Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng tới kết quả gây động dục đồng pha trong công nghệ cấy truyền phôi bò tại việt nam

Thạc sĩ, tiến sĩ, cao học, luận văn, khóa luận

Bộ giáo dục và đào tạo trường đại học nông nghiệp I

-

quản xuân hữu

nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng tới kết quả gây động dục đồng pha trong công nghệ

cấy truyền phôi bò tại việt nam Luận văn thạc sĩ nông nghiệp

Chuyên ngành: thú y Mã số: 60.62.50

Người hướng dẫn khoa học: TS bùi xuân nguyên PGS.TS Trần tiến dũng

Hà Nội - 2006

Lêi cam ®oan

T«i xin cam ®oan r»ng sè liÖu vµ kÕt qu¶ nghiªn cøu ®−îc tr×nh bµy trong luËn v¨n nµy lµ hoµn toµn trung thùc vµ ch−a hÒ ®−îc b¶o vÖ bÊt kú mét häc vÞ nµo

T¸c gi¶ luËn v¨n

Qu¶n Xu©n H÷u

Lời cảm ơn

Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám hiệu, Ban Chủ nhiệm khoa Sau

Đại học, Ban Chủ nhiệm khoa Chăn nuôi thú y – Trường Đại học, Bộ môn Ngoại–Sản-Trường Đại học Nông nghiệp I Hà Nội đ@ tạo mọi điều kiện thuận lợi giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập và hoàn thành luận văn này

Tôi xin bày tỏ lòng cảm ơn chân thành tới tập thể thày cô giáo, cán bộ công nhân viên Trong khoa chăn nuôi thú y, Trường Đại học Nông nghiệp I

Hà Nội, các cô chú, anh chị em đồng nghiệp công tác tại Phòng Công nghệ Phôi, Viện Công nghệ sinh học, các đồng nghiệp thuộc trung tâm khuyến nông Bắc Ninh, Hưng Yên, Vĩnh Phúc, Viện Sinh học nhiệt đới đ@ giúp đỡ tôi trong quá trình hoàn thành luận văn này

Đặc biệt, tôi xin chân thành cảm ơn Tiến sĩ Bùi Xuân Nguyên, trưởng phòng Công nghệ Phôi – Viện Công nghệ Sinh học và PGS.TS Trần Tiến Dũng, cán bộ giảng dạy- Bộ môn Ngoại sản – Bệnh viện thú y – Khoa chăn nuoi thú y – Trường Đại học Nông nghiệp I Hà nội, là những người đ@ tận tình, trực tiếp tạo mọi điều kiện thuận lợi nhất cho tôi trong quá trình hoàn thành luận văn này

Nhân dịp này, cho tôi được bày tỏ lòng biết ơn sâu săc tới gia đình đ@ tận tình giúp đỡ tôi trong suốt quá trình học tập và hoàn thành luận văn này

Hà Nội, tháng 9 năm 2006

Quản Xuân Hữu

mục lục

2.2 Tương quan giữa chu kỳ động dục và sự phát triển của trứng 162.3 Các hormone tham gia điều tiết quá trình sinh sản ở bò cái 21

2.5 Điều khiển nhân tạo quá trình động dục và rụng trứng 28

3.5 Phương pháp theo dõi động dục và đánh giá chất lượng động dục 37

3.6.1 Phân lô thí nghiệm 39 3.6.2 Các yếu tố ảnh hưởng tới kết quả gây động dục 40

4.1.1 Kết quả gây động dục đồng pha bằng công thức 1 (PGF2α –

4.2.2 Kết quả gây động dục đồng pha trong vụ Đông - Xuân bằng công

Danh môc c¸c tõ vµ côm tõ viÕt t¾t

1 CIDR Controlled Internal Drug Released

13 PRID Progesterone Releasing Intravaginal Device

Danh mục bảng biểu

Bảng 4.1 Kết quả gây động dục bằng công thức 1 (PGF2α – PMSG –

PGF2α) và công thức 2 (SMB – PMSG - PGF2α) trong vụ

Bảng 4.2 Tỷ lệ bò xuất hiện động dục trong các khoảng thời gian khác

nhau khi gây động dục bằng công thức 1 (PGF2α – PMSG – PGF2α) và công thức 2 (SMB – PMSG - PGF2α) trong vụ

Bảng 4.3 Biểu hiện động dục, rụng trứng ở bò đ−ợc gây động dục trong

vụ Hè-Thu bằng công thức 1 (PGF2α – PMSG – PGF2α) và

Bảng 4.4 Tỷ lệ động dục và rụng trứng gây động dục đồng pha bằng

công thức 3 (GnRH-SMB-PGF2α-GnRH) trong vụ Hè-Thu 49 Bảng 4.5 Thời gian xuất hiện động dục của bò gây động dục bằng công

thức 3 (GnRH-SMB-PGF2α-GnRH) trong vụ Hè-Thu 50 Bảng 4.6 Kết quả gây động dục đồng pha bằng công thức 1 (PGF2α -

