10 A/Duck/VNBN/06/12 Vịt Bắc Ninh 24/02/
3.3.c tính kháng nguyên của các chủng virút clade 2.3.2.1B
ðể nghiên cứu ñặc tính kháng nguyên của các chủng vi rút cúm gia cầm phân lập ở các ñịa phương và theo thời ñiểm khác nhau từ 10/2010 ñến tháng 2/2012, chúng tôi ñã chế kháng thể ña dòng cho 3 chủng vi rút theo 3 nhánh phát sinh loài: Các chủng vi rút ñã ñược sử dụng ñể chế kháng huyết thanh là chủng vi rút cúm A/Duck/VNNB/03/10, A/Ck/VNVP/03/11, và A/Duck/VNBN/06/12 ; kháng huyết thanh có tên tương ứng tại bảng 3.7 là NB/03/10, VP/03/11 và BN/06/12. Mỗi kháng huyết thanh lần lượt ñược thực hiện HI với mỗi chủng vi rút phân lập, kết quả lập lại 5 lần ñược xem là chỉ số HI miễn dịch chéo giữa các chủng và ñược trình bày ở bảng 3.7. Bảng 3.7. Chỉ số HI(log2) miễn dịch chéo giữa các chủng vi rút phân lập Kháng huyết thanh TT Kháng nguyên NB/03/10 VP/03/11 BN/06/12 1 A/Duck/VNNB/03/10 8,00 5,80 6,20 2 A/Ck/VNVP/03/11 5,80 8,00 6,40 3 A/Ck/VNHD/04/11 5,60 7,80 6,60 4 A/Ck/VNQT/06/11 5,60 7,60 6,80 5 A/Duck/VNHD/07/11 5,40 7,40 6,80 6 A/MD/VNHD/01/12 5,40 7,40 7,00 7 A/Ck/VNVP/03/12 5,20 6,80 7,80 8 A/Ck/VNTB/10/12 5,00 6,60 7,60 9 A/Ck/VNHP/05/12 5,20 6,80 7,80 10 A/Duck/VNBN/06/12 5,20 6,60 8,00 Trung bình 5,22 ± 0,86 6,62 ±0,67 6,71 ±0,63
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 52
Nhận xét :
(1) ðối với một kháng huyết thanh, chỉ số HI là khác nhau khi sử dụng các chủng phân lập khác nhau, chứng tỏ ñặc tính kháng nguyên của các chủng là khác nhau: Với kháng huyết thanh NB/03/10, chỉ số HI dao ñộng trong khoảng 5,00 ñến 8log2 ; ñối với kháng huyết thanh VP/03/11, chỉ số HI dao ñộng từ 5,80 ñến 8,00log2và BN/06/12 là từ 6,20 ñến 8,00log2. Chỉ số HI cao nhất tương ứng với cặp kháng nguyên-huyết thanh kháng chính chủng ñã ñược sử dụng ñể chế huyết thanh. BN/06/12 có hiệu giá HI cao với các chủng vi rút phân lập năm 2012 nhưng giảm dần so với các chủng vi rút phân lập lần lượt ở các năm 2011 và năm 2010.
Nhận xét này chứng tỏ các chủng vi rút có quan hệ họ hàng gần gũi, trong cùng một clade có ñặc tính kháng nguyên khác nhaụ
(2) Ba chủng vi rút sử dụng ñể chế kháng huyết thanh thuộc về ba nhánh của cây phả hệ ở hình 3.1 tương ứng với một chủng cho mỗi năm 2010, 2011 và 2012 (bảng 3.1). Nhìn chung, chỉ số HI miễn dịch chéo là khá cao ñối với các chủng phân lập cùng năm và thấp hơn ñối với các chủng phân lập ở các năm khác. Huyết thanh kháng chủng A/Ck/VNVP/03/11 có hiệu giá HI cao ñối với các chủng phân lập cùng năm 2011 nhưng giảm >1log2 với các chủng phân lập năm 2012, thậm chí >2log2 với chủng phân lập năm trước ñó. Hiện tượng này có thể phản ánh sự giảm tương ñồng kháng nguyên theo thời gian của các chủng vi rút cúm gia cầm thậm chí trong cùng một cladẹ
(3) Trong khi chấp nhận sự ña dạng kháng nguyên của các chủng vi rút gây dịch ở các ổ dịch khác nhau (tính kháng nguyên không hoàn toàn tương ñồng) và thậm chí sự song song tồn tại các vi rút mới, trên nền của chủng ñang lưu hành (xem ở hình 3.1), việc lựa chọn ñược một chủng ñại diện cho một clade làm ứng viên sử dụng trong thử thách cường ñộc ñể ñánh giá khả năng bảo hộ của văc xin là rất cần thiết. Có thể nói chủng có ñặc tính kháng nguyên gần nhất với ña số các cá thể chủng vi rút trong số ñã phân lập là chủng mang tính ñại diện cao hơn về ñặc tính kháng nguyên. Giá trị trung bình ở bảng 3.7 cho thấy ñối với
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 53 3 chủng vi rút ñã ñược sử dụng ñể chế huyết thanh, chủng A/Duck/VNBN/06/12 (chỉ số HI trung bình là 6,71 ± 0,63log2) có thể có quan hệ kháng nguyên gần gũi với 9 chủng còn lại cao hơn so với chủng A/Ck/VNVP/03/11 (6,62 ± 0,67log2) và thấp nhất là với chủng A/Duck/VNNB/03/10 (5,22 ± 0,86log2) ñã ñược sử dụng ñể chế kháng huyết thanh tương ứng.
