tóm tắt luạn án tiến sĩ nghiên cứu một số đặc tính của vi khuẩn escherichia coli (nhóm vtec) phân lập từ bò, lợn được giết mổ tại hà nội

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO    ESCHERICHIA COLI     : 62 62 50 10  - 2012     Phn bin 1: Phn bin 2: Phn bin 3:     phút, ngày tháng   -  -  1  1  Ở Việt Nam, theo ước tính và thống kê của Tổ chức y tế thế giới (WHO) có khoảng 8 triệu người bị ngộ độc thực phẩm mỗi năm, trong đó phần lớn xảy ra tại các bếp ăn tập thể, khu công nghiệp, bếp ăn của học sinh. Năm 2010, cả nước xảy ra 175 vụ ngộ độc thực phẩm, làm hơn 5.000 người mắc và 42 trường hợp tử vong. Thiệt hại kinh tế cho chi phí điều trị bệnh và nghỉ làm việc khoảng 8 triệu USD/năm (Phương Thuận, 2011) [101]. Trong số rất nhiều nguyên nhân vi sinh vật gây ra các vụ ngộ độc thực phẩm ở người (Salmonella, E. coli, Vibrio cholera, Listeria, Clostridium botulism ), những năm gần đây, các vi khuẩn E. coli thuộc nhóm Verotoxigenic (VTEC) ngày càng được biết đến như là một trong những tác nhân quan trọng. Verotoxigenic E. coli là khái niệm dùng để chỉ nhóm các vi khuẩn E. coli có khả năng sản sinh ra độc tố Verotoxin hoặc Shiga-like toxin. Gần đây nhất, tháng 6 năm 2011, một đợt dịch do E. coli đã bùng phát tại Đức và nhanh chóng lan ra các quốc gia châu Âu khác. WHO cho biết, trên phạm vi toàn thế giới có hơn 1.270 ca nhiễm và 552 ca tiến triển thành HUS; con số tử vong lên tới 18 người bao gồm 17 trường hợp ở Đức và 1 trường hợp ở Thụy Điển. Nguyên nhân của đợt dịch được xác định là do rau quả bị nhiễm E. coli O104. Vụ dịch này gây tổn thất nặng nề tới nền kinh tế thuộc liên minh châu Âu (EU), ước tính mỗi tuần người nông dân tại đây thất thu 200 triệu euro (tương đương 290 triệu USD). Việc xác định chính xác loại vi khuẩn thuộc nhóm này là rất cần thiết, do mối nguy hại của vi khuẩn này liên quan đến các nạn dịch tiêu chảy trầm trọng ở người và khả năng truyền lây bệnh của chúng thông qua thức ăn có nguồn gốc động vật. Hiểu biết về các đặc tính của vi khuẩn Verotoxigenic E. coli ở các loài động vật nuôi (bò, lợn…) làm thực phẩm cho con người hoặc trong các loại thực phẩm cho con người có ý nghĩa quan trọng trong việc đưa ra các hệ thống cảnh báo sớm và tiến hành các biện pháp phòng chống bệnh thích hợp. Để có được những hiểu biết về vi khuẩn này trong thực trạng giết mổ và chế biến thực phẩm tại Việt Nam, chúng tôi đặt vấn đề tiến hành đề tài: "Nghiên cứu một số đặc tính của vi khuẩn Escherichia coli (nhóm VTEC) phân lập từ bò, lợn được giết mổ tại Hà Nội ” 2   - Xác định đặc tính của vi khuẩn E. coli nhóm VTEC phân lập được từ bò, lợn tại điểm giết mổ. 2 - Xây dựng được quy trình chẩn đoán, xác định vi khuẩn VTEC trong sản phẩm thịt tươi. 3  - Đề tài luận án là công trình nghiên cứu có hệ thống về vi khuẩn E. coli nhóm VTEC phân lập từ bò, lợn được giết mổ tại Hà Nội. - Kết quả nghiên cứu của đề tài giúp chúng ta xác định và hiểu được một số đặc tính cơ bản của vi khuẩn nhóm VTEC phân