Phân lập virus gây bệnh viêm gan vịt và nghiên cứu biến đổi bệnh lý của bệnh ở vịt gây bệnh thực nghiệm

luận văn thạc sĩ, tiến sĩ, cao học, luận văn

Luận văn Cao học Nguyễn Khánh Ly Bộ giáo dục và đào tạo Trờng đại học nông nghiệp I -----------0o0----------- nguyễn khánh ly Phân lập virus gây bệnh Viêm gan vịt và nghiên cứu biến đổi bệnh lý của bệnh ở vịt gây bệnh thực nghiệm Luận văn thạc sỹ khoa học nông nghiệp Hà Nội - 2004 0 Luận văn Cao học Nguyễn Khánh Ly Lời cam đoan Tôi xin cam đoan rằng, kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực, cha đợc sử dụng để bảo vệ một học vị nào. Các thông tin trích dẫn trong luận văn đều đợc ghi rõ nguồn gốc. Hà Nội, tháng 12 năm 2004 Tác giả luận văn Nguyễn Khánh ly 1 Luận văn Cao học Nguyễn Khánh Ly Lời cảm ơn Trớc hết, tôi xin chân thành cảm ơn Bộ giáo dục và Đào tạo, trờng Đại học Nông nghiệp I đã cho phép tôi đợc tham gia lớp Cao học khóa 11 của trờng và có cơ hội để hoàn thành luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn Khoa Sau đại và khoa Chăn nuôi Thú y - Trờng Đại học Nông nghiệp I đã nhiệt tình giúp đỡ tôi trong quá trình học tập và thực hiện luận văn. Tôi xin chân thành cảm ơn Tiến sĩ Nguyễn Hữu Nam, Phó trởng Bộ môn Vi sinh vật - Truyền nhiễm - Bệnh lý - Trờng Đại học Nông nghiệp I và Tiến sĩ Nguyễn Văn Cảm, Phó Giám đốc, Trởng bộ môn Giải phẫu bệnh, Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ơng đã hớng dẫn và tạo mọi điều kiện thuận lợi để tôi thực hiện và hoàn thành luận văn này. Tôi xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo đã nhiệt tình dạy bảo và giúp đỡ tôi trong quá trình học tập. Ngoài ra, trong quá trình học tập và thực hiện luận văn, tôi nhận đợc sự động viên và giúp đỡ tận tình của Ban lãnh đạo Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ơng, của bạn bè đồng nghiệp nhất là các đồng nghiệp ở Trung tâm Chẩn đoán Thú y Trung ơng, các cán bộ ở Viện 69 và những ngời thân. Tôi xin đợc bày tỏ lòng biết ơn chân thành đối với sự giúp đỡ quý báu đó. Hà Nội, tháng 12 năm 2004 Tác giả luận văn Nguyễn Khánh Ly 2 Luận văn Cao học Nguyễn Khánh Ly Mục lục Đặt vấn đề . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Chơng 1: Tổng quan tài liệu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.1. Bệnh Viêm gan vịt do virus . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.1.1. Giới thiệu về bệnh viêm gan vịt . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.1.2. Lịch sử nghiên cứu và phạm vi bệnh. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.1.3. Mầm bệnh. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.1.4. Cấu trúc và đặc tính sinh học. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.1.5. Sức đề kháng với các yếu tố vật lý, hoá học. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.1.6. Tính gây bệnh. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.2. Bệnh lý và dịch tễ học. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.2.1. Vật chủ tự nhiên và vật chủ thí nghiệm. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.2.2. Sự lây truyền. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.2.3. Vật mang bệnh và vật chủ trung gian. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3. Miễn dịch học. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3.1. Miễn dịch chủ động. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.3.2. Miễn dịch thụ động. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.4. Triệu chứng . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.5. Tỷ lệ nhiễm và chết . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.6. Bệnh tích . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.6.1. Bệnh tích đại thể . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.6.2. Bệnh tích vi thể . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.6.3. Bệnh tích siêu vi thể . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.7. Chẩn đoán bệnh . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.7.1. Chẩn đoán phân biệt . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1 3 3 3 3 7 8 8 9 11 11 11 12 12 12 12 13 13 13 13 13 14 14 14 15 16 3 Luận văn Cao học Nguyễn Khánh Ly 1.7.2. Phơng pháp siêu vi trùng học . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.7.3. Phơng pháp huyết thanh học . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.8. Phòng chống bệnh . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.8.1. Qui trình quản lý . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.8.2. Phòng bệnh . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.8.3. Điều trị . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.9. Cấu tạo một số tổ chức cơ quan . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.9.1. Cấu tạo và chức năng của gan . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.9.2. Cấu tạo và chức năng của lách . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 1.9.3. Cấu tạo và chức năng của thận . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Chơng 2: Nguyên liệu và phơng pháp nghiên cứu . . . . . . . . . . 2.1. Đối tợng nghiên cứu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.2. Nội dung . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.3. Địa điểm nghiên cứu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.4. Thời gian nghiên cứu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.5. Nguyên liệu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.6. Phơng pháp nghiên cứu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.6.1. Phơng pháp mổ khám . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.6.2. Phơng pháp lấy mẫu và bảo quản mẫu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.6.3. Phơng pháp parafin (cắt nến), cắt lạnh để chẩn đoán vi thể . . . . . . . . 2.6.4. Phơng pháp kiểm tra tiêu bản trên kính hiển vi quang học . . . . . . . . . 2.6.5. Phơng pháp làm tiêu bản chẩn đoán siêu vi thể . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.6.6. Phơng pháp gây bệnh thực nghiệm . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 2.7. Phơng pháp xử lý số liệu . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . Chơng 3: Kết quả và thảo luận . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.1. Kết quả điều tra tỷ lệ ốm và tỷ lệ chết do bệnh Viêm gan vịt do virus . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 17 17 17 18 19 19 21 22 25 25 25 25 26 26 26 26 26 27 31 31 32 33 35 35 36 36 4 Luận văn Cao học Nguyễn Khánh Ly 3.2. Kết quả theo dõi triệu chứng lâm sàng của vịt mắc bệnh tự nhiên 3.3. Kết quả nghiên cứu bệnh tích đại thể của vịt mắc bệnh Viêm gan vịt do virus tự nhiên . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.3.1. Kết quả nghiên cứu bệnh tích đại thể của gan vịt mắc bệnh Viêm gan vịt do virus tự nhiên . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.3.2. Kết quả nghiên cứu bệnh tích đại thể của lách, thận vịt mắc bệnh Viêm gan vịt do virus tự nhiên . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.4. Kết quả nghiên cứu bệnh tích vi thể của gan vịt mắc bệnh Viêm gan vịt do virus tự nhiên . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 3.5. Kết quả phân lập virus Viêm gan vịt từ ổ dịch tự nhiên . . . . . . . . . 3.5.1. Kết quả phân lập virus Viêm gan vịt trên vịt mẫn cảm 7 ngày tuổi . . . 3.5.2. Kết quả phân lập virus Viêm gan vịt trên phôi vịt 14 ngày tuổi . . . . . . 3.6. Kết quả gây bệnh Viêm gan vịt do virus cho vịt thực nghiệm . . . . Chơng 4 - Kết luận . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.1. Kết luận . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 4.2. Đề nghị. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . tài liệu tham khảo. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . I/ Tiếng Việt . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . II/ Tiếng nớc ngoài . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 43 46 46 48 51 55 55 59 63 74 74 75 76 76 80 5 Luận văn Cao học Nguyễn Khánh Ly Đặt vấn đề Trong những năm qua, Việt Nam đã thực hiện đợc nhiều chính sách khuyến khích phát triển nông nghiệp, nông dân địa phơng hăng hái tăng gia sản xuất, tích cực xóa đói giảm nghèo, làm giàu trên mảnh đất của mình. Nhờ vậy đã đa nông nghiệp lên một tầm cao mới, đóng góp một phần không nhỏ vào công cuộc đổi mới, xây dựng đất nớc. Một trong những lĩnh vực mũi nhọn đã đóng góp đáng kể vào thành tích chung của toàn ngành nông nghiệp đó là lĩnh vực chăn nuôi. Ngành chăn nuôi ngày càng chiếm một vị trí quan trọng trong nền kinh tế quốc dân, tổng đàn gia súc gia cầm ngày một tăng, nhiều giống mới cho năng suất cao đã đợc nhập nội nhằm phục vụ công tác cải tạo đàn giống nội địa cũng đã cho những kết quả tốt. Các kết quả nghiên cứu khoa học thú y đã đợc gắn liền với công cuộc cải tiến phơng thức chăn nuôi và ngày càng đợc thực tế sản xuất tiếp thu, áp dụng. Bên cạnh các ngành chăn nuôi lớn nh bò sữa, lợn công nghiệp, gà công nghiệp phải kể đến ngành chăn nuôi vịt. Chăn nuôi vịt ở nớc ta cũng đang đợc đẩy mạnh theo quy mô lớn, ngày càng nhiều con giống cao sản nh siêu trứng, siêu thịt đợc nhập nội và đa vào sản xuất. Với phơng thức chăn nuôi công nghiệp nh vậy chắc chắn sẽ không tránh khỏi bị một số dịch bệnh truyền nhiễm đe doạ nếu thiếu công tác thú y. Trong thực tế sản xuất, vịt hay mắc một số bệnh nh bệnh Viêm gan vịt do virus, Dịch tả vịt, Salmonella.v.v trong đó đáng kể nhất là bệnh Viêm gan vịt do virus. Đây là một bệnh truyền nhiễm cấp tính 6 Luận văn Cao học Nguyễn Khánh Ly thờng xảy ra ở vịt con dới 6 tuần tuổi. Bệnh thờng xảy ra ở tuần đầu tiên, có đặc điểm tỷ lệ ốm rất cao và chết rất nhanh. Nơi nhiễm nặng tỷ lệ chết có thể lên tới 90% gây thiệt hại kinh tế không nhỏ cho ngời chăn nuôi. Trớc nhu cầu cấp thiết của thực tế, nhằm xây dựng qui trình chẩn đoán nhanh, chính xác và phù hợp với điều kiện trang thiết bị phòng thí nghiệm, chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài: Phân lập virus gây bệnh Viêm gan vịt và nghiên cứu biến đổi bệnh lý của bệnh trên vịt gây bệnh thực nghiệm. 