Bảng 4.7 Thời gian xuất hiện động dục của bò gây động dục đồng pha

bằng công thức 1 (PGF2α - PMSG - PGF2α) trong vụ Đông -

Bảng 4.8 Kết quả gây động dục đồng pha bằng công thức 5 (PMSG –

Bảng 4.9 Tỷ lệ bò xuất hiện động dục trong các khoảng thời gian khác

nhau bằng công thức 5 (PMSG – PGF2α) trong vụ Đông -

Bảng 4.10 Biểu hiện động dục của bò đ−ợc gây động dục trong vụ

Bảng 4.11 Kết quả động dục và rụng trứng khi sử dụng công thức 4

Bảng 4.12 Thời gian xuất hiện động dục của bò gây động dục bằng công

thức 4 (GnRH - PGF2α – hCG) trong vụ Đông Xuân 65 Bảng 4.13 Một số kết quả cấy truyền phôi bò thụ tinh ống nghiệm 67 Bảng 4.14 Tỷ lệ bò đẻ sinh đôi từ cấy 2 phôi vào một bò mẹ nhận 67

Danh mục sơ đồ và biểu đồ

Sơ đồ 1: Điều khiển hoạt động nội tiết của vùng dưới đồi 25

Biểu đồ 1 Kết quả gây động dục bằng công thức 1 (PGF2α – PMSG –

PGF2α) và công thức 2 (SMB – PMSG - PGF2α) trong vụ Hè –

Biểu đồ 2 Tỷ lệ bò xuất hiện động dục trong các khoảng thời gian khác

nhau khi gây động dục đồng pha bằng công thức 1 (PGF2α –

PMSG – PGF2α) và công thức 2 (SMB – PMSG - PGF2α) trong

Biểu đồ 4 Tỷ lệ bò xuất hiện động dục trong các khoảng thời gian khác

nhau khi gây động dục trong vụ Hè-Thu bằng công thức 3

Biểu đồ 5 Kết quả gây động dục bằng công thức 1

Biểu đồ 6 Thời gian xuất hiện động dục của bò tiêm công thức 1

Biểu đồ 7 Tỷ lệ xuất hiện động dục trong các khoảng thời gian khác

nhau của bò gây động dục bằng công thức 5 (PMSG – PGF2α)

Biểu đồ 8 Kết quả gây động dục cho bò trong vụ Đông-Xuân bằng công

I Mở đầu

Công nghệ cấy truyền phôi trên thế giới đ@ được bắt đầu lần đầu tiên vào năm 1890 bởi thí nghiệm của Walter Heape trên đối tượng là thỏ, thí nghiệm này đ@ chứng minh được rằng phôi của một cá thể cái này có thể phát triển trong tử cung của một cá thể cái khác mà vẫn giữ được nguyên vẹn tính

Những kết quả nghiên cứu gần đây còn mở ra một hướng ứng dụng mới rất quan trọng của công nghệ phôi, đó là ứng dụng công nghệ phôi vào bảo tồn

đa dạng sinh học với việc tạo thành công phôi nhân bản bằng cách cấy tế bào sinh dưỡng của các loài động vật đặc hữu, có nguy cơ tuyệt chủng cao tại Việt Nam vào trứng của động vật cùng loài hay khác loài (Bùi Xuân Nguyên vcs,

1999 [27]; Lê Văn Ty vcs, 2003 [38]; Nguyễn Văn Hạnh vcs, 2005 [59]), tiến tới cấy thử nghiệm các phôi này vào mẹ nhận gần loài hay khác loài

Tại Việt Nam, công nghệ cấy truyền phôi đ@ được nhóm tác giả Bùi Xuân Nguyên và cộng sự tại Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam bắt đầu nghiên cứu từ năm 1978 với sự thành công là thỏ cấy truyền phôi đầu tiên tại Việt Nam đ@ ra đời Trên đối tượng bò, Cũng chính nhóm nghiên cứu này đ@

đạt được những thành công đầu tiên tại Việt Nam với sự ra đời của bê sữa do cấy phôi tươi (1986), bê Charolaise do cấy phôi đông lạnh vào bò nhận là bò

