tóm tắt luận án tiến sĩ nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả của kỹ thuật siêu âm hút tế bào trứng bò để tạo phôi trong ống nghiệm

Có rất nhiều yếu tố ảnh hưởng đến số lượng tế bào trứng thu được, chất lượng tế bào trứng, hợp tử phân chia, phôi dâu và phôi nang thu được.. Chính vì lẽ đó chúng tôi tiến hành nghiên cứ

Trang 1

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI

*************************

PHAN LÊ SƠN

NGHIÊN CỨU MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG

ĐẾN HIỆU QUẢ CỦA KỸ THUẬT SIÊU ÂM HÚT TẾ

BÀO TRỨNG BÒ ĐỂ TẠO PHÔI TRONG ỐNG NGHIỆM

Mã số : 62 64 01 06

TÓM TẮT LUẬN ÁN TIẾN SỸ NÔNG NGHIỆP

HÀ NỘI- 2013

Công trình hoàn thành tại:

TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI

Người hướng dẫn:

GS.TSKH Cù Xuân Dần PGS.TS Hoàng Kim Giao

Phản biện 1:………

Luận án sẽ được bảo vệ trước Hội đồng chấm luận án cấp Trường tại Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội

Vào hồi: giờ, ngày tháng năm 2013

Có thế tìm hiểu luận án tại:

Thư viện Quốc gia Việt Nam Thư viện Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội Viện Chăn nuôi

Trang 2

MỞ ĐẦU

1 Tính cấp thiết của đề tài

Tạo ra đàn bò sữa có năng suất cao, chất lượng sữa tốt, đáp ứng

nhu cầu tiêu thụ sữa trong nước và giảm lượng sữa nhập khẩu đang là

nhu cầu cấp thiết Do vậy các kỹ thuật như: gây rụng trứng nhiều, thụ

tinh trong ống nghiệm, cắt phôi, xác định gới tính, cấy truyền phôi

không ngừng được quan tâm nghiên cứu nước ta và đã thu được

những kết quả khả quan Song việc ứng dụng rộng rãi các kỹ thuật này

vào thực tế sản xuất vẫn còn nhiều hạn chế

Kỹ thuật siêu âm hút tế bào trứng cho phép khai thác tế bào trứng

có chất lượng tốt từ gia súc cái được chọn lọc kỹ càng về mặt năng

suất, chất lượng, nuôi thành thục, thụ tinh và tạo phôi in vitro Cấy

chuyển phôi cho bò nhận để nhân nhanh giá trị di truyền đó vào thực

tế sản suất, rút ngắn thời gian cải tiến, mang lại hiệu quả kinh tế cao

cho người chăn nuôi

Có rất nhiều yếu tố ảnh hưởng đến số lượng tế bào trứng thu

được, chất lượng tế bào trứng, hợp tử phân chia, phôi dâu và phôi

nang thu được Chính vì lẽ đó chúng tôi tiến hành nghiên cứu đề tài:

"Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả của kỹ thuật

siêu âm hút tế bào trứng bò để tạo phôi trong ống nghiệm "

2 Mục tiêu của đề tài

- Đánh giá được sự ảnh hưởng các yếu tố đến hiệu quả của kỹ

thuật siêu âm hút tế bào trứng bò để tạo phôi trong ống nghiệm

- Xác định được các yếu tố phù hợp, tăng số lượng nang trứng

được hút, số lượng tế bào trứng thu được, hợp tử phân chia, phôi dâu

và phôi nang thu được

3 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài

- Là một kỹ thuật mới, đầu tiên được nghiên cứu và ứng dụng ở nước

ta vào năm 2005 Là kỹ thuật có giá trị kinh tế cao, mở ra một triển vọng mới trong việc sản xuất và thương mại hóa phôi trong ống nghiệm

- Nâng cao được chất lượng, số lượng tế bào trứng, từ đó tăng số lượng, chất lượng phôi dâu và phôi nang Hạ được giá thành của phôi, tăng khả năng ứng dụng vào thực tế sản xuất ở nước ta

- Cho phép thu tế bào trứng liên tục 2 lần/tuần ở bê, bò trưởng thành,

bò chậm sinh và thậm chí bò mang thai trong 3 tháng đầu mà không cần sử dụng hormone để kích thích

- Siêu âm hút tế bào trứng không làm ảnh hưởng đến quá trình tiết sữa

Bò cho tế bào trứng sẽ động dục và sinh sản bình thường sau khi ngừng siêu âm hút tế bào trứng 7 – 10 ngày

- Cho phép khai thác tối đa tiềm năng di truyền của bò mẹ

- Cung cấp tế bào trứng cho các nghiên khác: Đông lạnh tế bào trứng,

xác định giới tính, cloning, chuyển gen, bảo tồn quỹ gen

- Chủ động được thời gian và số lượng tế bào trứng

4 Những đóng góp mới của luận án

- Cơ sở khoa học, phương pháp và kỹ thuật siêu âm hút tế bào trứng là tài liệu tham khảo cho các nhà nghiên cứu, giảng dạy và học tập