lập được từ bò, lợn. - Một số kỹ thuật mới và phương pháp phân tích kết quả có hệ thống của đề tài luận án có thể ứng dụng trong nghiên cứu một số vi khuẩn khác ở mức độ phân tử cũng như tài liệu giảng dạy về vi khuẩn nhóm VTEC. - Hiểu biết về vi khuẩn nhóm VTEC ở các loài động vật nuôi làm thực phẩm cho con người có ý nghĩa quan trọng trong việc đưa ra các hệ thống cảnh báo sớm và tiến hành các biện pháp phòng chống bệnh thích hợp. 4  - Đề tài luận án là công trình đầu tiên ở Việt Nam nghiên cứu đặc tính của vi khuẩn nhóm VTEC phân lập từ bò, lợn tại cơ sở giết mổ và một số sản phẩm thịt bò, lợn bày bán trên một số chợ tại địa bàn Hà Nội. - Thiết lập thành công phương pháp Multiplex PCR để xác định vi khuẩn nhóm VTEC trên thịt trong điều kiện Việt Nam. - Sử dụng phương pháp PCR, PFGE để xác định các yếu tố độc lực cao của vi khuẩn E. coli và xác định sự đa dạng di truyền của các chủng VTEC có nguồn gốc khác nhau. Cấu trúc luận án gồm 131 trang: Mở đầu 4 trang; Chương 1 Tổng quan tài liệu 40 trang; Chương 2 Nội dung, nguyên vật liệu và phương pháp nghiên cứu 12 trang; Chương 3 Kết quả và thảo luận 50 trang; Kết luận và đề nghị 2 trang; Các công trình đã công bố có liên quan 1 trang; Tài liệu tham khảo 15 trang gồm: 10 tài liệu trong nước, 90 tài liệu nước ngoài, 1 trang web; Phụ lục 7 trang. Luận án có 25 biểu bảng, 23 hình ảnh minh họa.   1.1 E. coli E. coli là loài chủ yếu của giống Escherichia, họ Enterobacteriaceae. Chúng là những vi khuẩn bắt màu Gram âm, hình gậy ngắn. Quan sát dưới kính hiển vi thường thấy đứng riêng hoặc thành đôi. E. coli là vi khuẩn thường thấy trong đường tiêu hóa của người và động vật. 3 Trong những năm gần đây, các chủng E. coli gây tiêu chảy được chia thành ít nhất 5 nhóm. Đó là E. coli gây độc ruột (ETEC - Enterotoxigenic E. coli) - sản sinh độc tố ruột nhưng không xâm nhập, E. coli xâm nhập ruột (EIEC - Entero invasive E. coli) có khả năng xâm nhập tế bào biểu mô ruột, E. coli gây bệnh tích ruột (EPEC - Enteropathogenic E. coli) có khả năng bám dính vào tế bào biểu mô và gây bệnh tích bám dính và xâm nhập (Attaching and Effacing - A/E), E. coli gây ngưng kết (EaggEC - Enteroaggregative E. coli) có khả năng bám dính vào tế bào biểu mô nhờ một cơ quan giống lông nhung và khuếch tán vào trong biểu mô ruột. Nhóm cuối cùng là VTEC gây bệnh viêm ruột xuất huyết, huyết niệu và ban xuất huyết giảm tiểu cầu ở người. Trước đây, VTEC là một phân nhóm của EPEC vì chúng cũng có khả năng gây bệnh tích A/E ở biểu mô ruột của động vật cảm thụ. Nhưng khi phát hiện một số chủng của VTEC có khả năng sản sinh độc tố VT để trợ giúp cho yếu tố bám dính này, chúng đã được tách ra thành một nhóm riêng là VTEC. 1.1.1 Phân loại E. coli Vi khuẩn E. coli được phân loại dựa theo các kháng nguyên bề mặt, gồm có kháng nguyên thân O (Somatic), kháng nguyên lông H (Flagellar) và kháng nguyên giáp mô K (Capsular) (Lior, 1996) [53]. 