7 Luận văn Cao học Nguyễn Khánh Ly Chơng 1: Tổng quan 1.1. Bệnh Viêm gan vịt do virus 1.1.1. Giới thiệu chung về bệnh Viêm gan vịt do virus (Duck Hepatitis - DHV) Bệnh Viêm gan vịt do virus là bệnh truyền nhiễm cấp tính ở vịt con dới 6 tuần tuổi với đặc điểm là mức độ lây lan rất cao và khả năng gây chết nhanh; đặc biệt là vịt con dới 3 tuần tuổi rất mẫn cảm. Hiện nay ngời ta xác định bệnh gây ra do virus Viêm gan vịt (Duck Hepatitis virus - DHV) gồm 3 type khác nhau và đặt tên là type 1, 2 và 3; nhng phổ biến hơn và phân bố rộng khắp thế giới chủ yếu là DHV type 1 thuộc họ Enterovirus. Mục tiêu tấn công của virus chủ yếu là tế bào tổ chức gan gây xuất huyết, hoại tử và thoái hóa gan. Bệnh Viêm gan vịt do virus có tỷ lệ nhiễm bệnh cao và tỷ lệ chết có khi lên tới 95% nếu không can thiệp kịp thời. 1.1.2. Lịch sử nghiên cứu và phạm vi bệnh Bệnh Viêm gan vịt do virus (Duck Hepatitis - DH) đợc Levine và Hofstad phát hiện lần đầu tiên vào mùa xuân năm 1945 ở Mỹ, nhng cha phân lập đợc mầm bệnh. Đến mùa xuân năm 1949, Levine và Fabricant đã theo dõi các trờng hợp bệnh tơng tự nh năm 1945 trên đàn vịt trắng Bắc Kinh ở đảo Long (Hoa Kỳ) và thu thập đợc các thông tin nh sau: bệnh xảy ra ở 70 trại vịt lớn, đầu tiên bệnh xảy ra ở đàn vịt 2-3 tuần tuổi sau đó tấn công vào đàn vịt ít tuần tuổi hơn rồi đến vịt dới 1 tuần tuổi. Tỷ lệ chết ở những trại nhiễm bệnh nặng có khi lên tới 95%. Ước tính vịt chết trong trận dịch năm đó là khoảng 750.000 con chiếm 15% tổng đàn (Woolcock và Fabricant, 1997) [73]. Năm 1950, Levine và Fabricant đã phân lập đợc virus Viêm gan vịt typ 1 trên môi trờng xơ phôi gà, virus này khác hẳn với virus Dịch tả vịt (Levine và Fabricant, 1950) [53]. 8 Luận văn Cao học Nguyễn Khánh Ly Đến năm 1956, Hanson và Alberts đã phát hiện bệnh ở bang Massachuset, Illinois, Michigan và xảy ra khắp nớc Mỹ (Woolcock và Fabricant, 1997) [73]. Năm 1957, Fabricant J., C.G. Richard và P.P. Levine đã nghiên cứu biến đổi bệnh lý và họ đã tìm ra có sự biến đổi vi thể của gan vịt bệnh (Fabricant J., C.G. Richard và P.P. Levine, 1957) [38]. Năm 1958, Asplin đã chế đợc vắc-xin nhợc độc phòng đợc bệnh cho vịt con. Từ năm 1960, trên thế giới đã có vắc-xin phòng bệnh này đặc biệt là vắc- xin đợc chế từ giống nhợc độc Asplin (Asplin, 1958) [29]. Năm 1965, ở Norfolk - Anh đã xảy ra một ổ Viêm gan vịt do virus mặc dù đàn đã tiêm phòng vắc-xin nhợc độc typ 1. Ngời ta đã phân lập đợc virus Viêm gan vịt typ 2 khác hẳn với virus Viêm gan vịt typ 1. Virus typ2 chỉ xảy ra ở Anh và đến giữa năm 1980 bệnh không xảy ra nữa (Woolcock và Fabricant, 1997) [73]. Năm 1968, theo Tempel và Beer cho rằng bệnh Viêm gan vịt do virus typ1 đã xảy ra trên khắp thế giới trong đó có Trung Quốc và Hàn Quốc (Woolcock và Fabricant, 1997) [73]. Năm 1968, Toth đã quan sát thấy bệnh Viêm gan xảy ra ở đàn vịt con đã đợc miễn dịch đối với virus Viêm gan typ 1. Ông đã phân lập đợc loại virus có những đặc điểm khác với virus typ1 và typ 2, ông đặt tên là virus Viêm gan vịt typ 3. Bệnh do virus này chỉ xảy ra ở Mỹ (Woolcock và Fabricant, 1997) [73]. Năm 1969, Tausora và cộng sự đã xếp virus Viêm gan vịt typ 1 vào nhóm Picornavirus (Tausora, N. M., G. E. Coghill và M. J. Klutch, 1969) [70]. Năm 1970, Asplin F.D đã kiểm tra huyết thanh từ những loài cầm hoang dã để tìm kháng thể virus dịch tả vịt, viêm gan vịt, cúm vịt. Cũng vào năm này, Hwang J. đã nghiên cứu tạo miễn dịch cho vịt mẹ bằng chủng virus viêm gan vịt cấy truyền qua phôi gà (Asplin F.D, 1970) [31]. 9