- Ứng dụng kỹ thuật siêu âm cho phép mở ra một hướng mới trong việc nghiên cứu sinh sản, tình trạng sinh sản của bò thông qua việc đánh giá cấu trúc và hoạt động của buồng trứng Đánh giá tình trạng sinh sản và bệnh sinh sản của đàn Điều trị bênh u nang buồng trứng

- Kỹ thuật siêu âm cho phép kiểm tra năng suất bò đực giống từ những con bê được sinh ra/cùng một cặp bố mẹ

5 Bố cục của luận án

Luận án gồm 155 trang Trong đó số lượng trang ở các phần như sau: Mở đầu 4 trang, tổng quan 50 trang, nội dung và phương pháp nghiên cứu 9 trang, kết quả và thảo luận 53 trang, kết luận và đề nghị

2 trang, tài liệu tham khảo 24 trang và phần phụ lục 13 trang

Trang 3

Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU Tổng quan tài liệu đề cập đến tám vấn đề chủ yếu như sau:

1 Sự hình thành tế bào mầm nguyên thủy, sự phát triển của tế bào mầm

nguyên thủy thành túi noãn, sự phát triển của túi noãn thành tế bào trứng

2 Sự hình thành nang trứng nguyên thủy, sự phát triển của nang trứng

nguyên thủy đến giai đoạn rụng trứng, sự hình thành sóng nang và

chức năng của nang trứng

3 Cơ chế điều khiển của hormone đến sự phát triển nang trứng

4 Vai trò của FSH

5 Kỹ thuật thu tế bào trứng từ lò mổ và thu tế bào trứng từ bò sống

6 Một số yếu tố ảnh hưởng đến số lượng số lượng, chất lượng tế bào

trứng và kết quả tạo phôi in vitro khi siêu âm hút tế bào trứng

7 Nuôi tế bào trứng in vitro và một số yếu tố ảnh hưởng đến kết quả

nuôi thành thục tế bào trứng

8 Tạo phôi in vitro và một số yếu tố ảnh hưởng đến quá trình thụ tinh

của tế bào trứng

9 Nuôi phôi in vitro và một số yếu tố ảnh hưởng đến chất lượng của

phôi

10 Ảnh hưởng của kỹ thuật siêu âm hút tế bào trứng đến kết quả nuôi

thành thục, thụ tinh và tạo phôi in vitro

Chương 2 NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

2.1 Vật liệu, nội dung và phương pháp nghiên cứu

2.1.1 Vật liệu nghiên cứu

- Bò cho tế bào trứng ở các thí nghiệm là bò sữa HF và bò lai hướng

sữa F3 (Holstein Friesian x Lai Sind), 3 – 8 tuổi, đang sinh sản bình

thường điểm thể trạng 2,5 – 3 điểm và không mang thai

- Tinh sử dụng để thụ tinh in vitro là tinh bò HF của cùng một con

đực, có năng suất sữa từ 10.000 lít sữa trở lên Được nhập từ Mỹ

2.1.2 Nội dung nghiên cứu

- Nghiên cứu ảnh hưởng của áp lực hút

- Nghiên cứu ảnh hưởng tần suất siêu âm hút tế bào trứng

- Nghiên cứu ảnh hưởng của kích thước nang trứng

- Nghiên cứu ảnh hưởng của pha nang trứng phát triển và pha nang trứng trội

- Nghiên cứu ảnh hưởng của liều lượng FSH

- Nghiên cứu ảnh hưởng của giống bò

- Nghiên cứu ảnh hưởng của tuổi bò

- Nghiên cứu ảnh hưởng của mùa vụ

2.1.3 Phương pháp nghiên cứu

2.1.3.1 Siêu âm hút tế bào trứng

Siêu âm hút tế bào trứng được thực hiện bằng màn hình siêu âm (HS-2000, HONDA Electronics Co., Ltd, Japan), đầu dò siêu âm có đường dẫn kim hút tế bào trứng 7,5 MHz (HBV-4710 MV, Fujira In dustry Co., Ltd, Japan), máy tạo áp suất (FHK, Model 4, Tokyo, Japan), kim hút tế bào trứng một đường dẫn (dài 55 cm, 18 G, COVA, Missawa Medical Industry Co., Ltd, Japan)

2.1.3.2 Đánh giá chất lượng tế bào trứng

Phân loại tế bào trứng được thực hiện theo Goodhand và cs (2000)

2.1.3.3 Nuôi thành thục tế bào trứng

Tế bào trứng loại A, B được nuôi thành thục theo quy trình của một số tác giả đã công bố như Saitoh và cs (1995), Kaijihara và cs (1999) Numabe và cs (2000), Imai và cs (2006)

2.1.3.4 Hoạt hóa tinh trùng

Hoạt hóa tinh trùng được thực hiện trong môi trường BO theo một

số tác giả đã công bố như Saitoh và cs (1995), Kaijihara và cs (1999)