Hà ấn (1987), Bê sữa Holstein thuần ra đời từ cấy phôi đông lạnh vào bò LaiSind (1999) Sau thành công đầu tiên này, các nghiên cứu về Công nghệ Phôi đ@ được tập thể các nhà khoa học trong nước tập trung nghiên cứu và phát triển Tại Viện Khoa học và Công nghệ Việt Nam nhóm nghiên cứu do tiến sỹ Bùi Xuân Nguyên đứng đầu đ@ đạt được nhiều kết quả trong việc tạo phôi trâu và phôi bò bằng phương pháp thụ tinh ống nghiệm và tạo ngân hàng phôi đông lạnh (Bùi Xuân Nguyên vcs, 1994 [24]; (1996) [60]; (1999) [26] ; Nguyễn Thị Ước vcs, 1999 [40]; Lê Văn Ty vcs, 1998 [35]), đặc biệt là các nghiên cứu thành công trong việc xác định giới tính phôi bò bằng kỹ thuật PCR (Bùi Linh Chi vcs, 1999 [1]; Nguyễn Thị Ước vcs, 1999 [7]), nghiên cứu tạo phôi bò bằng kỹ thuật cấy nhân tế bào sinh dưỡng (Bùi Xuân Nguyên vcs,

2000 [25]; Lê Văn Ty vcs, 2003 [36] ), sản xuất phôi bò vàng và bò LaiSind bằng phương pháp thụ tinh ống nghiệm (Nguyễn Hữu Đức vcs, 2003 [46];

2005 [11]), sản xuất bò sữa giống thương phẩm bằng phôi bò thụ tinh ống nghiệm và xác định giới tính (Nguyễn Thị Ước vcs, 2003 [40]) Năm 2002, hai con bê thụ tinh ống nghiệm đầu tiên tại Việt Nam đ@ được sinh ra (Nguyễn Hữu Đức vcs, 2003 [10]) đánh dấu một mốc quan trọng trong Công nghệ cấy truyền phôi bò thụ tinh ống nghiệm tại Việt Nam

Tại Viện Chăn nuôi, Bộ môn cấy truyền phôi cũng đ@ có những nghiên cứu trong việc gây rụng trứng nhiều ở bò (Đỗ Kim Tuyên vcs, 1994 [34]), cấy

chuyển phôi bò (Hoàng Kim Giao vcs, 1994 [12]), thụ tinh ống nghiệm bò (Nguyễn Văn Lý vcs, 2003 [23], 2004 [24]); Đông lạnh phôi bò (Lưu Công Khánh vcs, 2003 [20]; Hoàng Kim Giao, 2004 [16])

Thụ tinh ống nghiệm cho phép có thể tạo ra cùng một lúc hàng loạt phôi với giá thành rẻ, để tận dụng ưu thế này cần phải có một đàn bò động dục tập trung trong một khoảng thời gian đ@ được định trước, hay còn gọi là động dục

đồng pha để làm bò mẹ nhận phôi Vấn đề này chỉ có thể giải quyết được bằng cách gây động dục đồng pha cho bò nhận phôi

Có nhiều phương pháp gây động dục đồng pha khác nhau nhưng phổ biến nhất hiện nay ở Việt Nam vẫn là phương pháp sử dụng kết hợp các loại hormone hướng sinh sản và các chế phẩm chứa các loại hormone này như: PGF2α, SMB, CIDR, PRID, PMSG, hCG để gây động dục cho bò (Nguyễn Thị Ước, 1996 [39]; Lưu Công Khánh, 1996 [19], 2004 [21]; Hoàng Kim Giao vcs, 1996 [13])

GnRH (Gonadotropin Releasing Hormone) là một loại hormone sinh dục có vai trò rất quan trọng trong việc điều khiển hoạt động sinh dục của gia súc Hiện loại kích tố này đ@ được sản xuất dưới dạng tổng hợp với giá thành

rẻ và được sử dụng rộng r@i trên thế giới trong việc điều khiển quá trình sinh sản của gia súc cái cũng như nâng cao khả năng sinh sản (Fabio vcs, 1999 [48], 2001 [49]; H Twagiramungu vcs, 1989 [52]; J R Pursley vcs, 1995 [53]), tuy nhiên loại hormone này hiện vẫn chưa được sử dụng rộng r@i ở Việt Nam để gây động dục đồng pha cho bò mà mới chủ yếu sử dụng để điều trị một số hiện tượng rối loạn sinh sản cho bò cái (Khuất Văn Dũng, 2005 [7]), vì vậy việc nghiên cứu ứng dụng rộng r@i GnRH vào điều khiển sinh sản của gia súc cũng như gây động dục đồng pha cho gia súc cái nói chung và cho bò nói riêng là một điều cần thiết

Kết quả gây động dục đồng pha trên bò cái phụ thuộc vào rất nhiều yếu

tố khác nhau như: giống bò, tuổi bò, mùa vụ trong năm, phương pháp gây

động dục và kích tố sử dụng, dạng bào chế của kích tố, điều kiện quản lý do

đó việc nghiên cứu ảnh hưởng của những yếu tố này tới kết quả gây động dục

đồng pha phục vụ cho việc ứng dụng công nghệ cấy truyền phôi bò vào sản xuất là một việc làm cần thiết