1.1.2 Đặc tính của vi khuẩn E. coli E. coli là trực khuẩn ngắn, hai đầu tròn, có kích thước 2 - 3 x 0,6 µm. Vi khuẩn bắt màu Gram âm. E. coli là trực khuẩn hiếu khí hoặc hiếu khí tùy tiện. Nhiệt độ thích hợp cho sự sinh trưởng và phát triển của vi khuẩn này là 37 0 C, pH thích hợp là 7,4. Vi khuẩn E. coli phát triển trên các môi trường nuôi cấy thông thường: thạch thường, nước thịt, thạch máu, MacConkey, Simmon citrate, Endo, EMB, SS Vi khuẩn E. coli có khả năng lên men và sinh hơi một số loại đường như: Glucose, Fructose, Galactose, Lactose, Manitol, Levulose, Xylose. Lên men không chắc chắn với các loại đường như: Dulcitol, Saccarose, Salixin. Các phản ứng: Indol, Catalase, MR dương tính; Citrat, Oxidase, VP, Urease, H2S âm tính. 1.2 Verotoxigenic Escherichia coli (VTEC) Trong số E. coli có khả năng gây tiêu chảy, VTEC được xem là một nhóm quan trọng gây tiêu chảy có lẫn máu ở người (Levent Akkaya và cs. 2006) [52]. 1.2.1 Danh pháp SLTEC (Shiga-like toxin-producing Escherichia coli) và STEC (Shiga toxin-producing Escherichia coli) là những tên gọi khác của VTEC. 1.2.2 Độc lực Nhìn chung, ngoại độc tố VT được coi là yếu tố độc lực của VTEC. Tuy nhiên, sự có mặt của riêng độc tố VT có thể không đủ gây ra bệnh, những yếu tố 4 được cho là độc lực khác có thể đóng một vai trò nào đó. Một số yếu tố có liên quan đến khả năng bám dính của VTEC với tế bào biểu mô ruột, gây nên bệnh tích A/E. Trong những yếu tố này có plasmid 60-Mda, mã hóa cho lông roi bám dính - một loại protein màng ngoài (OMP - Outer membrane protein), có yếu tố intimin do gen eae quy định tổng hợp. 1.2.3 Vai trò của VTEC không thuộc nhóm O157 Mặc dù triệu chứng của các bệnh nghiêm trọng ở người như HC và HUS hầu hết đều liên quan đến các chủng O157 (Beutin và cs. 1994) [19], vẫn còn một số trường hợp bệnh lẻ tẻ do các chủng không thuộc nhóm O157 gây ra. Năm 1992, ở Italia, O111: H - đã gây ra nhiều ca bệnh HUS. Ở Úc, báo cáo ca bệnh HUS đầu tiên do VTEC gây ra là vào năm 1987. Kiểm tra mẫu phân, các bác sỹ đã phân lập được chủng E. coli O111: H2. Pryor và cs. (1990) [76] phân lập được O111 từ các bệnh nhân bị HC. Chủng O111 trở thành nguyên nhân gây HC và HUS chủ yếu ở Úc. Nhiều chủng không thuộc nhóm O157 có nhiều yếu tố độc lực như sản sinh độc tố VT, gen eae, plasmid EHEC và độc tố gây xuất huyết ruột. Do vậy, nhiều vi khuẩn không thuộc nhóm O157 nhưng vẫn gây bệnh. 1.2.4 VTEC ở động vật Carlton (2004) [24] cho rằng tỷ lệ VTEC ở động vật dao động khoảng 6% - 100%. Thông thường, E. coli O157 có thể được tìm thấy trong đường tiêu hóa của một số loài như trâu bò, cừu, gia cầm, trong đó trâu bò đóng vai trò là nguồn tàng trữ chính (Levent Akkaya và cs. 2006) [52]. Có nhiều nghiên cứu về VTEC ở động vật được tiến hành, 60% các chủng VTEC không thuộc nhóm O157 phân lập từ trâu bò có khả năng gây bệnh cho người, đặc biệt các bệnh nặng như viêm ruột xuất huyết và hội chứng huyết niệu. 1.2.5 VTEC trong thực phẩm Có nhiều vụ dịch do VTEC đã xảy ra ở nhiều quốc gia, trong đó nguyên nhân chính là do sử dụng thực phẩm bị ô nhiễm, chủ yếu là các thực phẩm có nguồn gốc từ bò. Sự có mặt của VTEC trong thực phẩm đã được khẳng định ở nhiều quốc gia. 1.2.6 Nhiễm VTEC ở người VTEC, đặc biệt chủng O157:H7 được khẳng định có khả năng gây một số bệnh nghiêm trọng ở người, thường gây chết. Trẻ em, người già và người suy giảm miễn dịch là những đối tượng dễ bị nhiễm nhất. Số bệnh nhân bị HUS chiếm 12% các ca nhiễm VTEC. Tỷ lệ chết là 4%. 