Trang 4

Numabe và cs (2000), Imai và cs (2006)

2.1.3.5 Nuôi hợp tử và phôi in vitro

Sau khi ủ tinh trùng với tế bào trứng 5 h trong tủ nuôi CO2, các tế

bào trứng được tách khối tế bào cumulus và quá trình nuôi được duy

trì ở trong tủ CO2 ở nhiệt độ 38,50 C, 5% CO2 và độ ẩm tối đa

2.1.3.6 Đánh giá chất lượng phôi dâu và phôi nang thu được

Đánh giá chất lượng phôi dâu và phôi nang thu được, được thực

vào ngày thứ 7 và ngày thứ 8

2.1.3.7 Bố trí thí nghiệm

Bò sử dụng trong từng thí nghiệm có, điểm thể trạng, cân nặng

tương đối đồng đều Sử dụng máy siêu âm để xác định sự đồng đều về

hoạt động và kích thước của hai buồng trứng Được chăm sóc nuôi

dưỡng trong một điều kiện, cho ăn 4 kg thức ăn tinh và 50 kg cỏ

tươi/ngày Bò cho tế bào trứng ở các thí nghiệm không giống nhau

Siêu âm hút tế bào trứng trong tất cả các thí nghiệm được thực hiện

bởi một người kỹ thuật Nhóm người thực hiện soi tìm tế bào trứng,

đánh giá chất lượng tế bào trứng, nuôi thành thục, thụ tinh và tạo phôi

trong từng thí nghiệm hầu như không có sự thay đổi Hệ thống máy

móc, thiết bị, môi trường,…giống nhau

Gồm có 8 thí nghiệm được thực hiện độc lập với nhau, trong suốt

thời gian từ năm 2006 – 2011

Thí nghiệm 1: Nghiên cứu ảnh hưởng của áp lực hút được thực hiện ở

áp lực hút 60mmHg, 90 mmHg, 120 mmHg và 150 mmHg, trên ba bò

HF có cùng độ tuổi (8 tuổi) và ở tần suất 2 lần/tuần

Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng của tần suất được thực hiện ở tần

suất hút 2 tuần/lần, 1 tuần/lần và ½ tuần/lần được tiến hành trên ba bò sữa

HF có cùng độ tuổi (5 tuổi), ở áp lực hút 120 mmHg

Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng của kích thước nang trứng (2 – 5, 6 – 9 và

≥ 10 mm) được thực hiện trên hai bò sữa HF (6 tuổi), ở áp lực hút 120 mmHg

và ở tần suất ½ tuần/lần

Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng của pha nang trứng phát triển và

pha nang trứng trội Được thực hiện hiện ở áp lực hút 120 mmHg

Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hưởng của liều lượng FSH được tiến

hành trên hai bò HF (3 tuổi), Gồm có 6 liều lượng FSH được nghiên cứu: o mg, 2 mg, 3 mg, 4 mg, 5 mg và 6 mg Siêu âm hút tế bào trứng được thực hiện ở áp lực hút 120 mmHg và tần suất ½ tuần/lần

Thí nghiệm 6: Nghiên cứu ảnh hưởng của giống bò được tiến hành

trên hai bò HF và hai bò lai hướng sữa F3 (HF x lai Sind), ở áp lực hút

120 mmHg, tần suất 1/2 tuần/lần

Thí nghiệm 7: Nghiên cứu ảnh hưởng của tuổi bò được tiến hành trên

bốn bò HF tuổi 3 và 6 tuổi, ở áp lực hút 120 mmHg, tần suất ½ tuần/lần

Thí nghiệm 8: Nghiên cứu ảnh hưởng của mùa vụ ở vụ đông - xuân

và hè - thu được tiến hành trên hai bò sữa HF (6 tuổi), ở áp lực hút 120 mmHg, tần suất ½ tuần/lần

2.1.3.8 Xử lý số liệu

Các kết quả nghiên được phân tích và đánh giá sự khác nhau về thống kê giữa các yếu tố ở các thí nghiệm sử dụng chương trình Paired t-test trong phần mềm minitab, phiên bản 14 Các giá trị được trình bày dưới dạng X ± SE (X: Bình quân; SE: Sai số chuẩn)

2.2 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

Thí nghiệm được tiến hành từ năm 2006 đến năm 2011, tại:

- Bộ môn Sinh lý, Sinh sản và Tập tính vật nuôi - Viện Chăn nuôi

- Khoa Thú y - Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội

- Bộ môn Hóa sinh - Sinh lý động vật - Trường Đại học Nông nghiệp Hà Nội

- Trạm kiểm nghiệm và bảo tồn vật nuôi, Viện Chăn nuôi

- Các hộ nuôi bò huyện Ba Vì, Hà Nội và Vĩnh Phúc

Trang 5

Chương 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Ảnh hưởng của áp lực hút