Xuất phát từ thực tế trên, chúng tôi đ@ tiến hành thực hiện đề tài

“Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng tới kết quả gây động dục đồng pha trong công nghệ cấy truyền phôi bò tại Việt Nam”

Đề tài được thực hiện với mục tiêu nghiên cứu ảnh hưởng của mùa vụ gây động dục, ảnh hưởng của giống bò (LaiSind, HF), công thức xử lý hormone, điều kiện chăn nuôi tới kết quả gây động dục đồng pha cho bò

Đề tài sẽ góp phần vào việc hoàn thiện các kỹ thuật gây động dục đồng pha, cập nhật với một số tiến bộ kỹ thuật của thế giới và thích nghi với điều kiện thực tế nền chăn nuôi của Việt Nam Đưa ra được một số khuyến cáo khi gây động dục đồng pha cho bò nhận phôi

II Tổng quan vấn đề nghiên cứu

2.1 Chu kỳ sinh dục của bò cái

Khi cơ quan sinh dục gia súc cái phát triển đến độ hoàn thiện, buồng trứng đ@ có no@n bao chín, có trứng rụng và trứng có khả năng thụ thai, tử cung cũng biến đổi theo và đủ điều kiện cho thai phát triển trong tử cung Những dấu hiệu động dục xuất hiện đối với gia súc cái ở tuổi như vậy thì gia súc cái được coi là thành thục về tính Theo Nguyễn Văn Thưởng, Trần Do@n Hối, 1992 [31]: bò vàng Việt Nam đẻ lứa đầu trong khoảng từ 33 – 48 tháng tuổi Theo Hoàng Kim Giao, Nguyễn Thanh Dương, 1997 [14]: tuổi động dục lần đầu của bò cái từ 12 – 24 tháng, trung bình là 15 tháng

Khi bò cái đ@ thành thục về tính, những biểu hiện tính dục của nó diễn

ra liên tục một cách có chu kỳ kèm theo những biến đổi đặc trưng ở cơ quan sinh dục gọi là chu kỳ tính Thời gian động dục chiếm một khoảng thời gian rất ngắn trong chu kỳ động dục nhưng nó lại rất quan trọng đối với khả năng sinh sản của con vật Chu kỳ động dục trung bình của bò cái là 21 ngày, dao

động 17 - 24 ngày, thời gian động dục 18 - 36 giờ, thời gian chịu đực 12 - 18 giờ và thời gian rụng trứng là 6 - 18 giờ sau khi kết thúc chịu đực [14]

Chu kỳ tính của bò cái có thể chia làm 4 giai đoạn: trước động dục, giai

đoạn động dục, giai đoạn sau động dục và giai đoạn yên tĩnh Với những biểu hiện đặc trưng như sau:

* Giai đoạn trước động dục

Giai đoạn trước động dục là giai đoạn từ khi thể vàng tiêu huỷ cho tới lần động dục tiếp theo Giai đoạn này bao no@n phát triển mạnh, tăng thể tích nổi gồ lên trên bề mặt buồng trứng, các tế bào hạt tăng cường hoạt động tiết oestrogen Oestrogen chứa trong bao no@n và theo máu tác động tới cơ quan sinh dục gây ra nhiều biến đổi đặc trưng như: làm tế bào vách ống dẫn trứng

xung huyết, tăng sinh, tử cung, âm đạo, âm hộ tăng sinh và tiết dịch làm trơn

đường sinh dục, những biến đổi này chuẩn bị điều kiện thuận lợi cho sự đón nhận trứng, thụ tinh và làm tổ của phôi

*Giai đoạn động dục

Giai đoạn động dục là giai đoạn quan trọng nhất trong một chu kỳ động dục nhưng thời gian lại diễn ra rất ngắn so với các giai đoạn khác Trong giai

đoạn động dục bò cái có những biểu hiện nối tiếp nhau như: hưng phấn, chịu

đực và hết chịu đực Trong giai đoạn này lượng oestrogen trong máu đạt mức cao nhất, có thể tới 112 àg% trong khi đó bình thường chỉ là 64 àg% [5] Chính hàm lượng oestrogen cao này kích thích n@o bộ gây nên phản ứng hưng phấn toàn thân khi bò cái động dục Biểu hiện của con cái lúc này là: ít ăn hoặc bỏ ăn, bồn chồn không yên, thích gần gũi ngửi và nhảy lên lưng con khác nhưng không cho con khác nhảy lên Lúc này cơ quan sinh dục xung huyết, âm hộ bóng nhẫy, niêm mạc âm đạo đỏ hồng, càng tới gần thời điểm chịu đực và rụng trứng niêm mạc càng sậm màu có nhiều dịch trong, lo@ng chảy ra khi con vật nhảy lên lưng con khác Càng tới gần thời điểm chịu đực niêm dịch càng đặc lại, Tới thời diểm chịu đực, con vật đứng yên cho con khác nhảy lên mình nó, đuôi vắt sang một bên