(4) ðặc tính miễn dịch chéo là không ñồng nhất giữa cặp [huyết thanh A + Kháng nguyên B] và [huyết thanh B + Kháng nguyên A], thí dụ kháng huyết thanh NB/03/10 cho chỉ số HI là 5,20log2 khi ngăn trở ngưng kết với kháng nguyên chủng A/Duck/VNBN/06/12, nhưng cặp kháng huyết thanh BN/06/12 + kháng nguyên vi rút chủng A/Duck/VNNB/03/10 cho hiệu giá HI là 6,20log2, cao hơn 1 ñơn vị log2. Tuy mới chỉ thực hiện phản ứng HI chéo với kháng huyết thanh từ 3 chủng, kết quả ở bảng 3.7 cho thấy xu hướng chủng xuất hiện sau cho chỉ số HI miễn dịch chéo trung bình cao hơn các chủng trước ñó. Do trong thí nghiệm này kháng huyết thanh ñã ñược chế từ kháng nguyên toàn vi rút, có thể nhận ñịnh kết quả này phù hợp với nguyên tắc di truyền tiến hóa chung là chủng mới còn mang ñặc tính của chủng cũ nhưng chủng cũ chưa có các ñặc tính của chủng mớị
Kết quả trình bày ở các mục 3.1 ñến 3.3 trên ñây chứng tỏ trong nghiên cứu này, chúng tôi ñã tiến hành xác ñịnh ñặc tính của các các chủng vi rút cúm gia cầm có ñộc lực caọ Mặc dù các chủng vi rút có quan hệ di truyền và phát sinh loài rất gần gũi, ñộc lực của chúng khác nhau trên phôi trứng gà 10 ngày tuổi và trên tế bào MDCK. Nhằm tiến tới lựa chọn ñược chủng có ñặc tính kháng nguyên chung, có thể ñại diện cho nhóm chủng vi rút ñã phân lập, kết quả xác ñịnh ñặc tính kháng nguyên một cách gián tiếp thông qua miễn dịch chéo cho thấy có thể lựa chọn chủng vi rút A/Duck/VNBN/06/12 cho các nghiên cứu tiếp theọ Chủng A/Duck/VNBN/06/12 có các ñặc tính : (i) Là chủng vi rút có ñộc lực cao thuộc calde 2.3.2.1B với 9 chủng cùng nhóm (ii) Thích ứng và phát triển tốt trên phôi trứng gà 10 ngày tuổi và trên nuôi cấy tế bào MDCK; (iii) Có ñộc lực cao nhất trên phôi trứng : Gây chết phôi sau khi tiêm trung bình ở 27 giờ và có liều gây chết 50% phôi trung bình thấp nhất (100 µl, ELD50 = 10-6,30) ; (iv) Có
Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sỹ khoa học Nông nghiệp ……… 54 quan hệ kháng nguyên tính gần gũi nhất với các chủng phân lập khác trong cùng clade 2.3.2.1B.
Ở phần kế tiếp chúng tôi trình bày những nghiên cứu về ñộc lực trên ñộng vật thí nghiệm chỉ với chủng vi rút cúm A/Duck/VNBN/06/12 ñã lựa chọn nàỵ