* Ảnh hưởng của áp lực hút đến số lượng nang trứng được hút và tế

bào trứng thu được

Bảng 3.1 Số lượng nang trứng được hút và ảnh hưởng của áp lực

hút đến số lượng tế bào trứng thu được

Áp lực

hút

Nang trứng được hút Tế bào trứng thu được

(%)

120 mmHg 170 9,44 ± 0,39 138 7,67c ± 0,31 81,18

150 mmHg 178 9,89 ± 0,52 155 8,61 c ± 0,44 87,08

Ghi chú: Các giá trị trong cùng một cột không mang chữ cái giống nhau thì

sai khác có ý nghĩa P < 0,05%; %: Tỉ lệ tế bào trứng thu được/nang trứng

được hút; X: Bình quân/buồng trứng/lần

Có sự ảnh hưởng rõ rệt (bảng 3.1) của áp lực hút đến tế bào trứng

thu được (P < 0,05) Ở áp lực 120 và 150 mmHg có sự sai khác (P <

0,05) và cao hơn so với áp lực 60 và 90 mmHg Số lượng tế bào

trứng/buồng trứng/lần siêu ở áp lực hút 150 mmHg lớn nhất

* Ảnh hưởng của áp lực hút đến chất lượng tế bào trứng

Kết quả đánh giá chất lượng cho thấy, có sự ảnh hưởng của áp lực

hút lên chất lượng tế bào trứng loại A (P < 0,05) Ở áp lực hút 120

mmHg có số lượng tế bào trứng loại A/buồng trứng/lần cao nhất, đạt

3,78 tế bào Số lượng tế bào trứng loại B/buồng trứng/lần ở áp lực 120

và 150 mmHg lớn hơn áp lực 60 và 90 mmHg Tuy nhiên ở áp lực 120

và 150 lại không có sự khác nhau (P < 0,05) Về tế bào trứng loại C và

D, chỉ có sự khác biệt tế bào trứng loại D ở áp lực 150 mmHg

Bảng 3.2 Ảnh hưởng của áp lực hút đến chất lượng tế bào trứng

thu được

Áp lực hút

Chất lượng tế bào trứng

X ± SE (n) X ± SE (n) X ± SE (n) X ± SE (n)

60 mmHg 1,44 a ± 0,17

(26)

1,06 a ± 0,17 (19)

0,33 a ± 0,14 (6)

0,17 a ± 0,09 (3)

90 mmHg 1,89 b ± 0,16

(34)

1,33 a ± 0,20 (24)

0,56 a ± 0,17 (10)

0,39 a ± 0,12 (7)

120 mmHg 3,78c ± 0,27

(68)

3,00b ± 0,26 (54)

0,56a ± 0,15 (10)

0,33a ± 0,11 (6)

150 mmHg 2,44 b ± 0,23

(44)

3,17 b ± 0,27 (57)

1,44 b ± 0,20 (26)

1,56 b ± 0,18 (28)

Ghi chú: Các giá trị trong cùng một cột không mang chữ cái giống nhau thì sai khác có ý nghĩa P < 0,05; A, B, C và D: Chất lượng tế bào trứng theo thứ

tự từ cao đến thấp; X: Bình quân/buồng trứng/lần

* Ảnh hưởng của áp lực hút đến hợp tử phân chia, phôi dâu và phôi

nang thu được

Bảng 3.3 Ảnh hưởng của áp lực hút đến sự phân chia của hợp

tử, phôi dâu và phôi nang

Áp lực hút

Tế bào trứng Nuôi

in vitro (n)

Hợp tử phân chia Phôi dâu và phôi nang

a

± 0,23 (27) 60,00

0,56a ± 0,17 (10) 22,22

90 mmHg

58

1,72a ± 0,21 (31) 53,45

0,61a ± 0,14 (11) 18,97

120 mmHg

122

3,61b ± 0,31

1,11a ± 0,20 (20) 16,39

150 mmHg

101

2,50c ± 0,23

0,67a ± 0,14 (12) 11,88

Ghi chú: Các giá trị trong cùng một cột không mang chữ cái giống nhau thì sai khác có ý nghĩa P < 0,05; %: Tỉ lệ hợp tử, phôi dâu và phôi nang thu được/tế bào trứng nuôi in vitro; X: Bình quân/buồng trứng/lần

Trang 6

Có sự sai khác về số lượng hợp tử phân chia (bảng 3.3) ở áp lực

hút 120 mmHg, 150 mmHg so với 60 mmHg và 90 mmHg (P < 0,05)