1.3 E. coli   Các báo cáo về các vụ ngộ độc thực phẩm do vi khuẩn E. coli gây ra tại 5 Việt Nam cũng đã được công bố. Năm 2004, (Thi Thu Thao Van, 2007) [89] phát hiện trên 90% các mẫu thịt và hải sản chứa E. coli, nhưng chưa xác định được cụ thể là loại E. coli nào. Các nghiên cứu về vi khuẩn E. coli và bệnh do chúng gây ra ở gia súc (lợn, bê) cũng đã được nhiều tác giả tập trung nghiên cứu, nhưng các công trình này chủ yếu đi sâu nghiên cứu về vi khuẩn thuộc nhóm Enterotoxigenic E. coli (Đỗ Ngọc Thúy 2004) [8]. 1.4  1.4.1 Phương pháp vi sinh vật Hiện nay, kỹ thuật nuôi cấy trực tiếp nhằm phân lập nhanh VTEC dựa trên hiện tượng dung huyết đã được báo cáo. Phương pháp này có sự chính xác cao vì 90% VTEC được kiểm tra đều gây dung huyết. 1.4.2 Phương pháp miễn dịch học Đã có một số phương pháp miễn dịch để phân lập VTEC như ELISA, miễn dịch huỳnh quang, 1.4.3 Phương pháp PCR Một trong những ứng dụng của PCR là xác định chính xác vi khuẩn. Đây là phương pháp nhanh, đặc hiệu, nhạy và tự động trong việc xác định các mầm bệnh là vi sinh vật. Nhiều tác giả đã sử dụng thành công phương pháp này trong xác định gen VT của VTEC. Phương pháp PCR xác định gen VT có thể phát hiện được dưới 10 VTEC trong tổng 10 9 coliform và là một phương pháp phù hợp để phát hiện VTEC trong mẫu phân hoặc mẫu thực phẩm nghi ngờ. 1.5 Kỹ thuật PFGE PFGE (Pulsed Field Gel Electrophoresis) là một trong các phương pháp dựa trên phân tích acid nucleic (DNA nhiễm sắc thể). Đây là phương pháp dùng enzym cắt hạn chế để cắt DNA của nhiễm sắc thể thành nhiều mảnh cắt khác nhau có kích thước khoảng 50 kb hoặc nhỏ hơn và được phân biệt bằng PFGE. Kỹ thuật PFGE được dùng cho nghiên cứu so sánh về sự tương đồng.   2.1  2.1.1 Thực trạng công tác kiểm soát giết mổ, vệ sinh thú y trên địa bàn Hà Nội - Thực trạng công tác kiểm soát giết mổ tại các điểm giết mổ gia súc, gia cầm trên địa bàn Hà Nội - Điều tra điều kiện điểm giết mổ và phương tiện vận chuyển của các điểm giết mổ trên địa bàn Hà Nội 6 - Thực trạng vệ sinh tại khu giết mổ gia súc, gia cầm trên địa bàn Hà Nội - Thực trạng điều kiện vệ sinh thú y tại cơ sở kinh doanh, chợ, tiêu thụ sản phẩm thịt gia súc, gia cầm 2.1.2 Thiết lập và chuẩn hóa phương pháp PCR dùng để xác định vi khuẩn VTEC - Lựa chọn giữa PCR đơn mồi và Multiplex - PCR - Lựa chọn môi trường nuôi cấy thích hợp để tách chiết DNA mẫu - Thực hiện phản ứng PCR với các chủng vi khuẩn đối chứng - Xác định độ nhạy và độ đặc hiệu của phản ứng PCR dùng để xác định VTEC trong môi trường nhân tạo - Xác định độ nhạy