ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ VI SINH VẬT HIẾU KHÍ

Cấy lên môi trường cấy qui định, sử dụng hai đĩa, dùng một lượng mẫu thử quy định nếu sản phẩm ở dạng lỏng hoặc với một lượng huyền phù ban đầu quy định nếu sản phẩm ở dạng khác. Trong cùng một điều kiện, cấy các dung dịch pha loãng thập phân của mẫu thử hoặc của huyền phù ban đầu vào hai đĩa cho mỗi dung dịch pha loãng. Các đĩa này được ủ trong điều kiện hiếu khí ở nhiệt độ 300C trong 72 ± 6giờ.

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TPHCM KHOA CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM MƠN PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM ĐỊNH LƯỢNG TỔNG SỐ VI SINH VẬT HIẾU KHÍ NHĨM GVHD: PHAN THỊ KIM LIÊN DANH SÁCH NHÓM STT SINH VIÊN MSSV Nguyễn Thanh Phong Trần Thị Hậu Nguyễn Thị Vân Nguyễn Đăng Tam 2005130266 Nguyễn Văn Tuấn 2005130363 NỘI DUNG TỔNG QUAN MƠI TRƯỜNG VÀ HĨA CHẤT QUY TRÌNH PHÂN TÍCH TÍNH KẾT QUẢ TỔNG QUAN VỀ VSV HIẾU KHÍ Định nghĩa • Vi sinh vật hiếu khí vi khuẩn tăng trưởng hình thành khuẩn lạc điều kiện có diện ơxi phân tử • Tổng số vi sinh vật hiếu khí tổng số vi sinh vật thuộc nhóm vi sinh vật hiếu khí tồn mơi trường 2 Ngun tắc  Cấy lên môi trường cấy qui định, sử dụng hai đĩa, dùng lượng mẫu thử quy định sản phẩm dạng lỏng với lượng huyền phù ban đầu quy định sản phẩm dạng khác  Trong điều kiện, cấy dung dịch pha loãng thập phân mẫu thử huyền phù ban đầu vào hai đĩa cho dung dịch pha loãng  Các đĩa ủ điều kiện hiếu khí nhiệt độ 300C 72 ± 6giờ Ứng dụng Vi sinh vật Nguy hư hỏng Chỉ tiêu tổng VSV hiếu khí dùng để đánh giá chất lượng mẫu Thời hạn bảo quản Mức độ vệ sinh Bảo quản sản phẩm ĐỊNH NGHĨA VÀ NGUN TẮC MƠI TRƯỜNG VÀ HĨA CHẤT Mơi trường - hóa chất Mục đích Saline Pepton Water (SPW) Thành phần: NaCl Seline Pepton Water (SPW) Pha loãng mẫu 8,5g; pepton: 1g; nước: 1000ml Plate count (PCA) Plateagar count agar Nuôi cấy vi sinh vât hiếu (PCA) Thành phần: pepton từ khí 2,5g; pH glocoza dạng khan: HCl 10%casein: 5g; cao nấm men:Chỉnh 1g; thạch agar: 9-18g; nước: 1000ml NaOH 10% QUY TRÌNH PHÂN TÍCH Quy trình định lượng tổng số vi khuẩn hiếu khí Các bước tiến hành Bước 1: Chuẩn bị mẫu thử huyền phù ban đầu • Định lượng mẫu Cân xác 10g/25g mẫu thực phẩm rắn 10ml/25ml mẫu thực phẩm lỏng đưa vào cốc thủy tinh vô trùng (nếu mẫu rắn phải dập mẫu) • Đồng mẫu  Đổ mẫu vào bình tam giác có 90 ml SPW vô trùng Tiến hành đồng máy stomacher 60 giây thu nồng độ 10-1  Dùng pipetman với đầu tip vô trùng hút 1ml dung dịch mẫu có nồng độ 10-1 vào ống nghiệm chứa 9ml dung dịch SPW Tiến hành rung lắc ống nghiệm máy rung ống nghiệm votex, thu nồng độ 10-2  Làm tương tự với nồng độ Máy Vortex mier Bước 2: Pha loãng mẫu  Lưu ý pha loãng mẫu  Nồng độ pha loãng phụ thuộc vào tình