Số lượng hợp tử thu được/buồng trứng/lần ở áp lực 120 mmHg thu

được cao nhất (P < 0,05) Không có sự ảnh hưởng của áp lực hút lên

số lượng phôi dâu và phôi nang thu được (P > 0,05) Tuy nhiên số

phôi thu được ở áp lực 120 mmHg cao nhất, đạt 1,11 phôi

* Kết luận: Qua kết quả nghiên cứu ta thấy có sự biến động rất lớn về

kết quả thu được giữa các mức độ áp lực Ở áp lực hút 120 mmHg thu

được số phôi nang và phôi dâu/buồng/lần lớn nhất

Qua kết quả cho thấy, ở áp lực 60 và 90 mmHg có số lượng tế bào

trứng thấp là do áp lực hút yếu Còn ở áp lực 150 mmHg có số lượng

tế bào trứng cao nhưng chất lượng và phôi thu được thấp, kết quả này

có thể là do lực hút mạnh tác động mạnh lên màng cumulus, làm giảm

màng cumulus của tế bào trứng

3.2 Ảnh hưởng của tần suất siêu âm hút tế bào trứng

* Ảnh hưởng của tần suất siêu âm hút tế bào trứng đến số lượng nang

trứng được hút và tế bào trứng thu được

Bảng 3.4 Ảnh hưởng của tần suất siêu âm hút tế bào trứng đến số

lượng nang trứng được hút và số lượng tế bào trứng thu được

Tần suất

(%)

2 tuần 129 7,17 a ± 0,69 103 5,72 a ± 0,57 79,84

1 tuần 164 9,1b ± 0,49 132 7,33b ± 0,39 80,49

½ tuần 195 10,83c ± 0,44 154 8,56c ± 0,42 78,97

Ghi chú: Các giá trị trong cùng một cột không mang chữ cái giống

nhau thì sai khác có ý nghĩa P < 0,05%; %: Tỉ lệ tế bào trứng thu

được/nang trứng được hút; X: Bình quân/buồng trứng/lần

Kết quả thu được cho thấy (bảng 3.4), có sự ảnh hưởng của tần suất siêu âm hút tế bào trứng đến kết quả thu được (P < 0,05) Số nang trứng/buồng trứng/lần và lượng tế bào trứng thu được ở tần suất ½

tuần/buồng trứng/lần lớn nhất (P <0,05), đạt 10,83 nang và 8,56 tế bào

* Ảnh hưởng của tần suất siêu âm hút tế bào trứng đến chất lượng tế bào trứng

Có sự khác nhau về chất lượng tế bào trứng loại A giữa ba tần suất (P < 0,05) Trong đó ở tần suất ½ tuần/lần cao nhất, với 4,00 tế bào trứng/buồng trứng/lần Tế bào trứng loại B ở tần suất ½ tuần/lần cao hơn và có sự sai khác với tần suất 2 tuần/lần và 1 tuần/lần, đạt 3,11 tế bào trứng/buồng trứng/lần Không có sự khác biệt về chất

lượng tế bào trứng loại C và D giữa ba tần suất siêu âm hút tế bào trứng

Bảng 3.5 Ảnh hưởng của tần suất siêu âm hút tế bào trứng

đến chất lượng tế bào trứng

Tần suất

2 tuần

2,00a ± 0,18 (36)

1,89a ± 0,31 (34)

0,94a ± 0,19 (17)

0,89a ± 0,24 (16) 1tuần

2,67b ± 0,26 (48)

2,39a ± 0,31 (43)

1,22a ± 0,17 (22)

1,06a ± 0,21 (19)

½tuần

4,00c ± 0,30 (72)

3,11b ± 0,28 (56)

0,83a ± 0,15 (15)

0,61a ± 0,16 (11)

Ghi chú: Các giá trị trong cùng một cột không mang chữ cái giống nhau thì sai khác có ý nghĩa P < 0,05; A, B, C và D: Chất lượng tế bào trứng theo thứ tự từ cao đến thấp; X: Bình quân/buồng trứng/lần

* Ảnh hưởng của tần suất siêu âm hút tế bào trứng đến hợp tử phân

chia, phôi dâu và phôi nang thu được

Có sự ảnh hưởng rõ rệt của ba loại tần suất khác nhau (bảng 3.6) lên sự phân chia của hợp tử (P < 0,5) Ở tần suất ½ tuần có số lượng hợp tử phân chia/buồng trứng/lần cao nhất 5,11 hợp tử Tỉ lệ hợp tử ở

Trang 7

ở tần suất ½ tuần cũng cao hơn so với tần suất 2 tuần và 1 tuần (P < 0,05), đạt

25% phôi dâu và phôi nang thu được

Có sự khác biệt về số lượng phôi dâu thu được ở tần suất ½ tuần/lần (P <

0,05) so với tần suất 2 tuần/lần và 1 tuần/lần, tương ứng: 1,83 phôi so với 0,56

và 0,72 phôi

Bảng 3.6 Ảnh hưởng của tần suất siêu âm hút tế bào trứng đến sự

phân chia của hợp tử, phôi dâu và phôi nang

Tần suất

Tế bào

trứng nuôi

in vitro (n)

