Shigellosis là một bệnh truyền nhiễm do một nhóm vi khuẩn gây ra được gọi là Shigella. Hầu hết những người bị nhiễm vi khuẩn Shigella bị tiêu chảy, sốt và đau bụng bắt đầu từ một hoặc hai ngày sau khi được tiếp xúc với vi khuẩn. Shigellosis thường tự khỏi trong 57 ngày.Tuy nhiên, nhiễm shigella với liều lượng lớn có thể dẫn đến tử vong. Shigella là một trong những nguyên nhân hàng đầu của vi khuẩn tiêu chảy trên toàn thế giới. Hình thái khuẩn lạc: Trên MT lỏng, vi khuẩn mọc nhanh và làm đục đều MT. Trên MT đặc, khuẩn lạc tròn, lồi, bờ đều, trong, đg kính 2mm sua 24h.
BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM KHOA CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM Học Phần: Phân Tích Vi Sinh Thực Phẩm Đề tài: QUY TRÌNH ĐỊNH TÍNH SHIGELLA GVHD: Phan Thị Kim Liên SVTH: Nhóm 10 Danh sách nhóm: Nguyễn Thị Hồng Nhung 2005130193 Phan Thị Hường 2005130200 Võ Thị Trà 2005130187 Huỳnh Thị Mai 2005130226 Nguyễn Thị Ngọc Mai 2005130158 Nguyễn Thị Trang 2005130225 ?????? ? TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM Shigellosis bệnh truyền nhiễm nhóm vi khuẩn gây gọi là Shigella. Hầu hết người bị nhiễm vi khuẩn Shigella bị tiêu chảy, sốt đau bụng hai ngày sau tiếp xúc với vi khuẩn. Shigellosis thường tự khỏi 5-7 ngày.Tuy nhiên, nhiễm shigella với liều lượng lớn dẫn đến tử vong Shigella là nguyên nhân hàng đầu vi khuẩn tiêu chảy toàn giới. Đến năm 2006 , WHO báo cáo rằng Shigella gây khoảng 165 triệu trường hợp bệnh lỵ nặng, với triệu dẫn đến tử vong năm, chủ yếu trẻ em nước phát triển ĐẶC ĐIỂM • Là trực khuẩn gram âm khơng di động,kị khí tùy nghi,khơng tạo bào tử • Chỉ tạo acid t ng ã topt=10ữ400C, pHopt=6ữ8 ã Cú mt cỏc loại cá, rau quả,thịt, loại salad, từ nước,từ phân người Không sinh H2S, chậm (-), catalase(+), men lactose (-), phản ứng citrat Shigella sonnei lên (+), phản ứng VP lactose, có phản ứng đỏ metyl khơng lên men Indol thay đổi, Hầu hết Shigella Urease(-),phản ứng Lên men glucose không sinh hơi, lên men manitol (trừ Shigella dysenteriae không lên men manitol) oxidase(-) Tăng sinh kỵ khí mơi trường lỏng chọn lọc lượng mẫu xác NGUYÊN TẮC định Cấy phân lập huyền phù tăng sinh sang môi trường rắn chọn lọc Những khuẩn lạc nghi ngờ thử nghiệm sinh hóa kháng huyết Dụng cụ Thiết bị Ống nghiệm Tủ cấy vô trùng Đĩa petri ( ∅ 100 mm ) Nồi hấp Cốc thủy tinh ( 100 ml, 250 ml ) Tủ ấm Đầu tip Pipetman (1000, 5000 µl ) Pipetman (1000, 5000 µl ) Que trang, que cấy vịng Máy dập mẫu ( Stomacher ) Kẹp inox Máy trộn mẫu ( vortex mixer ) Đèn cồn Cân phân tích Pipette ml, 10 ml Lị viba Mơi trường hóa chất Mục đích Tryptone Soya Broth (TSB) Tăng sinh Shigella Broth Tăng sinh chọn lọc MacConkey XLD Phân lập Hektoen Enteric Agar Nutrient Agar Phục hồi TSI Urea Thử nghiệm sinh hóa để khẳng định shigella LDC HClc NaOH 10% Chỉnh pH Urea lỏng (RSU) • Urea • Cao nấm men • Na2HPO4 • K2HPO4 • Phenol Red • Nước cất 20g 0,1g 9,5g 9,1g 0,01g lít Trypticase Soy Agar TSA • Tryptone • Peptone đậu nành • Agar • Nước cất 15g 5g 15g lít KIA • Peptone • Lactose • Dextrose • NaCl • Amonium ferric citrat • Na2S2O5 • Phenol red • Agar • Nước cất 20g 20g 1g 5g 