NGHIÊN cứu một số yếu tố ẢNH HƯỞNG đến HIỆU QUẢ của kỹ THUẬT SIÊU âm hút tế bào TRỨNG bò để tạo PHÔI TRONG ỐNG NGHIỆM

luận văn thạc sĩ, tiến sĩ, cao học, luận văn

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ************************* PHAN LÊ SƠN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN HIỆU QUẢ CỦA KỸ THUẬT SIÊU ÂM HÚT TẾ BÀO TRỨNG BÒ ĐỂ TẠO PHÔI TRONG ỐNG NGHIỆM LUẬN ÁN TIẾN SỸ NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI- 2013 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ************************* PHAN LÊ SƠN NGHIÊN CỨU MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN HIỆU QUẢ CỦA KỸ THUẬT SIÊU ÂM HÚT TẾ BÀO TRỨNG BÒ ĐỂ TẠO PHÔI TRONG ỐNG NGHIỆM Chuyên ngành: Sinh sản và bệnh sinh sản gia súc Mã số: 62 64 01 06 LUẬN ÁN TIẾN SỸ NÔNG NGHIỆP NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: 1. GS.TSKH. CÙ XUÂN DẦN 2. PGS.TS. HOÀNG KIM GIAO HÀ NỘI- 2013 LỜI CAM ĐOAN - Tôi xin cam đoan rằng, số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và chưa hề được sử dụng để bảo vệ một học vị nào. - Tôi xin cam đoan rằng, mọi sự giúp đỡ cho việc thực hiện luận văn này đã được ghi nhận và các thông tin trích dẫn trong luận văn đều đã được chỉ rõ nguồn gốc. Nghiên cứu sinh Phan Lê Sơn Lêi c¶m ¬n Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến các thầy giáo, cô giáo Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội, không những đã giảng dạy và dìu dắt tôi trong suốt gần 5 năm học đại học mà còn tạo điều kiện để tôi học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận án này. Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới Ban lãnh đạo cùng toàn thể cán bộ công nhân viên Viện Chăn nuôi, cơ quan chủ quản, nơi tôi công tác, trưởng thành, tạo điều kiện thuận lợi nhất để tôi hoàn thành nhiệm vụ, được học tập và hoàn thành công trình nghiên cứu của mình. Tôi xin cảm ơn chân thành các đơn vị sau đây đã nhiệt tình giúp đỡ để tôi có thể hoàn thành luận án này. - Khoa Thú Y, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội - Bộ môn Hóa sinh, Sinh lý động vật, Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội - Bộ môn Sinh lý, Sinh hóa và Tập tính vật nuôi, Viện Chăn nuôi - Trạm kiểm nghiệm và Bảo tồn vật nuôi, Viện Chăn nuôi Để hoàn thành bản luận án này tôi cũng xin gửi tới thầy giáo người hướng dẫn khoa học GS.TSKH. Cù Xuân Dần và PGS.TS. Hoàng Kim Giao lòng biết ơn sâu sắc về sự tận tình giúp đỡ, động viên, dìu dắt tôi trong cuộc sống cũng như trong suốt quá trình hoàn thành luận án. Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới thầy giáo PGS.TS. Đặng Thái Hải luôn động viên, dạy bảo, giúp đỡ và tạo điều kiện tốt nhất để tôi hoàn thành được luận án này. Xin chân thành cảm ơn sự giúp đỡ của Ths. Lưu Công Khánh, TS. Nguyễn Văn Lý, Ths. Nguyễn Thị Thoa, TS. Phan Văn Kiểm, TS. Đào Đức Thà, TS. Nguyễn Thạc Hòa và các bạn đồng nghiệp. Xin cảm ơn gia đình và người thân đã động viên, tạo điều kiện cho tôi trong suốt quá trình công tác cũng như hoàn thành bản luận án này. Hà Nội, năm 2013 Nghiên cứu sinh Phan Lê Sơn MỤC LỤC Trang Lời cam đoan………………………………………………………… I Lời cảm ơn…………………………………………………………… II Mục lục……………………………………………………………… . III Danh mục các từ viết tắt………………………………………………. VI Danh mục các bảng……………………………………………………. VII Danh mục các hình……………………………………………………. IX MỞ ĐẦU……………………………………………………………… 1 1. Đặt vấn đề………………………………………………………… 1 2. Mục đích nghiên cứu………………………………………………. 