X ± SE (n)

a

± 0,20

0,56a ± 0,12

b

± 0,20

0,72a ± 0,16

c

± 0,46

1,83b ± 0,20

nhau thì sai khác có ý nghĩa P < 0,05; %: Tỉ lệ hợp tử, phôi dâu và phôi

nang thu được/tế bào trứng nuôi in vitro; X: Bình quân/buồng trứng/lần

* Kết luận: Ở tần suất ½ tuần/lần cho số lượng phôi dâu và phôi nang

thu được cao nhất, đạt 1,83 phôi/buồng trứng/lần

3.3 Ảnh hưởng của kích thước nang trứng

* Ảnh hưởng của kích nang trứng đến số lượng nang trứng được hút

và tế bào trứng thu được

Có sự ảnh hưởng rõ rệt giữa ba mức độ kích thước về số lượn

nang trứng được hút và số lượng tế bào trứng thu được (P < 0,05)

Nang có kích thước 2 – 5 mm có số lượng nang trứng và số lượng tế

bào trứng/buồng trứng/lần thu được lớn nhất, tương ứng: 9,63 nang và

7,50 tế bào trứng Bảng 3.7) Thấp nhất là nang trứng có kích thước ≥

10 mm, chỉ có 0,85 nang trứng và 0,67 tế bào trứng/buồng trứng/lần

Bảng 3.7 Ảnh hưởng của kích thước nang trứng đến số lượng nang trứng được hút và số lượng tế bào trứng thu được

Kích thước nang trứng

(%)

2 – 5 mm 578 9,63a ± 0,22 450 7,50a ± 0,16 77,85

6 – 9 mm 108 1,80b ± 0,11 88 1,47b ± 0,09 81,48

≥ 10 mm 51 0,85c ± 0,09 40 0,67c ± 0,07 78,43

Ghi chú: Các giá trị trong cùng một cột không mang chữ cái giống nhau thì sai khác có ý nghĩa P < 0,05%; %: Tỉ lệ tế bào trứng thu được/nang trứng được hút; X: Bình quân/buồng trứng/lần

* Ảnh hưởng của kích thước nang trứng đến chất lượng tế bào trứng

Bảng 3.8 Ảnh hưởng của kích thước nang trứng đến chất lượng tế

bào trứng

Kích thước nang trứng

A B C D

2 – 5 mm 4,23a ± 0,14

(254)

2,30a ± 0,17 (138)

0,52a ± 0,09 (31)

0,45a ± 0,09 (27)

6 – 9 mm 0,45b ± 0,77

(27)

0,60b ± 0,08 (36)

0,27b ± 0,07 (16)

0,15b ± 0,05 (9)

≥ 10 mm 0,05c ± 0,03

(3)

0,05c ± 0,03 (3)

0,25b ± 0,06 (15)

0,50a ± 0,08 (30)

Có sự sai khác có ý nghĩa về chất lượng tế bào trứng loại A giữa 3 loại kích thước (P < 0,05) Số lượng tế bào trứng loại A ở kích thước 2 – 5 mm cao hơn (P < 0,05) so với kích thước 6 – 9 và 10 mm trở lên

Tế bào trứng loại B/buồng trứng/lần cũng có sự sai khác ( P < 0,05) ở

ba mức độ kích thước, lớn nhất ở kích thước 2 – 5 mm

* Ảnh hưởng của kích thước nang trứng đến hợp tử phân chia, phôi

dâu và phôi nang thu được

Trang 8

Bảng 3.9 Ảnh hưởng của kích thước nang trứng đến sự phân chia

của hợp tử, phôi dâu và phôi nang

Kích thước

nang trứng

Tế bào trứng

Nuôi in vitro (n)

a

± 0,10 (223) 56,89

1,58a ± 0,08 (95) 24,23

6 - 9 mm

63

0,58b ± 0,07 (35) 55,56

0,20b ± 0,05

≥ 10 mm

6

0,05c ± 0,03

Có sự sai khác giữa ba mức độ kích thước khác nhau (P < 0,05), số

lượng hợp tử phân chia/buồng trứng/lần ở kích thước 2 – 5 mm là lớn

nhất

Có sự khác biệt về số lượng phôi dâu và phôi nang thu được/buồng

trứng/lần ở nang trứng kích thước 2 – 5 mm so với 6 – 9 mm (P <

0,05) và ở kích thước 2 – 5 mm cao hơn so với kích thước 10 mm trở lên

* Kết luận: Từ kết quả nghiên cứu cho thấy rằng, nang trứng có kích

thước 2 – 5 mm cho số lượng nang trứng được hút, số lượng tế bào

trứng, hợp tử phân chia, phôi dâu và phôi nang thu được lớn nhất

3.4 hưởng của pha nang trứng phát triển và pha nang trứng trội

* Ảnh hưởng của pha sóng nang đến số lượng nang trứng được hút và

tế bào trứng thu được

Có sự sai khác về số lượng nang trứng/buồng trứng/lần (P < 0,05),

ở pha phát triển và pha nang pha trội Ở pha nang trứng phát triển cao

hơn pha nang trội, tương ứng: 14,93 so với 8,93 nang trứng/buồng/lần

Tương tự, số lượng tế bào trứng cũng có sự khác biệt và cao hơn ở pha

nang trứng phát triển, đạt 11,64 tế bào

Bảng 3.10 Ảnh hưởng của pha nang trứng phát triển và pha nang

trứng trội đến số lượng nang trứng được hút và số lượng tế bào

trứng thu được

Pha sóng nang

(%)

