Từ các kết quả nghiên cứu trong mục 3.1, 3.2, 3.3 và 3.4, qui trình pha chế thuốc tiêm được dự thảo như hình 3.9.
Hình 3.9. Sơ đồ qui trình pha chế thuốc tiêm ginkgo biloba dự thảo Cao ginkgo biloba
Điều chỉnh pH PG, 2-pyrolidon, natri
metabisulfit, dinatri edetat, dinatri hydrophosphat, sorbitol,
alcol benzylic, nước
Hòa tan
Đóng ống tiêm
Biệt trữ bán thành phẩm
Đóng gói, hoàn thiện
Kiểm tra thể tích
Kiểm nghiệm thành phẩm Lọc 0,2 àm
Thêm vừa đủ thể tích Nước cất pha tiêm
Sục khí nitrogen
Kiểm tra độ trong, định lượng bán thành phẩm
Kiểm nghiệm bán thành phẩm
62 Mô tả qui trình sản xuất:
- Hòa tan riêng cao Ginkgo biloba trong hỗn hợp dung môi PG và 2-pyrolidon.
- Cấp 2/3 lượng nước vào tank pha chế rồi hòa tan lần lượt các chất sau: dinatri hydrophosphat, natri edetat, natri metabisulfit, alcol benzylic, sorbitol vào tank pha chế.
- Cho từ từ hỗn hợp cao Ginkgo biloba đã hòa tan hoàn toàn vào tank pha chế.
- Đo và điều chỉnh pH bằng dung dịch acid hydrocloric.
- Bổ sung thêm nước đến đủ thể tích.
- Lọc dịch qua 0,2àm.
- Đóng lọ thuốc tiêm màu hổ phách, có sục nitrogen.
- Hoàn thiện phần dán nhãn, đóng gói, biệt trữ.
3.5.2. Dự thảo tiêu chuẩn kiểm nghiệm 3.5.2.1. Yêu cầu kỹ thuật
1 Công thức 1 ống thuốc tiêm
Cao ginkgo biloba 17,5 mg
Tá dược: dinatri edetat, natri metabisulfit, dinatri hydrophosphat, sorbitol,PG, 2-pyrolidon và nước cất pha tiêm vừa đủ
5 ml
2 Nguyên liệu Tiêu chuẩn
Cao ginkgo biloba BP 2013
Dinatri edetat BP 2013
Dinatri hydrophosphat DĐVN IV
Sorbitol DĐVN IV
Propylen glycol DĐVN IV
2-pyrolidon DĐVN IV
Natri metabisulfit DĐVN IV
Alcol benzylic DĐVN IV
Nước cất pha tiêm DĐVN IV
63 3 Chất lƣợng thành
phẩm Yêu cầu
3.1 Hình thức - Thuốc tiêm đóng trong ống thủy tinh trung tính màu hổ phách, dung tích 5 ml, đáy bằng, cổ có eo, đầu ống hàn tròn kín.
- Nhãn in trên ống bằng sơn men, rõ nét.
3.2 Độ trong -Dung dịch trong suốt, màu vàng, không có cắn hay vật lạ
3.3 Thể tích 5,0-5,5 ml/ống
3.4 pH 6,0– 7,0
3.5 Định tính Chế phẩm phải thể hiện phép thử định tính của cao ginkgo biloba
3.6 Định lượng Hàm lượng flavonoid glycosid trong chế phẩm từ 90% đến 110%
3.7 Độ vô khuẩn Chế phẩm phải vô khuẩn
3.8 Nội độc tố Không quá 6,0 đơn vị nội độc tố trên 1 ml chế phẩm
3.5.2.2. Phương pháp thử
Chỉ tiêu Phương pháp thử
1 Hình thức Thử bằng cảm quan
2 Độ trong Thử theo DĐVN IV, phụ lục 5.12
3 Thể tích Thử theo DĐVN IV, phụ lục 1.14, mục B, phương pháp 1.
4 pH Dùng máy đo pH
5 Định tính Trên sắc ký đồ của phần định lượng, dung dịch thử phải cho các pic của quercetin, kaempferol và isorhamnetin.
6 Định lượng Định lượng flavonoid glycosid trong chế phẩm theo tiêu chuẩn cơ sở như sau:
- Thuốc thử (theo DĐVN IV)
Dung dịch acid hydroclorid 25% (TT)
methanol (TT)
Dung dịch acid phosphoric 0,5% (TT)
64 - Điều kiện sắc ký:
Cột C18, kớch thước hạt 5 àm, chiều dài cột 25 cm, đường kính cột 4mm
Detector UV 370 nm
Pha động: Methanol – Dung dịch acid phosphoric (52:48) được lọc qua màng 0,45 àm, đuổi khớ (điều chỉnh tỉ lệ pha động nếu cần).
Tốc độ dòng 1,0 ml/phút
Thể tớch tiờm mẫu: 20àl - Tiến hành:
Dung dịch chuẩn: Cân chính xác 0,0100 gam quercetin chuẩn cho vào bình định mức 100 ml, thêm 20 ml methanol, 5 ml acid hydroclorid 25%, thêm 5 ml nước, siêu âm, bổ sung methanol đủ thể tích 100 ml. Lọc qua màng lọc 0,45 àm thu được dung dịch chuẩn nồng độ khoảng 100 àg/ml.
Dung dịch thử: Lấy 30 ống thuốc tiêm, bẻ đầu ống, lấy dịch trong các ống trộng đều. Hút chính xác 20 ml chế phẩm vào bình nón nút mài, thêm 20 ml methanol, 5 ml acid hydroclorid 25%, thêm 5 ml nước, lắc đều, đun cách thủy 60 phút. Để nguội và chuyển dung dịch này vào bình định mức 100 ml, rửa và thêm methanol vừa đủ thể tích, lắc đều. Lọc qua màng lọc 0,45 àm.
Tiêm lần lượt dung dịch thử và dung dịch chuẩn vào hệ thống sắc ký, ghi lại diện tích pic quercetin (tR~ 15,6), kaempferol (tR~ 26,6), isorhamnetin (tR~ 29,7).
- Hàm lƣợng (mg) flavonoid glycosid tính theo quercetin trong 1 ml chế phẩm:
t c c t
C S
p C
ml S mg
X
2 , 514 )
/ (
Trong đó:
Sc: Diện tích pic Quercetin dung dịch chuẩn
St: Tổng diện tích pic Quercetin, kaempferol, isorhamnetin.
Cc: Nồng độ dung dịch chuẩn (mg/ml).
Ct: Nồng độ dung dịch thử (mg/ml).
65
p: hàm lượng quercetin trong quercetin dihydrat
2,514: Hệ số chuyển đổi từ Quercetin sang flavonoid glycosid
7 Độ vô khuẩn*
Thử theo DĐVN IV, phụ lục 10.8, phương pháp màng lọc.
8 Nội độc tố* Thử theo DĐVN IV, phụ lục 10.3
Ghi chú “ * ”: Do chưa có điều kiện để đánh giá chỉ tiêu độ vô khuẩn và nội độc tố, mà chỉ dựa trên yêu cầu chung của thuốc tiêm trong dược điển để đưa 2 chỉ tiêu này vào dự thảo tiêu chuẩn thành phẩm thuốc tiêm.
3.5.2.3. Đóng gói, ghi nhãn và bảo quản - Hộp 1 vỉ x 5 ống; hộp 2 vỉ x 5 ống.
- Nhãn rõ ràng, đúng qui chế.
- Bảo quản nơi khô, mát, tránh ánh sáng, nhiệt độ không quá 30oC.