Trong quá trình thực hiện đề tài này, chúng tôi tiến hành tách chiết protein từ mô gan ung thư và mô gan bình thường (mẫu đối chứng). Mẫu mô được cắt nhỏ, ngâm trong dịch chiết PBS 0,05M pH7,4 và đệm phá tế bào (Lysis) rồi thực hiện các bước ly tâm để thu lấy các phân đoạn dịch chiết protein. Kết quả tách chiết được kiểm tra bằng điện di SDS-PAGE (hình 5).
1 2 3 4 5 1 2 3 4 5
A. Dịch chiết mô gan bình thường B. Dịch chiết mô gan ung thư
Hình 5. Điện di kiểm tra các phân đoạn dịch chiết protein từ mô gan bình thường và mô gan ung thư trên gel polyacrylamide 10% có SDS
(Giếng 1: Dịch chiết PBS1; Giếng 2: Dịch chiết PBS2; Giếng 3: Dịch chiết Lysis1; Giếng 4: Dịch chiết Lysis2; Giếng 5: Dịch chiết Lysis3)
Trong điện di SDS-PAGE, protein được phân tách theo khối lượng phân tử, các protein có khối lượng phân tử khác nhau thì được hiện lên dưới dạng từng băng vạch khác nhau. Hiệu quả tách chiết protein được đánh giá thông qua thành phần và hàm lượng protein thể hiện bằng số lượng các băng và độ đậm nhạt của các băng protein. Khi nhuộm bản gel bằng thuốc nhuộm có chứa Coomassie, băng protein bắt màu thuốc nhuộm càng đậm chứng tỏ hàm lượng protein tại đó càng lớn. Số lượng băng trong một giếng điện di càng nhiều chứng tỏ thành phần protein của mẫu càng đa dạng phong phú.
34
Trong kết quả điện di kiểm tra dịch chiết protein từ mẫu mô gan (hình 5), chúng tôi thấy trong các giếng đã xuất hiện nhiều băng protein trải đều từ trên xuống dưới, chứng tỏ mẫu dịch chiết protein từ mô gan có thành phần protein đa dạng. Tuy nhiên, các phân đoạn dịch chiết protein mô gan có độ sạch khác nhau, ở các giếng 1, 3 (hình 5A) và giếng 1 (hình 5B), sự biểu hiện của các băng protein là chưa rõ ràng, hơn nữa, ở các giếng vẫn có hiện tượng kéo vệt dọc.
Do đó, chúng tôi tiến hành tủa mẫu dịch chiết thô bằng dung dịch acetone 100% theo tỉ lệ 1 thể tích mẫu và 4 thể tích dung dịch tủa ở -20oC nhằm tập trung protein có trong mẫu, đồng thời loại mỡ và các chất phi protein. Các dịch chiết sau khi tủa được hòa lại bằng đệm lysis và trộn lại với nhau tạo thành dịch chiết protein đầy đủ của mô gan dùng để tiến hành bước thí nghiệm tiếp theo.