trạng vệ sinh thực phẩm,thời gian bảo quản, điều kiện bảo quản,kinh nghiệm người kiểm nghiệm…  Tiến hành thao tác bên lửa đèn cồn.Các ống nghiệm,pipet phải vô trùng.Sử dụng micropipet 1ml/ nồng độ pha loãng mẫu để tránh tượng sai số  Mỗi lần lấy mẫu phải lắc Bước 3: Cấy ủ mẫu Kỹ thuật cấy ủ mẫu • Chọn độ pha lỗng thích hợp (15-300 tế bào/1ml mẫu) • Đối với mẫu lạ khơng đước ước đốn lượng vi sinh vật nhiều hay phải cấy nhiều nồng độ pha lỗng từ thấp đến cao • Dùng pipetman với đầu tiếp vô trùng hút 1ml mẫu vào đĩa petri vô trùng (mỗi độ pha lỗng đĩa) • Chuẩn bị môi trường tiệt trùng,để nguội 450C,đổ môi trường vào đĩa chứa 1ml mẫu • dịch Xoay nhẹ đĩa theo vòng tròn nhằm trộn dịch mẫu với môi trường để thu khuẩn lạc tách rời • Khi môi trường đông lại,lật ngược đĩa,ủ trong tủ ổn nhiệt ở nhiệt độ 30±1⁰C 72±3 • Khơng xếp thành chồng cao q đĩa • Các chồng đĩa cần tách khỏi cách xa thành tủ Bước 4: Đếm khuẩn lạc Sau giai đoạn ủ quy định, đếm khuẩn lạc đĩa Có thể sử dụng dụng cụ đếm khuẩn lạc Kiểm tra đĩa ánh sáng dịu Kiểm tra cẩn thận khuẩn lạc nghi ngờ Khuẩn lạc mọc lan rộng xem khuẩn lạc đơn lẻ Nếu ¼ đĩa mọc dày lan rộng, đếm khuẩn lạc đĩa phần cịn lại, tính số tương ứng cho đĩa Nếu ¼ đĩa mọc dày lan rộng, loại bỏ đĩa TÍNH KẾT QUẢ  Số khuẩn lạc từ 15-300 Tính số lượng N vi sinh vật có mặt mẫu thử theo trung bình từ hai độ pha lỗng liên tiếp Sử dụng cơng thức: (CFU/g hay CFU/ml) Trong đó: : tổng số khuẩn lạc đếm tất đĩa giữ lại từ hai độ pha loãng liên tiếp V: thể tích dịch cấy đĩa (ml) :số đĩa giữ lại độ pha loãng thứ :số đĩa giữ lại độ pha loãng thứ hai d: độ pha loãng thứ cấy giữ lại    Số khuẩn lạc 15 Sử dụng cơng thức: (CFU/g hay CFU/ml) Trong N: số khuẩn lạc 1ml (1g) mẫu : tổng số khuẩn lạc đếm tất đĩa giữ lại từ hai độ pha loãng liên tiếp V: thể tích dịch cấy đĩa (ml) n :số đĩa giữ lại d: độ pha loãng thứ cấy giữ lại  Biểu thị kết Làm tròn kết thu đến chữ số có nghĩa Kết có dạng 1,0≤a≤9,9 b lũy thừa tương ứng 10 Một số ví dụ •TH   khuẩn lạc từ 15- Độ pha loãng Số khuẩn lạc 300 168 173 19 15 (CFU/g hay CFU/ml) Làm tròn 1,7 CFU/g hay CFU/ml TH khuẩn lạc 15 Độ pha lỗng Số khuẩn lạc 20 15 (CFU/g hay CFU/ml) ... KẾT QUẢ TỔNG QUAN VỀ VSV HIẾU KHÍ Định nghĩa • Vi sinh vật hiếu khí vi khuẩn tăng trưởng hình thành khuẩn lạc điều kiện có diện ơxi phân tử • Tổng số vi sinh vật hiếu khí tổng số vi sinh vật thuộc... điều kiện hiếu khí nhiệt độ 300C 72 ± 6giờ Ứng dụng Vi sinh vật Nguy hư hỏng Chỉ tiêu tổng VSV hiếu khí dùng để đánh giá chất lượng mẫu Thời hạn bảo quản Mức độ vệ sinh Bảo quản sản phẩm ĐỊNH NGHĨA... nhóm vi sinh vật hiếu khí tồn mơi trường 2 Nguyên tắc  Cấy lên môi trường cấy qui định, sử dụng hai đĩa, dùng lượng mẫu thử quy định sản phẩm dạng lỏng với lượng huyền phù ban đầu quy định