0,5g 0,5g 0,0125g 15g lít QUY TRÌNH PHÂN TÍCH Cân 25g 25ml +225ml canh thang shigella chứa novobioxin 0,5g/ml Trộn điều chỉnh pH đến 7,0 cần/ủ kỵ khí 41,5 C/16-20 Macconkey Agar XLD agar Hektoen Enteric Agar ủ 37 C, 20-24 Chọn khuẩn lạc điển hình cấy lên thạch dinh dưỡng/ ủ 37 C 20-24 Khẳng định sinh hóa Bước 1: Tăng sinh Cân 25g mẫu nghiền hút 25ml mẫu cho vào bình chứa sẵn 225ml mơi trường TSB, lắc đều, ủ 370C 16-24 Bước 2: Tăng sinh chọn lọc Cấy lượng 25g mẫu rắn đong thể tích 25ml mẫu lỏng với sai số cho phép 5% phần mẫu thử đai diện cho vào bao PE, bổ sung 225ml môi trường tăng sinh chọn lọc Shigella đồng mẫu máy dập mẫu 60 giây ủ 370C 18 Bước 3: Phân lập • Dùng que cấy vịng cấy ria canh trường từ mơi trường tăng sinh chọn lọc lên đĩa petri chứa môi trường phân lập • Cần cấy thưa để tạo khuẩn lạc riêng biệt • Để 370C 24-48 Trên mơi trường XLD, shigella tạo khuẩn lạc hồng,đỏ Trên môi trường MAC, shigella có màu đỏ nhạt (mơi trường có màu đỏ cam, đục) Bước 4: Phục hồi Đánh dấu khuẩn lạc nghi ngờ từ đĩa mơi trường phân lập MAC, XLD sau cấy ria lên môi trường TSA, ủ 370C 24 Bước 5: Khẳng định sinh hóa Thử nghiệm sàng lọc KIA: • Mơi trường KIA sử dụng để thử nghiệm khả sử dụng nguồn carbon khác (glucose, lactose) khả sinh H2S • Cấy đâm sâu phần cột thạch cấy ria lên phần thạch nghiêng vi khuẩn từ khuẩn lạc điển hình/nghi ngờ lên ống thạch nghiêng chứa môi trường KIA, ủ 37 C 24 Mơ tả thử nghiệm KIA: Cột thạch: • Màu vàng: glucose dương tính (lên men glucose) • Màu đỏ khơng đổi màu glucose âm tính (khơng lên men glucose) • Màu đen: có tạo thành sunfua hydro • Có bọt khí vết nứt: sinh khí từ glucose Bề mặt thạch nghiêng: • Màu vàng: lactose/saccharose dương tính (có sử dụng lactose/saccharose) • Màu đỏ khơng đổi màu: lactose/saccharose âm tính Thử nghiệm LDC: Lấy que cấy đầy khuẩn lạc môi trường TSA cấy bề mặt môi trường lỏng LDC, ủ 370C 24 Trên mơi trường LDC: • Mơi trường sang tím hay đỏ tía: LDC (+) • Mơi trường có màu vàng: LDC (-) Thử nghiệm urea: • Thực hiên môi trường urea lỏng RSU chứa thị đỏ phenol, chuyển màu từ vàng sang đỏ • Lấy đầy que cấy vịng từ khuẩn lạc mơi trường TSA vào ống chứa 30 5ml môi trường RSU vô trùng, lắc nhẹ ống để trộn vi khuẩn ủ 37 C 48 • Shigella không phân giải urea nên không làm thay đổi pH mơi trường, phản ứng dương tính, việc phân giải ure giải phóng NH3 làm đổi màu phenol red sang màu hoa hồng sau chuyển sang màu đỏ tím Kết quả: Qua quy trình kiểm nghiệm cho phép kết luận có hay khơng có shigella phát 25g mẫu ... khuẩn gây gọi là? ?Shigella. Hầu hết người bị nhiễm vi khuẩn Shigella? ?bị tiêu chảy, sốt đau bụng hai ngày sau tiếp xúc với vi khuẩn. Shigellosis thường tự khỏi 5-7 ngày.Tuy nhiên, nhiễm shigella với... citrat Shigella sonnei lên (+), phản ứng VP lactose, có phản ứng đỏ metyl khơng lên men Indol thay đổi, Hầu hết Shigella Urease(-),phản ứng Lên men glucose không sinh hơi, lên men manitol (trừ Shigella. .. Soya Broth (TSB) Tăng sinh Shigella Broth Tăng sinh chọn lọc MacConkey XLD Phân lập Hektoen Enteric Agar Nutrient Agar Phục hồi TSI Urea Thử nghiệm sinh hóa để khẳng định shigella LDC HClc NaOH 10%