*Giai đoạn sau động dục

Giai đoạn sau động dục Là giai đoạn từ sau khi kết thúc động dục và kéo dài vài ngày Thể vàng hình thành tiết progesterone ức chế trung khu sinh dục ở vùng dưới đồi, từ đó ức chế tuyến yên sản sinh FSH và LH làm ngừng sự phát triển của no@n nang, giảm tiết oestrogen do đó làm giảm hưng phấn thần kinh, đồng thời progesterone còn có tác dụng kích thích niêm mạc tử cung tăng sinh để chuẩn bị cho sự làm tổ của phôi, ức chế sự mẫn cảm của tử cung

đối với oxytoxin, oestrogen, do đó có tác dụng an thai

Biều hiện của con vật lúc này là yên tĩnh, không thích gần gũi con đực, không cho con khác nhảy lên mình nó, các hành vi dần dần trở lại bình thường

* Giai đoạn yên tĩnh: là giai đoạn dài nhất trong một chu kỳ động dục, kéo dài từ ngày thứ tư sau khi động dục cho tới khi thể vàng tiêu huỷ nếu trứng không được thụ tinh

2.2 Tương quan giữa chu kỳ động dục và sự phát triển của trứng

Những biểu hiện về chu kỳ tính của bò thể hiện ra bên ngoài có liên quan chặt chẽ với sự phát triển của tế bào trứng trên buồng trứng dưới sự điều khiển chặt chẽ của hai cơ chế: thần kinh và thể dịch

Buồng trứng của bò gồm một đôi treo ở cạnh trước dây chằng rộng, nằm trong xoang chậu và gần mút sừng tử cung, thường buồng trứng bò có hình ovan dẹt Khi mới sinh buồng trứng có khối lượng khoảng 0,3gr, kích thước dài 1-2cm, rộng 1-1,5cm [1] Khi bò trưởng thành mỗi buồng trứng nặng 10 - 20gr và quần thể nang có khoảng 70000 [6] Buồng trứng vừa có chức năng sản xuất ra trứng, vừa có chức năng nội tiết

Cấu tạo bên ngoài buồng trứng là một lớp màng liên kết sợi, bên trong chia hai miền là miền vỏ và miền tuỷ, được cấu tạo bởi lớp mô liên kết sợi xốp Miền tủy có tổ chức mạch máu dày đặc hơn và tổ chức mô xốp cũng dày hơn so với miền vỏ Miền vỏ của buồng trứng chứa các no@n bào nguyên thuỷ, hay còn gọi là no@n nguyên bào Tác giả Lê Văn Ty, 1995 [36] nghiên cứu biến động quần thể nang bào buồng trứng bò cho biết: thời điểm bắt đầu và kết thúc quá trình hình thành quần thể nang bào nguyên thuỷ ở bò xảy ra không đồng nhất ở các cá thể, bắt đầu sớm nhất vào tháng thứ 4, muộn nhất vào tháng thứ 6 và kết thúc sớm nhất vào tháng thứ 4, muộn nhất vào tháng thứ 7 Số lượng nang bào nguyên thuỷ ở một buồng trứng có thể dao động từ 91.000 đến 440.000, sau đó quần thể nang có xu hướng giảm dần tới giai đoạn cuối của quá trình phát triển bào thai Trong giai đoạn bê 4 - 9 tháng tuổi giảm rõ rệt so với giai đoạn phôi thai Quá trình phát triển của trứng trải qua 3 giai đoạn:

- Giai đoạn tăng số lượng no@n nguyên bào: giai đoạn này no@n nguyên bào nguyên phân liên tiếp nhiều lần làm tăng số lượng no@n bào Do cơ chế

nguyên phân nên các no@n bào được hình thành đều có bộ NST lượng bội 2n

và đều được bao bọc bởi lớp tế bào biểu mô Giai đoạn này diễn ra trong thời

kỳ phát triển sớm của các thể, khi con cái chưa thành thục về tính Tới khi con cái đ@ thành thục về tính thì các no@n nguyên bào sẽ tuần tự tiếp tục phát triển

để thành trứng chín theo hai giai đoạn tiếp như sau:

- Giai đoạn sinh trưởng: no@n nguyên bào tích lũy chất dinh dưỡng, tăng kích thước, khối lượng và hình thành các no@n bào sơ cấp hay no@n bào cấp I