Pha phát triển 209 14,93a ± 0,67 163 11,64a ± 0,64 77,99 Pha trội 125 8,93b ± 0,46 99 7,07b ± 0,41 79,20

Ghi chú: Các giá trị trong cùng một cột không mang chữ cái giống nhau thì sai khác có ý nghĩa P < 0,05%; %: Tỉ lệ tế bào trứng thu được/nang trứng được hút; X: Bình quân/buồng trứng/lần

* Ảnh hưởng của pha sóng nang đến chất lượng tế bào trứng

Bảng 3.11 Ảnh hưởng pha nang trứng phát triển và pha nang

trứng trội đến chất lượng tế bào trứng

Pha sóng nang

X ± SE (n) X ± SE (n) X ± SE (n) X ± SE (n) Pha phát triển 4,36

a

± 0,31 (61)

4,14a ± 0,27 (58)

2,00a ± 0,36 (28)

1,14a ± 0,29 (16) Pha trội 2,14

b

± 0,21 (30)

2,36b ± 0,17 (33)

1,00b ± 0,21 (14)

1,57a ± 0,17 (22)

Có sự khác biệt giữa tế bào trứng loại A, B và C ở pha phát triển

và pha trội (P < 0,05) Ở pha phát triển bình quân số lượng tế bào

trứng A, B và C/buồng trứng/lần cao hơn ở pha nang trội (bảng 3.11)

* Kết luận: Qua kết quả nghiên cứu chúng tôi có thể đưa ra kết luận

rằng, pha sóng nang ảnh hưởng đến số lượng nang trứng được hút và

số lượng tế bào trứng thu được (P < 0,05) Ở pha phát triển cho kết quả cao hơn khi siêu âm hút tế bào trứng để thụ tinh ống nghiệm

Trang 9

3.5 Ảnh hưởng của liều lượng FSH

* Ảnh hưởng của liều lượng FSH số lượng nang trứng được hút

và tế bào trứng thu được

Siêu âm hút tế bào trứng được thực hiện trên 120 lượt buồng

trứng Kết quả (Bảng 3.12) cho thấy, liều lượng FSH khác nhau có ảnh

hưởng đến số lượng nang trứng được hút (P < 0,05) Ở liều lượng FSH

5 mg và 6 mg có số lượng nang trứng/buồng trứng/lần cao nhất (P < 0,05)

Số lượng tế bào trứng giữa các liều lượng FSH cũng có sự khác biệt và

cao nhất ở liều lượng FSH 5 mg và 6 mg, tương ứng: 10,75 và 10,80 tế bào

Bảng 3.12 Ảnh hưởng của các liều lượng FSH đến số lượng nang

trứng được hút và số lượng tế bào trứng thu được

Liều

FSH

Nang trứng được hút Tế bào trứng

(%)

ĐC 243 12,15a ± 0,36 184 9,20a ± 0,26 75,72

2 mg 250 12,50a ± 0,40 188 9,40a ± 0,33 75,20

3 mg 284 14,20b ± 0,68 215 10,75b ± 0,35 75,70

4 mg 285 14,25b ± 0,51 216 10,80b ± 0,42 75,79

5 mg 324 16,20c ± 0,57 248 12,40c ± 0,46 76,54

6 mg 321 16,05c ± 0,47 245 12,25c ± 0,35 76,32

* Ảnh hưởng của liều lượng FSH đến chất lượng tế bào trứng

Tế bào trứng loại A ở các liều lượng 3mg, 4mg, 5mg và 6 mg (P <

0,05) cao hơn so với liều 2 mg và liều đối chứng Chất lượng tế bào

trứng loại B lại chỉ có sự khác biệt của liều 5 mg và 6 mg so với các

liều FSH còn lại (P < 0,05) Chất lượng tế bào trứng loại C và D hầu

như không có sự khác nhau ở các liều lượng FSH, duy nhất chỉ có tế

bào trứng loại D ở liều FSH 6 mg là có sự khác biệt và cao nhât (P < 0,05)

Bảng 3.13 Ảnh hưởng của liều lượng FSH đến chất lượng tế bào trứng

Liều FSH

a

± 0,15 (63)

3,25a ± 0,24 (65)

2,10a ± 0,20 (42)

0,70a ± 0,19 (14)

a

± 0,23 (65)

3,20a ± 0,20 (64)

1,90a ± 0,14 (38)

1,05a ± 0,18 (21)

b

± 0,14 (75)

3,70a ± 0,29 (74)

2,10a ± 0,19 (42)

1,20a ± 0,21 (24)

b

± 0,22 (76)

3,75a ± 0,28 (75)

2,10a ± 0,14 (42)

1,15a ± 0,17 (23)

b

± 0,28 (90)

4,45b ± 0,21 (89)

2,40a ± 1,33 (48)

1,05a ± 0,17 (21)

b

± 0,24 (84)