và độ đặc hiệu của phản ứng PCR dùng để xác định VTEC trong mẫu thịt sạch - Xây dựng quy trình xác định sự có mặt của vi khuẩn VTEC trong các mẫu thịt 2.1.3 Tỷ lệ nhiễm và một số đặc tính cơ bản của những chủng VTEC phân lập được - Tỷ lệ nhiễm trong phân - Tỷ lệ nhiễm trong thân thịt và mẫu lau thân thịt - Xác định các yếu tố độc lực cơ bản + Độc tố VT1 + Độc tố VT2 + Yếu tố bám dính intimin - Xác định serotyp - Xác định sự đa dạng di truyền của các VTEC có nguồn gốc phân lập khác nhau 2.3   - Các chủng vi khuẩn E. coli nhóm VTEC phân lập được - Các chủng vi khuẩn E. coli đối chứng dương và âm 2.4   Các môi trường nuôi cấy, hóa chất, sinh phẩm do hãng Merck, Oxoid cung cấp. Các chủng vi khuẩn E. coli đối chứng do một số phòng tham chiếu E. coli cung cấp. Các loại dụng cụ, trang thiết bị, máy móc phòng thí nghiệm. 2.5  2.5.1 Phương pháp lấy mẫu - Lấy mẫu thịt tươi: mẫu thịt lợn, bò được mua ngẫu nhiên tại một số chợ và siêu thị trên địa bàn Hà Nội. Mẫu được lấy vào buổi sáng (6 - 7 giờ). Mỗi mẫu được đựng riêng rẽ vào 1 túi nilon sạch, có ghi rõ ký hiệu. - Lấy mẫu lau thân thịt: dùng gạc tiệt trùng lau trên thân thịt sau khi đã 7 được giết mổ, tách toàn bộ nội tạng, mỗi thân thịt lau tại 3 vị trí, 100 cm 2 /vị trí. Sau khi lau, gạc được đặt vào lọ có chứa 20ml môi trường mTSB. 2.5.2 Phương pháp xác định số lượng vi khuẩn trong canh khuẩn nuôi cấy Canh khuẩn sau khi nuôi cấy được pha loãng trong dung dịch PBS thành các nồng độ 10 -1 , 10 -2 , …, 10 -8 . Lấy 0,1ml dung dịch ở các nồng độ pha loãng 10 -6 , 10 -7 , 10 -8 nhỏ và dàn đều trên bề mặt thạch máu, bồi dưỡng ở 37 0 C trong 24 giờ. Mỗi nồng độ pha loãng dùng 03 đĩa thạch. Đếm số khuẩn lạc mọc trên đĩa thạch, rồi tính trung bình cho mỗi nồng độ. 2.5.3 Phương pháp tiến hành phản ứng PCR Trình tự các mồi, kích cỡ sản phẩm, thành phần các chất và chu kỳ nhiệt của phản ứng PCR được trình bày ở các bảng 2.1, 2.2, 2.3. eae Gen   primers   - 3  )   (bp) VT1 VT1-F 5’ - CAGTTAATGTGGTGGCGAAG - 3’ 894 VT1-R 5’ - CTGCTAATAGTTCTGCGCATG - 3’ VT2 VT2-F 5’ - CTTCGGTATCCTATTCCCGG - 3’ 481 VT2-R 5’ - GGATGCATCTCTGGTCATTG - 3’ eae eae-F 5’ - ACGTTGCAGCATGGGTAACTC - 3’ 816 eae-R 5’ - GATCGGCAACAGTTTCACCTG - 3’  các gen VT1, VT2 và eae  l)  Mồi xuôi 3 3,2 M /l Mồi ngược 3 3,2 M /l Dung dịch đệm AMP x 5 (Fermentas) gồm: + 750 mM Tris - HCl (pH=8) + 200 mM (NH 4 ) 2 SO 4 + 0,1% (v/v) Tween 20 + dNTPs + 2 mM MgCl 2 5 - Taq - polymerase (Fermentas) 0,62 l 500 UI (1 U/1 l) DNA mẫu thích hợp Nước khử ion vừa đủ 25 l - Tổng cộng 25 l - 8  VT2 và eae    o C)  (phút)  Giai đoạn tiền biến tính 94 5 1 Giai đoạn biến tính Giai đoạn bắt cặp Giai đoạn tổng hợp 94 50 72 1 1 1 30 Giai đoạn kéo dài 72 7 1 Giữ ở 4 0 C 2.5.4 Phương pháp xác định độ đặc hiệu của phản ứng PCR Độ đặc hiệu của phản ứng PCR được xác định bằng cách kiểm tra với 10 chủng VTEC đối chứng dương và 10 chủng đối chứng âm với các thông tin về đặc tính của một số yếu tố gây bệnh đã được công bố. 2.5.5 Phương pháp xác định độ nhạy của phản ứng PCR Dùng phản ứng PCR để xác định VTEC trong môi trường nhân tạo, trong các mẫu thịt sạch 2.5.6 Phương pháp phân lập và giám định vi khuẩn VTEC Tiến hành phân lập và giám định vi khuẩn VTEC theo quy trình tham khảo của FDA (US Food and Drug Administration) và Phòng Thí nghiệm tham chiếu vi khuẩn E. coli của OIE, Canada (Universite ’ de Montre ’ al, Canada). 