Quy Trình Định Lượng E.Coli

E. coli là dạng trực khuẩn Gram () kỵ khí tùy nghi, không sinh bào tử, khá phổ biến trong tự nhiên và đặc biệt trong đường tiêu hóa của người và động vật. Chúng thuộc loại: glucose và lactose (+); indol và MR (+); VP và Citrate ().

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHỆP THỰC PHẨM KHOA CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM Mơn : Phân tích vi sinh thực phẩm Đề tài: Quy Trình Định Lượng E.Coli GVHD: Phan Thị Kim Liên Nhóm: Danh Sách Nhóm Đào Thị Mỹ Dung 2005130353 Nơng Phương Hịa 2005130400 Lê Thị Thùy Linh 2005130032 Nguyễn Thị Thảo Nguyên 2005130352 Phan Thị Yến Nhi 2005130109 Nội dung • Tình hình ngộ độc thực phẩm • Đặc điểm E coli • Định lượng E coli băng phương pháp đếm khuẩn lạc • Định lượng E coli băng phương pháp MPN 1.Tình Hình Ngộ Độc • • • Một loại ngộc độc thực phẩm gây vi sinh vật thường gặp ngộ độc thực phẩm vi khuẩn E.coli.  1/6/2014: Hàng trăm cơng nhân Cơng ty Nienhsing Thái Bình nhập viện ăn phải suất cơm nhiễm vi khuẩn E.coli Coliforms.  8/1/ 2015: 206 công nhân công ty may Namsung Vina bị ngộ độc nguồn nước chế biến thức ăn chứa E coli 1.Tình Hình Ngộ Độc • Vụ ngộ độc thực phẩm khiến 107 công nhân Công ty TNHH star Fashion (Chương Mỹ, Hà Nội) phải nhập viện ăn phải thực phẩm bị nhiễm vi khuẩn độc tố E.coli 2.Đặc điểm E coli • • E coli dạng trực khuẩn Gram (-) kỵ khí tùy nghi, khơng sinh bào tử, phổ biến tự nhiên đặc biệt đường tiêu hóa người động vật Chúng thuộc loại: glucose lactose (+); indol MR (+); VP Citrate (-) 2.Đặc điểm E coli Định lượng E coli băng phương pháp đếm khuẩn lạc Định Nghĩa Và Nguyên Tắc • Phương pháp tham chiếu theo ISO 16649-2:2001 áp dụng cho tất loại thực phẩm Nguyên tắc: Cấy lượng mẫu xác định mơi trường rắn chọn lọc thích hợp ( thạch TBX) Định Nghĩa Và Nguyên Tắc Nguyên tắc: Đếm khuẩn lạc E coli điển hình môi trường TBX Kết biểu thị số E coli 1g mẫu chưa pha loãng Dụng cụ Dụng cụ thí nghiệm • • • • • • • Bình tam giác Ống nghiệm Pipet Đầu Que cấy Đèn cồn Găng tay, trang www.hsph.edu.vn Quy trình định lượng e.coli phương pháp MPN -1 -2 -3 … Chuẩn bị dịch đồng pha loãng mẫu để có độ pha lỗng 10 ,10 ,10 -1 -2 -3 Chuyển 1ml dịch 10 ,10 ,10 vào ống 10ml canh LSB, nông độ ống lăp lại, ủ o 37 C, 48 Ghi nhận ống LSB (+) nồng độ pha loãng o Cấy vào ống canh EC, ủ 44,5 +-0,2 C, 24 Số ống (+) độ pha loãng Cấy lên thạch EMB, ủ 37oC , 24 Chọn khuẩn lạc điển hình, cấy vào Trypton, MR-VP, SC Citrate, ủ 44,5+-0,2 oC, 24 Thử nghiệm IMViC Đếm số ống canh EC (+) IMViC ++ , tra bảng MPN E.Coli Tiến hành •Bước 1: Đồng mẫu • Cân 10 g/10ml mẫu • Đồng mẫu 90 ml dd NMSL bình tam giác → nồng độ 10-1 www.hsph.edu.vn Bước 2: Pha lỗng mẫu • • Hút 1ml mẫu đồng Pha loãng mẫu 9ml dd NMSL ống nghiệm → nồng độ 10-2 • Pha lỗng tiếp tục để nồng độ 10-3 10-4… www.hsph.edu.vn Bước 3: Nuôi cấy mơi trường tăng sinh chọn lọc • Tại nồng độ chọn, cấy mẫu lên ống mơi trường LSB • Ủ 37oC/24-48h • Quan sát tượng đục/sinh khí www.hsph.edu.vn Bước 4: Ni cấy mơi trường chọn lọc • • Chọn ống mơi trường LSB có kết dương tính (đục/sinh khí) Cấy chuyển huyền dịch vi khuẩn từ môi trường LSB sang mơi trường canh thang EC • www.hsph.edu.vn Ủ 44oC/24-48h Bước • • Cấy lên thạch EMB, ủ 37oC , 24 Chọn khuẩn lạc điển hình, cấy vào Trypton, MR-VP, SC Citrate, ủ 44,5+-0,2 oC, 24 E coli Bước 5: Thử nghiệm IMViC Thử khả sinh Indol www.hsph.edu.vn • Methyl Red (MR) • VP (Voges Proskauer) CITRATE TEST Số lượng ống dương tính Số MPN/100ml Số ml mẫu sử dụng 10 0,1 120 3 160 93 150 2 210 3 290 … … Tài liệu tham khảo Giáo trình phân tích vi sinh thực phẩm http://www.dongnamlab.com/publics/product/905/files/TBX_agar_TDS_B K146_BM069_BM171_v08.pdf TIÊU CHUẨN QUỐC GIA TCVN 7924-1 : 2008 ISO 16649-1 : 2001 ... coli Định lượng E coli băng phương pháp đếm khuẩn lạc Định Nghĩa Và Nguyên Tắc • Phương pháp tham chiếu theo ISO 16649-2:2001 áp dụng cho tất loại thực phẩm Nguyên tắc: Cấy lượng mẫu xác định. .. Bình tam giác Ống nghiệm Pipet Đầu côn Que cấy Đèn cồn Găng tay, trang www.hsph.edu.vn Quy trình định lượng e.coli phương pháp MPN -1 -2 -3 … Chuẩn bị dịch đồng pha lỗng mẫu để có độ pha lỗng 10... lạc để khẳng định Khuẩn lạc E.coli đặc trưng môi trường TBX có màu xanh Tính giá trị trung bình từ độ pha loãng khác để qui số E.coli 1g mẫu Đếm Và Chọn Lọc Các Khuẩn Lạc Để Khẳng Định •β-glucuronidase-positive