4,20b ± 0,22 (84)

2,30a ± 0,13 (46)

1,55b ± 0,22 (31)

* Ảnh hưởng của liều lượng FSH đến hợp tử phân chia, phôi dâu

và phôi nang thu được

Bảng 3.14 Ảnh hưởng của liều lượng FSH đến sự phân chia của

hợp tử, phôi dâu và phôi nang

Liều FSH

Tế bào trứng nuôi

in vitro (n)

ĐC 128 3,35a ± 0,65 (67) 52,34 1,05a ± 0,15 (21) 16,41

2 mg 129 3,40a ± 0,46 (68) 52,71 1,10a ± 0,16 (22) 17,05

3 mg 149 4,00a ± 0,49 (80) 53,69 1,40a ± 0,18 (28) 18,79

4 mg 151 4,10a ± 0,78 (82) 54,30 1,45a ± 0,15 (29) 19,21

5 mg 179 5,05b ± 0,87 (101) 56,42 2,35b ± 0,23 (47) 31,13

6 mg 168 4,55b ± 0,66 (91) 54,17 1.80a ± 0,24 (36) 20,11

Trang 10

Có sự sai khác (P < 0,05) giữa liều lượng FSH 5 mg và 6mg về số

lượng hợp tử phân chia/buồng trứng/lần so với liều lượng FSH đối

chứng, 2 mg, 3 mg và 4 mg (bảng 3.23) Số lượng hợp tử/buồng

trứng/lần cao hơn các liều FSH còn lại, tương ứng: 5,05 và 4,55 hợp tử

Qua kết quả phôi thu được cho thấy, liều lượng FSH 5mg có sự

khác biệt và cao hơn so với các liều lượng FSH còn lại (P < 0,05) Số

lượng phôi dâu và phôi nang thu được là 2,35 phôi/buồng trứng/lần

Có thể nói rằng liều lượng FSH 6 mg đã ảnh hưởng đến sự phát triển

của phôi đến giai đoạn phôi nang

* Kết luận: Liều lượng FSH 5 mg cho số lượng phôi dâu và phôi

nang/buồng trưng/lần cao nhất, đạt 2,35 phôi

3.6 Ảnh hưởng của giống bò

* Ảnh hưởng của giống đến số lượng nang trứng được hút và tế bào

trứng thu được

Bảng 3.15 Ảnh hưởng của giống bò cho tế bào trứng đến số lượng

nang trứng được hút và số lượng tế bào trứng thu được

Giống Nang trứng được hút Tế bào trứng thu được (%)

F3 244 10,17a ± 0,27 186 7,75a ± 0,24 76,23

HF 272 11,33b ± 0,34 214 8,92b ± 0,25 78,68

Giống bò ảnh hưởng đến số lượng nang trứng được hút và số

lượng tế bào trứng thu được (P < 0,05) Bò HF có số lượng nang

trứng/buồng trứng/lần cao hơn bò F3, tương ứng: 11,33 so với 10,17

nang Tương tự, số lượng tế bào trứng thu được/buồng trứng/lần ở bò

HF cũng cao hơn (P < 0,05) so với bò F3, tương ứng 9,92 so với 7,75 tế bào

* Ảnh hưởng giống đến chất lượng tế bào trứng

Bảng 3.16 Ảnh hưởng của giống bò cho tế bào trứng đến chất

lượng tế bào trứng

Giống

X ± SE (n) X ± SE (n) X ± SE (n) X ± SE (n) F3 2,92 ± 0,16 (70) 2,83 ± 0,19 (68) 1,08 ± 0,20 (26) 0,92 ± 0,16 (22)

HF 3,25 ± 0,15 (78) 3,21 ± 0,17 (77) 1,42 ± 0,22 (34) 1,04 ± 0,18 (25)

Ghi chú: A, B, C và D: Chất lượng tế bào trứng theo thứ tự từ cao đến thấp; X: Bình quân/buồng trứng/lần

Giống bò không ảnh hưởng rõ rệt đến chất lượng tế bào trứng loại

A, B, C và D (P > 0,05)

* Ảnh hưởng của giống đến hợp tử phân chia, phôi dâu và phôi nang

thu được

Bảng 3.17 Ảnh hưởng của giống bò cho tế bào trứng đến sự phân

chia của hợp tử, phôi dâu và phôi nang

Giống Tế bào trứng

Nuôi in vitro (n)

(80) 57,97

1,17 ± 0,08

(85) 54,84

1,29 ± 0,11

Ghi chú: %: Tỉ lệ hợp tử, phôi dâu và phôi nang thu được/tế bào trứng nuôi in vitro; X: Bình quân/buồng trứng/lần

Không có sự ảnh hưởng của giống bò lên số lượng hợp tử phân chia, phôi dâu và phôi nang thu được (P > 0,05) Số lượng phôi dâu và phôi nang thu được ở bò F3 và HF tương ứng: 1,17 và 1,29

phôi/buồng/lần

Định dạng
Số trang	14
Dung lượng	442,51 KB