+ Lần phân bào thứ 2: no@n bào cấp 2 phân chia hình thành tế bào trứng lớn và cực cầu thứ 2 bé Trong lúc đó cực cầu thứ nhất phân chia thành hai cực cầu bé Kết quả giảm phân từ 1 no@n bào cấp 1 cho 1 trứng lớn và 3 cực cầu

bé Trứng và cực cầu đều chứa n nhiễm sắc thể, là bộ nhiễm sắc thể đơn bội của loài Trứng có khối lượng và kích thước lớn vì nó nhận toàn bộ no@n hoàng từ no@n bào cấp 1, điều đó có ý nghĩa đối với sự phát triển của hợp tử Kết thúc quá trình giảm phân trứng chín

Trứng là một loại tế bào lớn, chỉ mang n nhiễm sắc thể Tế bào trứng bò

có kích thước 0,135 – 0,400mm, ở lợn là 0,12 – 0,14mm [5] Từ bên ngoài vào bên trong tế bào trứng có cấu tạo như sau:

Trong một chu kỳ động dục của bò, không phải chỉ có một nang phát triển từ no@n bào thứ cấp thành trứng chín mà có sự phát triển đồng loạt của nhiều nang cùng một lúc gọi là sóng nang (Follicle wave), đồng thời trong một chu kỳ động dục của bò cái có nhiều sóng nang khác nhau, chỉ trong sóng nang cuối cùng và thường chỉ có một no@n bào phát triển đến mức cuối cùng

để phát triển thành trứng chín và rụng trứng

Thông thường trong một chu kỳ tính của bò cái có 2 – 3 đợt sóng nang, một số ít có tới 4 đợt sóng nang trong một chu kỳ tính Đợt sóng nang thứ nhất bắt đầu từ khi trứng rụng, vào ngày thứ 3 – 9 của chu kỳ, đợt thứ 2 vào ngày

11 – 17 và đợt thứ 3 vào ngày 18 – 20 Trong mỗi đợt sóng nang, buồng trứng

có thể huy động tới 15 nang kích thước từ 5 – 7mm cùng phát triển Kích thước của nang khống chế ở các đợt sóng 1, 2, 3 có thể đạt tới 12mm, và các

đỉnh kích thước nang tương ứng quan sát được vào ngày 6, 13, 21 của chu kỳ (Dalin 1987, Monget 1993, trích Nguyễn Thị Ước, 1996 [36])

Một đặc điểm quan trọng trong các đợt phát triển sóng nang này là sự phát triển có tính tự điều khiển và cạnh tranh giữa các nang cùng phát triển trong một sóng nang Mỗi đợt sóng nang sẽ có một nang phát triển mạnh nhất

và sự phát triển của nó kìm h@m sự phát triển và làm thoái hóa các nang khác trong cùng một sóng nang Tuy nhiên khi thể vàng còn tồn tại trên buồng trứng, tương ứng với giai đoạn yên tĩnh trong chu kỳ động dục của bò cái, thì

sự phát triển của nang khống chế cũng không đi đến thành thục và rụng trứng

mà nang này sẽ bị thoái hoá

Trong giai đoạn trước động dục của gia súc, được tính từ khi thể vàng tiêu biến (vào khoảng ngày thứ 17-18 của chu kỳ tính), trên buồng trứng tiếp tục xuất hiện một sóng nang mới, nang khống chế trong đợt sóng nang cuối cùng này mới phát triển tới mức thành thục và sự rụng trứng mới xảy ra Trong giai đọan này nang khống chế có khả năng phát triển rất nhanh, tốc độ phát triển của nang ở thời kỳ này có thể đạt 1,6mm/ngày [5] và đạt tới mức thành thục

Sự hiểu biết về sóng nang là một trong những điểm quan trọng trong kỹ thuật siêu bài no@n, gây động dục đồng loạt hoặc sử dụng siêu âm để thu trứng non từ buồng trứng (OPU: Ovum Pick Up)

Trong sóng nang cuối cùng, khi không có sự ức chế ngược của progesterone do thể vàng tiết ra, vùng dưới đồi tiết GnRH kích thích tuyến yên tăng cường tổng hợp và thải tiết FSH và LH Dưới tác dụng của hormone FSH

được tiết ra từ tuyến yên làm tế bào hạt xung quanh bao no@n phân chia mạnh, làm khối lượng bao no@n tăng lên, đồng thời với sự kết hợp của LH kích thích

tế bào hạt tiết ra oestrogen và dịch nang chứa trong nang Lượng dịch nhiều làm thể tích bao no@n tăng và nổi gồ lên trên bề mặt buồng trứng, bao no@n của bò ở giai đoạn trứng chín có đường kính cỡ 1,5cm [5], [6], các kỹ thuật viên giàu kinh nghiệm có thể dễ dàng phát hiện ra sự tồn tại của bao no@n trong giai đoạn động dục của bò