2.5.7 Phương pháp xác định serotyp kháng nguyên O của các chủng vi khuẩn phân lập được Phương pháp xác định serotyp kháng nguyên O của vi khuẩn E. coli bằng phương pháp ngưng kết nhanh trên phiến kính. Các chủng vi khuẩn được tiến hành xác định nhóm với huyết thanh đa giá trước, sau đó đến các huyết thanh đơn giá trong nhóm 2.5.8 Xác định sự đa dạng di truyền của các chủng VTEC có nguồn gốc khác nhau bằng phản ứng PFGE ( Pulsed-field gel electrophoresis) Sự tương đồng hệ gen của một số chủng vi khuẩn E. coli phân lập được xác định bằng phương pháp PFGE tại phòng thí nghiệm Vi khuẩn, Viện vệ sinh dịch tễ Trung ương. Quy trình chuẩn bị mẫu DNA và thực hiện phản ứng dựa theo Helgerson và cs. (2006) [39]. 2.5.9 Xử lý số liệu Số liệu thu thập được xử lý bằng phần mềm MS Excel 2003 để tính. Sự sai khác giữa các giá trị được xem là có ý nghĩa thống kê khi P < 0,05. [...]... hình an toàn thực phẩn, chúng tôi tiến hành lấy mẫu phân tại các điểm giết mổ, mẫu thịt tại các điểm giết mổ và chợ trên địa bàn Hà Nội để kiểm tra Chúng tôi đã tiến hành nghiên cứu với một số mẫu mẫu phân và mẫu lau thân thịt thu thập từ lò mổ, được trình bày bảng 3.10 Bảng 3.10: Tổng hợp số l ợng và chủng loại m u thu thập đ ợc tại một số điểm giết mổ trên địa bàn Hà Nội TT Địa điểm Trung Văn Minh Hiền... và mẫu phân bò, lợn đã phân lập được 22 mẫu dương tính với VTEC, chiếm tỷ lệ 12,9% Có nhiều nghiên cứu về VTEC ở động vật đã được tiến hành Cray và cs (1996) [26] đưa ra tỷ lệ 5,9% của 1.305 chủng E coli phân lập được từ phân của bò là VTEC Ở Đức, Beutin và cs (1993) [18] đã phân lập được VTEC từ trâu bò là 21,1%, ở lợn là 7,5% Ở Canada, VTEC thường phân lập được ở bê là 24,7%, ở bò sữa trưởng thành... siêu thị Tổng Số l ợng m u ban đầu Lợn Bò 30 60 35 45 60 55 125 160 Số l ợng chủng E coli phân lập đ ợc Lợn Bò 60 120 70 90 120 110 250 320 Tổng số chủng 180 160 230 570 Năm 2004, các nhà nghiên cứu Vi t – Úc đã tiến hành nghiên cứu tần số hiện diện của E .coli trong thực phẩm (Thi Thu Thao Van, 2007) [89] Trong nghiên cứu này 180 mẫu thịt bò, thịt lợn, thịt gà, hải sản được lấy từ các chợ ở Thành phố Hồ... quả phân tích t ơng đồng hệ gen của một số chủng vi khuẩn VTEC phân lập đ ợc có nguồn gốc khác nhau Sự tương đồng hệ gen của một số chủng vi khuẩn VTEC phân lập được và có nguồn gốc khác nhau được xác định bằng phương pháp PFGE (Tenover và cs 1995 [92], Hopkins và cs 2000 [40]) Hệ gen của vi khuẩn E coli được phân cắt bằng enzyme XbaI và được điện di trên hệ thống CHEF-DR II (Bio-Rad) Trong nghiên cứu. .. từng khuẩn lạc Xác định serotyp 17 Sau khi