2 3. Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài…………………………… 2 4. Những đóng góp mới của luận án về học thuật và lý luận…………. 3 CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU VÀ CƠ SỞ KHOA HỌC 5 1.1. Buồng trứng………………………………………………………. 5 1.2. Tế bào trứng………………………………………………………. 7 1.2.1. Sự hình thành tế bào mầm nguyên thủy……………………… 7 1.2.2. Sự phát triển của tế bào mầm nguyên thủy thành túi noãn…… 8 1.2.3. Sự phát triển của túi noãn thành tế bào trứng………………… 9 1.3. Nang trứng……………………………………………………… . 10 1.3.1. Sự hình thành nang trứng nguyên thủy………………………. 10 1.3.2. Sự phát triển của nang trứng………………………………… 11 1.3.3. Chức năng của nang trứng……………………………………. 14 1.3.4. Sự hình thành sóng nang……………………………………… 15 1.4. Hormone………………………………………………………… 16 1.4.1. Cơ chế điều khiển của hormone đến sự phát triển nang trứng 16 1.4.2. Vai trò của FSH ……………………………………………… 17 1.5. Thu tế bào trứng………………………………………………… 19 1.5.1. Thu tế bào trứng từ buồng trứng lò mổ………………………. 19 1.5.2. Thu tế bào trứng từ bò sống………………………………… 20 1.5.3. Một số yếu tố ảnh hưởng đến số lượng số lượng, chất lượng tế bào trứng và kết quả tạo phôi in vitro khi siêu âm hút tế bào trứng… 23 1.6. Nuôi tế bào trứng in vitro………………………………………… 32 1.6.1. Nuôi thành thục tế bào trứng in vitro………………………… 32 1.6.2. Một số yếu tố ảnh hưởng đến kết quả nuôi thành thục tế bào trứng…………………………………………………………………… 35 1.7. Tạo phôi in vitro………………………………………………… 43 1.7.1. Thụ tinh in vitro……………………………………………… 43 1.7.2. Một số yếu tố ảnh hưởng đến quá trình thụ tinh của tế bào trứng…………………………………………………………………… 46 1.8. Nuôi phôi in vitro…………………………………………………. 48 1.8.1. Môi trường nuôi phôi……………………………………… 48 1.8.2. Một số yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng của phôi……… 50 1.9. Ảnh hưởng của kỹ thuật siêu âm hút tế bào trứng đến kết quả nuôi thành thục, thụ tinh và tạo phôi in vitro…………………………. 53 CHƯƠNG 2. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU… 56 2.1.Vật liệu, nội dung và phương pháp nghiên cứu…………………… 56 2.1.1.Vật liệu……………………………………………………… 56 2.1.2. Nội dung nghiên cứu………………………………………… 56 2.1.3.Phương pháp nghiên cứu…………………………………… 56 2.2. Thời gian và địa điểm nghiên cứu……………………………… 64 CHƯƠNG 3. KÊT QUẢ VÀ THẢO LUẬN……………………… 66 3.1. Ảnh hưởng của áp lực hút ………………………………… . 66 3.2. Ảnh hưởng của tần suất siêu âm hút tế bào trứng ……………… 76 3.3. Ảnh hưởng của kích thước nang trứng ………………………… 84 3.4. Ảnh hưởng của pha nang trứng phát triển và pha nang trứng trội 91 3.5. Ảnh hưởng của liều lượng FSH ………………………………… 96 3.6. Ảnh hưởng của giống bò…………………………………………. 104 3.7. Ảnh hưởng của tuổi bò cho tế bào trứng…………………………. 109 3.8. Ảnh hưởng của mùa vụ…………………………………………… 113 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ …………………………………………. 120 CÁC CÔNG TRÌNH ĐÃ CÔNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN…………………………………………………………………… 122 TÀI LIỆU THAM KHẢO…………………………………………… 123 TIẾNG VIỆT………………………………………………………… 123 TIẾNG ANH…………………………………………………………. 