Sự tăng tiết LH của tuyến yên có tác dụng hoạt hóa enzim phân giải protein, làm phân giải vách no@n bao, do đó vách no@n bao dễ dàng bị vỡ ra, chứng chín rơi khỏi bề mặt buồng trứng gọi là rụng trứng

Biểu hiện bên ngoài của gia súc lúc này là hưng phấn và chịu đực, ống sinh dục tiết dịch, bên trong loa kèn và ống dẫn trứng cũng xung huyết, tiết dịch, loa kèn ôm lấy buồng trứng và nhu động tạo ra áp lực hút trứng vào trong khi trứng rụng Trứng sẽ di chuyển trong loa kèn di chuyển dần về 1/3 phía trên của ống dẫn trứng, vừa di chuyển trứng vừa tiếp tục quá trình thành thục và tiết ra ferilizin, một chất có hoạt tính hấp dẫn tinh trùng 1/3 ống dẫn trứng phía trên là điểm diễn ra quá trình thụ tinh ở bò nếu trứng đi quá 1/3 ống dẫn trứng phía trên mà chưa được thụ tinh, nó sẽ tiếp tục di chuyển xuống phía dưới và bị bao bọc bởi một lớp màng protid của ống dẫn trứng, lớp màng này cản trở quá trình xâm nhập của tinh trùng vào trứng

Ngoài tác dụng của hormone, sự rụng trứng còn phụ thuộc vào nhiều yếu tố khác nhau như: khẩu phần dinh dưỡng, động tác giao phối

Sau khi thụ tinh, hợp tử bắt đầu phân chia thành 2, 4, 8, 32 tế bào và di chuyển dần xuống sừng tử cung Sau 4 -5 Ngày phôi xuống đến sừng tử cung,

đến ngày thứ 6-7 sau khi thụ tinh phôi đ@ phát triển đến giai đoạn phôi dâu, phôi nang, di chuyển đến 1/3 đầu trên sừng tử cung, tại nơi tiếp xúc giữa phôi

và sừng tử cung, niêm mạc sừng tử cung có sự biến đổi phù hợp để tạo điều kiện thuận lợi nhất cho sự dinh dưỡng và làm tổ của phôi,dinh dưỡng của phôi lúc này dựa vào no@n hoàng của trứng và dịch tử cung, còn được gọi là sữa tử cung, dịch này được tử cung tiết ra do tác động của oestrogen và progesterone vào tử cung Do vậy sự “đồng pha” sinh lý giữa tuổi phôi và trạng thái tử cung của mẹ nhận phôi là rất quan trọng trong sự thành công của một ca cấy chuyển, Nếu không có sự đồng pha này, phôi sẽ không có được môi trường dinh dưỡng thận lợi trong tử cung mẹ nhận và sẽ bị đào thải Đồng thời trong việc cấy truyền phôi 6-7 ngày tuổi (bằng phương pháp phẫu thuật hay không phẫu thuật), vị trí đặt phôi là 1/3 phía trên sừng tử cung, gần ống dẫn trứng

Trong thực tế cấy chuyển phôi, việc “đồng pha” tuyệt đối giữa tuổi phôi

và sinh lý của tử cung con nhận là rất khó đạt được, do vậy trên thực tế người

ta phải chấp nhận một sự lệch pha nhất định Tỷ lệ chửa cao nhất khi độ lệch pha trong phạm vi từ 6 đến 12 giờ (Nguyễn Thị Ước, 1996 [39])

Sau khi no@n nang vỡ thải trứng ra ngoài, tại điểm đó trên buồng trứng

bị lõm lại, một loại tế bào đặc biệt có trong giai đoạn phát triển của nang trứng tập trung lại, phát triển và hình thành nên thể vàng, thể vàng phát triển lớn dần và thông thường có hình dáng và kích thước khá đặc trưng vào ngày thứ 7 sau khi động dục Các kỹ thuật viên giàu kinh nghiệm có thể tìm thấy thể vàng trên buồng trứng thông qua phương pháp khám qua trực tràng từ ngày thứ 5 đến ngày thứ 7 sau khi trứng rụng Thể vàng đóng vai trò một cơ quan nội tiết, nó tiết ra pogesterone kích thích niêm mạc tử cung tăng sinh và giảm co bóp để phù hợp với chức năng nuôi dưỡng bào thai, đồng thời ức chế

sự thải tiết GnRH từ vùng dưới đồi, do đó tuyến yên không thải tiết FSH và

LH từ đó làm ngừng quá trình động dục khi bò cái mang thai Progesterone làm giảm mẫn cảm của tử cung với oestrogen và oxytoxin, qua đó ngăn ngừa hiện tượng xảy thai