tiến hành thiết lập và chuẩn hóa phương pháp PCR, chúng tôi đã xây dựng được một quy trình nhằm xác định sự có mặt của vi khuẩn VTEC trong các mẫu thịt 3.3 Xác định tỷ lệ nhiểm VTEC của bò, lợn tại điểm giết mổ và chợ trên địa bàn Hà Nội 3.3.1 Thu thập mẫu Từ thực trạng công tác kiểm soát giết mổ, vệ sinh thú y tại các cơ sở giết mổ và chợ trên địa bàn Hà Nội. .. lợn Thịt bò Tổng Số m u xét nghiệm 60 55 115 Số chủng E .coli 120 110 230 Số m u d ơng tính 24 13 37 Tỷ lệ % 40,0 23,6 32,2 Kết quả bảng 3.14 cho thấy, số mẫu thịt lợn phân lập được VTEC là 24 mẫu, chiếm tỷ lệ 40,0% Số mẫu thịt bò phân lập được VTEC là 13 mẫu, chiếm tỷ lệ 23,6% Tổng số mẫu dương tính phân lập được trên 115 mẫu thịt lợn và bò là 37 mẫu, đạt tỷ lệ 32,2% Như vậy, khi tiến hành nghiên cứu. .. thịt, hải sản chứa E coli, nhưng chưa xác định được cụ thể là loại E coli nào Như vậy, kết quả phân lập các chủng E coli từ mẫu phân, mẫu lau thân thịt, mẫu thịt tại các điểm giết mổ và chợ của chúng tôi hoàn toàn phù hợp Kết quả giám định các đặc tính sinh vật hóa học của các chủng này được trình bày ở bảng 3.13 Bảng 3.13 Kết quả kiểm tra các đặc tính của vi khuẩn E coli phân lập đ ợc TT Loại phản... phân tại lò mổ Bảng 3.15 Tỷ lệ phân lập vi khuẩn VTEC từ m u lau thân thịt và m u phân Loại m u Lau thân thịt Mẫu phân Tổng Số m u xét nghiệm 80 90 170 Số chủng E .coli 160 180 340 Số m u ơng tính 9 13 22 Tỷ lệ % 11,3 14,5 12,9 Từ mẫu lau thân thịt phân lập được 9 mẫu dương tính với VTEC của 160 chủng, chiếm tỷ lệ 11,3%; 13 mẫu dương tính của 180 chủng, chiếm tỷ lệ 14,5% từ mẫu phân Như vậy, từ 170 mẫu... lệ dương tính với vi khuẩn VTEC là 11,3%, với mẫu phân tỷ lệ dương tính là 14,5% 5 Trong 67 chủng VTEC phân lập được, đa số đều chỉ có gen VT1 (từ 75 100%), một số ít chủng chỉ có gen VT2 (từ 0 - 18,8%), có 3 chủng phân lập được có cả hai gen độc tố VT1 và VT2 (từ 0 - 7,7%) Đặc biệt, không chủng nào trong số các chủng VTEC phân lập được có gen eae 6 Kết quả xác định serotyp kháng nguyên O của 67 chủng... cứu và so sánh đặc tính của các chủng O157 phân lập được từ Achentina, Úc và New Zealand bằng phương pháp PFGE Kết quả cho thấy kiểu PFGE có 46 mẫu PFGE đã được quan sát thấy khi sử dụng enzym XbaI để phân cắt, trong đó có 37 chủng được chia thành 10 nhóm khác nhau Xia và cs (2010) [85] trong một nghiên cứu với các chủng VTEC phân lập được từ thịt được bán lẻ tại Mỹ cũng đã công bố kết quả phân biệt . tiến hành đề tài: " ;Nghiên cứu một số đặc tính của vi khuẩn Escherichia coli (nhóm VTEC) phân lập từ bò, lợn được giết mổ tại Hà Nội ” 2   - Xác định đặc tính của vi. Nam nghiên cứu đặc tính của vi khuẩn nhóm VTEC phân lập từ bò, lợn tại cơ sở giết mổ và một số sản phẩm thịt bò, lợn bày bán trên một số chợ tại địa bàn Hà Nội. - Thiết lập thành công phương. án là công trình nghiên cứu có hệ thống về vi khuẩn E. coli nhóm VTEC phân lập từ bò, lợn được giết mổ tại Hà Nội. - Kết quả nghiên cứu của đề tài giúp chúng ta xác định và hiểu được một số