pha động nếu cần).
Tốc độ dòng 1,0 ml/phút Thể tích tiêm mẫu: 20µl - Tiến hành:
Dung dịch chuẩn: Cân chính xác 0,0100 gam quercetin chuẩn cho vào bình định mức 100 ml, thêm 20 ml methanol, 5 ml acid hydroclorid 25%, thêm 5 ml nước, siêu âm, bổ sung methanol đủ thể tích 100 ml. Lọc qua màng lọc 0,45 µm thu được dung dịch chuẩn nồng độ khoảng 100 µg/ml.
Dung dịch thử: Lấy 30 ống thuốc tiêm, bẻ đầu ống, lấy dịch trong các ống trộng đều. Hút chính xác 20 ml chế phẩm vào bình nón nút mài, thêm 20 ml methanol, 5 ml acid hydroclorid 25%, thêm 5 ml nước, lắc đều, đun cách thủy 60 phút. Để nguội và chuyển dung dịch này vào bình định mức 100 ml, rửa và thêm methanol vừa đủ thể tích, lắc đều. Lọc qua màng lọc 0,45 µm.
Tiêm lần lượt dung dịch thử và dung dịch chuẩn vào hệ thống sắc ký, ghi lại diện tích pic quercetin (tR~ 15,6), kaempferol (tR~ 26,6), isorhamnetin (tR~ 29,7).
- Hàm lƣợng (mg) flavonoid glycosid tính theo quercetin trong 1 ml chế phẩm: t c c t C S p C S ml mg X 2,514 ) / ( Trong đó:
Sc: Diện tích pic Quercetin dung dịch chuẩn (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
St: Tổng diện tích pic Quercetin, kaempferol, isorhamnetin.
Cc: Nồng độ dung dịch chuẩn (mg/ml). Ct: Nồng độ dung dịch thử (mg/ml).
65
p: hàm lượng quercetin trong quercetin dihydrat 2,514: Hệ số chuyển đổi từ Quercetin sang
flavonoid glycosid 7 Độ vô
khuẩn*
Thử theo DĐVN IV, phụ lục 10.8, phương pháp màng lọc.
8 Nội độc tố* Thử theo DĐVN IV, phụ lục 10.3
Ghi chú “ * ”: Do chưa có điều kiện để đánh giá chỉ tiêu độ vô khuẩn và nội độc tố, mà chỉ dựa trên yêu cầu chung của thuốc tiêm trong dược điển để đưa 2 chỉ tiêu này vào dự thảo tiêu chuẩn thành phẩm thuốc tiêm.
3.5.2.3. Đóng gói, ghi nhãn và bảo quản
- Hộp 1 vỉ x 5 ống; hộp 2 vỉ x 5 ống. - Nhãn rõ ràng, đúng qui chế.
- Bảo quản nơi khô, mát, tránh ánh sáng, nhiệt độ không quá 30oC.
3.6. Theo dõi độ ổn định của thuốc tiêm pha theo công thức tối ƣu
Tiến hành pha chế 2 lít thuốc tiêm theo sơ đồ hình 3.9 (Sơ đồ quá trình pha chế thuốc tiêm ginkgo bilobadự thảo), đóng ống thủy tinh 2 ml màu hổ phách, sục nitrogen trong quá trình đóng ống.
Theo dõi mẫu trong 3 điều kiện:
- Nhiệt độ phòng không tránh ánh sáng. - Trong tủ vi khí hậu (40 ± 2oC).
- Trong tủ sấy (50 ± 2oC).
Tại các thời điểm khác nhau, lấy mẫu quan sát cảm quan và định lượng hàm lượng flavonoid glycosid còn lại và đo pH dung dịch thu được kết quả trong bảng 3.27.
Bảng 3.27. Kết quả theo dõi độ ổn định của thuốc tiêm ginkgo biloba
Thời gian (tuần) Nhiệt độ phòng 40oC 50oC Hàm lƣợng còn lại (%) ΔpH Hàm lƣợng còn lại (%) ΔpH Hàm lƣợng còn lại (%) ΔpH 2 99,10 0,03 98,71 0,08 97,44 0,10
66
4 98,78 0,04 98,43 0,08 96,14 0,11
6 98,37 0,06 97,94 0,10 - -
8 98,14 0,07 97,62 0,12 96,44 0,10
12 98,02 0,07 96,11 0,12 93,33 0,11
Nhận xét: Sau thời gian bảo quản 12 tuần ở các điều kiện khác nhau, thuốc tiêm pha theo công thức tối ưu đều ổn định về mặt hình thức, hàm lượng flavonoid glycosid còn lại đều trên 90%, pH dung dịch nằm trong khoảng pH đã khảo sát.
Tuy nhiên đây mới chỉ là những kết quả ban đầu, cần tiếp tục theo dõi thêm để xác định tuổi thọ của thuốc.
3.7. Dự đoán tuổi thọ của thuốc tiêm ginkgo biloba đã pha
Dựa trên kết quả nghiên cứu độ ổn định của thuốc tiêm ginkgo biloba, bằng
phương pháp lão hóa cấp tốc, xử lý số liệu để dự đoán tuổi thọ của thuốc tiêm. (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
Bảng 3.28 . Phương trình hồi qui tuyến tính biểu diễn mối quan hệ giữa hàm lượng flavonoid glycosid còn lại (C) và thời gian bảo quản (t) của mẫu
Nhiệt độ Bậc phản ứng Phƣơng trình hồi quy tuyến tính R2
40oC Bậc 0 C = - 0,2582.t + 99,396 0,9627 Bậc 1 lnC = - 0,0027.t + 4,5993 0,9614 Bậc 2 1/C = 3.10-5.t + 0,0101 0,9601 50oC Bậc 0 C = -0,3535.t + 98,135 0,7918 Bậc 1 lnC = -0,0037.t + 4,5866 0,7909 Bậc 2 1/C = 4.10-5.t + 0,0102 0,7900 Nhận xét:
Ở nhiệt độ 40oC, các phương trình hồi quy tuyến tính có bình phương hệ số tương quan R2 khoảng 0,96; nhưng ở nhiệt độ 50oC giá trị bình phương hệ số tương quan R2 khoảng 0,79 không có giá trị thống kê. Do đó, không nên sử dụng hệ số nhiệt để dự đoán tuổi thọ của thuốc tiêm ginkgo biloba.
67