124 PHỤ LỤC…………………………………………………………… 148 DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT BSA : Bovine Serum Albumin F3 : Holstein Friesian x Lai Sind FCS : Foetal Calf serum FSH : Follicle Stimulating Hormone GnRH : Gonadotropin Releasing Hormone HEPES : N-(2 Hydroxyethyl) piperazine-N’-(2-ethanesulforic acid) HF : Holstein Friesian LH : Luteinizing Hormone MEM : Minimum Essential Medium PGF 2α : Prostaglandin F 2α SOF : Synthetic oviduct fluid TCM-199 : Tisue culture medium 199 DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Đặc điểm phát triển của nang trứng bò ở giai đoạn đầu 14 1.2 Số lượng tế bào trứng và tỉ lệ phôi nang thu được ở các giống bò khác nhau 29 1.3 Số lượng tế bào trứng và phôi nang thu được của bò ở các độ tuổi khác nhau 31 1.4 Đánh giá chất lượng tế bào trứng ở 6 mức độ khác nhau 37 1.5 Mối quan hệ giữa đặc điểm tế bào chất và chất lượng tế bào trứng 40 3.1 Số lượng nang trứng được hút và ảnh hưởng của áp lực hút đến số lượng tế bào trứng thu được 66 3.2 Ảnh hưởng của áp lực hút đến chất lượng tế bào trứng 69 3.3 Ảnh hưởng của áp lực hút đến sự phân chia của hợp tử, phôi dâu và phôi nang 72 3.4 Ảnh hưởng của tần suất siêu âm hút tế bào trứng đến số lượng nang trứng được hút và số lượng tế bào trứng thu được 76 3.5 Ảnh hưởng của tần suất siêu âm hút tế bào trứng đến chất lượng tế bào trứng 79 3.6 Ảnh hưởng của tần suất siêu âm hút tế bào trứng đến sự phân chia của hợp tử, phôi dâu và phôi nang 80 3.7 Ảnh hưởng của kích thước nang trứng đến số lượng nang trứng được hút và số lượng tế bào trứng thu được 85 3.8 Ảnh hưởng của kích thước nang trứng đến chất lượng tế bào trứng 86 3.9 Ảnh hưởng của kích thước nang trứng đến sự phân chia của 88 hợp tử, phôi dâu và phôi nang 3.10 Ảnh hưởng của pha nang trứng phát triển và pha nang trứng trội đến số lượng nang trứng được hút và số lượng tế bào trứng thu được 91 3.11 Ảnh hưởng pha nang trứng phát triển và pha nang trứng trội đến chất lượng tế bào trứng 93 3.12 Ảnh hưởng của các liều lượng FSH đến số lượng nang trứng được hút và số lượng tế bào trứng thu được 96 3.13 Ảnh hưởng của liều lượng FSH đến chất lượng tế bào trứng 98 3.14 Ảnh hưởng của liều lượng FSH đến sự phân chia của hợp tử, phôi dâu và phôi nang 100 3.15 Ảnh hưởng của giống bò cho tế bào trứng đến số lượng nang trứng được hút và số lượng tế bào trứng thu được 105 3.16 Ảnh hưởng của giống bò cho tế bào trứng đến chất lượng tế bào trứng 105 3.17 Ảnh hưởng của giống bò cho tế bào trứng đến sự phân chia của hợp tử, phôi dâu và phôi nang 106 3.18 Ảnh hưởng của tuổi bò cho tế bào trứng đến số lượng nang trứng được hút và số lượng tế bào trứng thu được 109 3.19 Ảnh hưởng của tuổi bò cho tế bào trứng đến chất lượng tế bào trứng 110 3.20 Ảnh hưởng của tuổi bò cho tế bào trứng đến sự phân chia của hợp tử, phôi dâu và phôi nang 111 3.21 Ảnh hưởng của mùa vụ đến số lượng nang trứng được hút và số lượng tế bào trứng thu được 114 3.22 Ảnh hưởng của mùa vụ đến chất lượng tế bào trứng 115 3.23 Ảnh hưởng của mùa vụ đến sự phân chia của hợp tử, phôi dâu và phôi nang 115