21
1.5.2.1. Các nghiên cứu về phương pháp định lượng và thành phần hóa học cao
ginkgo biloba.
Theo sự phát triển của phương pháp định lượng, khi tiến hành định lượng thành phần flavonoid nói chung rồi thành phần flavonoid glycosid trong cao ginkgo biloba
nói riêng, các nhà khoa học đã dần khám phá ra thành phần hóa học phong phú của cao
ginkgo biloba.
- Năm 1988, Daigle và Conkerton đã nghiên cứu về phương pháp HPLC định lượng flavonoid. Detector UV được coi là công cụ sử dụng rất phổ biến và mạnh nhất lúc đó [17].
- Năm 1993, Sticher đề xuất phương pháp tiêu chuẩn hóa thuốc từ dược liệu là hợp chất flavonol. Sau đó Li và Fitzloff sử dụng phương pháp HPLC với detector mảng diod để so sánh flavonol aglycon trong các chế phẩm thuốc và công bố phương pháp định lượng terpen lacton và flavonol aglycon bằng HPLC với detector tán xạ bay hơi (evaporative light scattering detection - ELSD) [59]. Tiếp sau đó Kressmann và cộng sự định lượng flavonoid toàn phần trong thuốc, phương pháp HPLC bắt đầu có giá trị áp dụng với các chế phẩm Ginkgo biloba trên thị trường thuốc tại Mỹ [40].
- Năm 2004, Dubber, Kanfer và công sự nghiên cứu xác định 5 thành phần: rutin, quercetin, quercitrin, Kaempferol và isorhamnetin sử dụng phương pháp HPLC, cột C18 (250 x 2 mm) ở 45 0C, pha động là hỗn hợp acetonitril: acid formic (0,3 %) với tốc độ dòng 0,4 ml/phút, sử dụng detector mảng quang học diod. Kết quả cho phương pháp này tuyến tính trên phạm vi nồng độ là 3-26 µg/ml cho tất cả các flavonoid và giới hạn định lượng các thành phần của cao ginkgo biloba lần lượt là 2,76; 0,77; 1,11; 1,55 và
1,03 µg/ml đối với rutin, quercetrin, quercetin, kaempferol và isorhamnetin. Phương pháp được phát triển và sử dụng để định lượng các chế phẩm rắn đường uống từ cao
Ginkgo biloba. Ưu điểm của phương pháp là độ chính xác cao hơn, tiết kiệm thời gian
22
- Theo Dubber và cộng sự, định lượng terpenoid bằng detector tán xạ bay hơi có nhiều ưu điểm hơn cả, ít tốn kém, phù hợp để phân tích các hợp chất không bay hơi và chứa nhóm mang màu yếu như các ginkgolid [23].
- Năm 2008, Yang Zhao và cộng sự định hướng nghiên cứu phương pháp định lượng đồng thời các thành phần trong ginkgo biloba bằng LC-MS/MS.
- Năm 2009, Teris A. van Beek và Paola Montoro đã báo cáo tổng kết các phân tích hóa học và kiểm soát chất lượng của cao ginkgo biloba chiết xuất từ lá cây bạch quả một cách toàn diện như sau: Từ năm 2001, hơn 3000 nghiên cứu về ginkgo biloba, trong đó có khoảng 400 nghiên cứu về phân tích hóa học. Cùng thời gian này hơn 2500 bằng sáng chế được nộp liên quan đến thành phần flavonoid glycosid, terpenoid (các ginkgolid và bilobalid), biflavones, proanthocyanidins, alkylphenol và polyprenols. Việc tách và phát hiện các hợp chất được tiến hành bởi RP-HPLC với ELSD, RI hoặc MS; hoặc phương pháp GC/FID hoặc GC/MS.
- Năm 2010, Hu Jun và cộng sự đã chứng minh sự phù hợp của phương pháp thủy phân cao Ginkgo biloba bằng acid, xác định tổng lượng flavonoid trong huyết tương
thỏ bằng HPLC mảng diod có thể áp dụng trong nghiên cứu dược động học thuốc [34].
Nhƣ vậy:
Sự phát triển của công nghệ đã giúp các nhà khoa học tìm ra thành phần cao
ginkgo biloba ngoài các hợp chất flavonoid glycosid còn có terpenoid và acid
ginkgolic.
Các phương pháp định lượng kể trên đều phát triển từ phương pháp HPLC đã được đưa vào dược điển, nhưng sử dụng detector hiện đại hơn detector UV trong dược điển như detector khối phổ, tán xạ bay hơi ... nhằm đạt được mục đích nghiên cứu nhất định. Ví dụ: với mục tiêu tiết kiệm thời gian định lượng, các nhà khoa học đã tìm ra phương pháp định lượng đồng thời các thành phần của cao ginkgo biloba là LC-
MS/MS.
Bên cạnh đó, các phương pháp định lượng nhanh hỗ trợ trong nghiên cứu dược động học thuốc có giá trị khoa học rất lớn.
23
1.5.2.2. Các nghiên cứu về thuốc viên chứa cao ginkgo biloba
Kể từ khi tác dụng của cao ginkgo biloba được công bố, có rất nhiều chế phẩm
chứa cao ginkgo biloba ra đời, ban đầu là dạng viên nang và viên nén. Song song với việc bào chế thuốc dạng viên, các nhà khoa học tìm cách đánh giá sinh khả dụng của thuốc dùng theo đường uống. Sau đây là một số kết quả:
- Năm 2004, Lena và Philip đã tiến hành nghiên cứu về độ ổn định của flavonoid từ cao ginkgo biloba và chế phẩm viên nén trong đường tiêu hóa mô phỏng. Kết quả