Định lượng Bacillus cereus

Thực phẩm nhiễm Bacillus cereus là rất phổ biến. Người ăn phải thực phẩm này thường mắc hai triệu chứng điển hình là tiêu chảy và nôn mửa.Từ những năm 1972 đến 1986 có tới 52 trường hợp trúng độc thực phẩm do Bacillus cereus được phát hiện, chiếm khoảng 2% số ca ngộ độc thực phẩm.

BỘ CÔNG THƯƠNG TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THỰC PHẨM TPHCM KHOA:CƠNG NGHỆ THỰC PHẨM PHÂN TÍCH VI SINH THỰC PHẨM Đề tài: Định lượng Bacillus cereus GVHD: cô Phan Thị Kim Liên Nhóm Danh sách nhóm 1.Nguyễn Thị Thanh Thảo 2005130222 2.Cầm Thị Hoàn 2005130221 Lý Yên Sơn 2005130162 Lê Hồng Quang 2005130173 1.Tình hình ngộ độc 2.Đặc điểm B.cereus 3.Định lượng B.cereus phương pháp đếm khuẩn lạc Định lượng B.cereus phương pháp MPN 1.TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM o Thực phẩm nhiễm Bacillus cereus phổ biến Người ăn phải thực phẩm thường mắc hai triệu chứng điển hình tiêu chảy nơn mửa o Từ năm 1972 đến 1986 có tới 52 trường hợp trúng độc thực phẩm Bacillus cereus phát hiện, chiếm khoảng 2% số ca ngộ độc thực phẩm 1.TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM o Từ năm 2001-2006, nước ghi nhận 5.600.000 ca tiêu chảy nhiễm trùng qua thực phẩm, có 84 ca tử vong o Riêng tháng đầu năm ngoái ghi nhận 750.000 ca tiêu chảy có 12 ca tử vong o Thực tế, theo chuyên gia,phải gấp 10 lần số cơng bố 1.TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM • Mới đây,15/10/2015 vụ ngộ độc thực phẩm xảy trường mầm non Thốt Nốt ( quận Thốt Nốt, TP Cần Thơ ) làm cho 30 trẻ mầm non bị ngộ độc Nguyên nhân xác định trẻ ăn phải thức ăn có nhiễm Bacillus cereus • Vi khuẩn nhiễm vào thức ăn trình bảo quản, tiếp xúc chế biến không kỹ ĐẶC ĐIỂM, TÍNH CHẤT BACILLUS CEREUS • • • • Trực khuẩn, Gram (+) Hiếu khí, kỵ khí tùy ý Lên men glucose sinh hơi, phản ứng VP (+) Có khả sử dụng nitrate ĐẶC ĐIỂM, TÍNH CHẤT BACILLUS CEREUS • Nhiệt độ tối thích: 35-400C • pH tối thích: 4.5-9.3 • Dễ tạo bào tử bào tử nảy mầm dễ dàng • Có khả di động Mơ hình cấu tạo B.cereus ĐẶC ĐIỂM, TÍNH CHẤT BACILLUS CEREUS • Trên mơi trường chọn lọc,vi khuẩn tạo khuẩn lạc to, mọc lan, rìa nhăn ĐẶC ĐIỂM, TÍNH CHẤT BACILLUS CEREUS Phân bố nhiều tự nhiên Nhiễm vào loại thức ăn qua đêm Vi khuẩn xâm nhập vào sữa, thịt, rau quả, hỗn hợp gia vị, sản phẩm khô Có khả tiết hai loại độc tố: diarrhoeal toxin gây tiêu chảy emetic toxin gây nôn mửa Khả thủy phân tyrosine Vi khuẩn Cấy Thạch nghiêng Tyrosine ủ 350C 48h Đọc kết Thử nghiệm với canh Lysozyme Broth Vi khuẩn Cấy 2,5 ml Nutrient Broth chứa 0,001% lysozyme 2,5 ml Nutrient Broth không chứa lysozyme ủ 350C 24h Đọc kết Thử nghiệm tính di động Mơi trường Thành phần Trypticase Cao nấm men Dextrose Na2HPO4 Agar Nước cất pH cuối 7,4± 0,2 Hàm lượng 10g 2,5g 5g 2,5g 3g lít   Thử nghiệm tính di động Sự hình thành rễ giả Huyền phù Cấy Đĩa Nutrient Agar Ủ 300C 48-72h Kiểm tra phát triển rễ giả Sự hình thành rễ giả Bacillus cereus (khơng có cấu trúc rễ giả) Bacillus Mycoides ( có cấu trúc rễ giả ) Thử nghiệm làm tan máu Môi trường Tryticase Soy Agar Thành phần Trypticase peptone Phytone peptone NaCl Agar Nước cất Hàm lượng 15g 5g 5g 15g lít Thử nghiệm làm tan máu Chủng VSV môi trường thạch máu Trypticase Soy Khẳng định loài Thử nghiệm làm tan máu Sự tạo độc tố protein dạng tinh thể Huyền phù Cấy Ống thạch nghiêng Nutrient Agar ủ 24h 300C, nhuộm Phẩm màu fuchsin Quan sát tượng Đặc tính Loài B.cereus Gram B.thuringiensis B.mycoides B.anthracis B.megaterium + (a) + + + + Catalase + + + + + Di động +/- (b) +/- - (c) - +/- Khử nitrate + +- + + - (d) Phân huỷ tyrosine + + +/- - (d) +/- Kháng lysozyme + + + + - Phản ứng với lòng đỏ trứng + + + + - Lên men glucose + + + + - Phản ứng VP + + + + - Sinh acid từ mannitol - - - - + Tan máu(máu cừu) + + + - (d) - Tính kết Số lượng ống dương tính Số ml mẫu sử dụng 10 0,1 0 0 0 0 0 0 0 0 1 1 2 2 3 3 0 0 3 3 Số MPN/ 100ml Số lượng ống dương tính Số ml mẫu sử dụng Số MPN/ 100ml 10 0,1 9 12 12 16 2 2 2 2 2 2 0 0 1 1 2 2 3 3 14 20 26 15 20 27 34 21 28 35 42 29 16 19 2 3 3 36 44 53 Môi trường MOSSEL Thành phần Hàm lượng (g/l) Pepton Mannitol Sodium chloride Magnesium sulphate Disodium hydrogen phosphate Potassium dihydrogen phosphate 1.0 10.0 2.0 0.1 2.5 0.25 Bromothymol blue Sodium pyruvate Agar 0.12 10.0 15.0 ... ngộ độc 2.Đặc điểm B .cereus 3 .Định lượng B .cereus phương pháp đếm khuẩn lạc Định lượng B .cereus phương pháp MPN 1.TÌNH HÌNH NGỘ ĐỘC THỰC PHẨM o Thực phẩm nhiễm Bacillus cereus phổ biến Người... toxin gây tiêu chảy emetic toxin gây nôn mửa 3.ĐỊNH LƯỢNG B .CEREUS BẰNG PHƯƠNG PHÁP ĐẾM KHUẨN LẠC PHẠM VI ÁP DỤNG • Dùng để định lượng B .cereus giả định có khả mọc đĩa thạch kỹ thuật đếm khuẩn... dụng để:  Định lượng B cereus mẫu thực phẩm khơng có B cereus nhiều 10 tế bào/g  Kiểm tra mẫu thực phẩm có tinh bột khơ mà phương pháp đếm khuẩn lạc khơng thích hợp 4.ĐỊNH LƯỢNG B .CEREUS BẰNG