Nếu trứng được thụ tinh và bò cái mang thai, thể vàng sẽ tồn tại suốt trong thời gian thai kỳ Nếu trứng không được thụ tinh, thể vàng sẽ dần tiêu biến từ ngày thứ 17 của chu kỳ, hàm lượng progeserone trong máu giảm dần

và không còn đủ khả năng ức chế tuyến yên, FSH và LH lại được tuyến yên thải tiết và một chu kỳ sinh dục mới lại được bắt đầu

Trong trường hợp bệnh lý, gia súc cái không mang thai nhưng thể vàng không tiêu biến và vẫn tiếp tục tiết progesterone, gọi là thể vàng tồn lưu sẽ dẫn tới hiện tượng không động dục trở lại của bò cái sau lần động dục đó

2.3 Các hormone tham gia điều tiết quá trình sinh sản ở bò cái

Các hormone điều khiển quá trình sinh sản có tác dụng trực tiếp điều khiển hoạt động sinh sản của con vật, bao gồm các loại hormone khác nhau

được tiết ra từ: vùng dưới đồi (Hypothalamus), tuyến yên (Hypofiz), và từ cơ quan sinh sản, nhau thai (trong quá trình gia súc mang thai), chúng có tác dụng điều hòa quá trình sinh sản

Hormone vùng dưới đồi: Gonadotropin Releasing Hormone (GnRH), hormone này được tiết ra từ tế bào thần kinh ở vùng dưới đồi Cấu trúc của nó

là một Decapeptid có 10 aminoaxid GnRH thật ra gồm hai loại hormone khác nhau là:

FRH: (Follicle Releasing Hormon): có chức năng kích thích tuyến yên sản xuất FSH

LRH: (Lutein Releasing Hormon), điều khiển sự tổng hợp và thải tiết

LH của tuyến yên

Sau khi được tiết ra chúng sẽ theo mạch máu về tuyến yên để kích thích

sự giải phóng gonadotropin, từ đó thúc đẩy quá trình phát triển, chín và rụng trứng Như vậy vai trò của GnRH trong điều khiển sinh sản ở gia súc cái là vô cùng quan trọng

Ngoài cơ chế tác dụng thuận chiều như đ@ nói ở trên, GnRH còn có vai trò quan trọng trong việc kiểm soát mối tác động ngược dương tính của oestrogen để tăng cường tiết LH và kiểm soát mối tác động ngược âm tính của progesterone để bảo toàn sự tồn tại của thể vàng

Hiện nay GnRH đ@ được tổng hợp với nhiều dẫn xuất khác nhau, tên thương phẩm, liều lượng sử dụng cũng khác nhau và được sử dụng khá rộng r@i trong lĩnh vực sinh sản gia súc ở các nước đang phát triển, tuy nhiên tại Việt Nam sử dụng GnRH còn rất hạn chế mới chỉ có một số công trình nghiên cứu sử dụng GnRH để điều trị bệnh chậm sinh cho bò (Khuất Văn Dũng, 2005 [7]) hoặc gây động dục đồng loạt (Quản Xuân Hữu vcs, 2003) [18])

Hormon từ tuyến yên (gonadotropin) Đây là hormone do tuyến yên tiết ra dưới tác động của GnRH, gonadotropin gồm hai loại: FSH và LH

FSH có tác dụng chủ yếu là kích thích tế bào trứng phát sinh và phát triển

LH có tác dụng tăng cường quá trình phát dục của trứng, làm cho trứng chín và rụng, đồng thời đảm bảo cho sự hình thành của thể vàng

Trong huyết thanh ngựa chửa 60 - 150 ngày tuổi người ta phát hiện có kích tố sinh dục PMSG (Pregnant Mare Serum Gonadotropin), hay còn được gọi là prolan A, nó có hoạt tính tương tự như FSH và LH, nhưng tác động của

nó giống FSH hơn Tỷ lệ thành phần giống FSH so với thành phần có tác dụng giống LH trong PMSG có thể thay đổi ở một mức độ nhất định do đó nếu không chú ý tới chi tiết này trong sản xuất và sử dụng có thể gây khó khăn trong việc điều khiển động dục cho gia súc

Trong nước tiểu phụ nữ có thai người ta cũng phát hiện kích tố gọi là

hCG (Human Chorionic Gonadotropin), còn được gọi là prolan B, chúng có họat tính tương tự như LH

Hiện nay PMSG và hCG được sản xuất và sử dụng rộng r@i trong điều khiển sinh sản gia súc trên thế giới Sản phẩm được sử dụng rộng r@i nhất do h@ng sản xuất thuốc thú y nổi tiếng Intervet của Hà Lan sản xuất Tại Việt Nam, sản phẩm này cũng đ@ được sản xuất và ứng dụng

FSH và LH cũng đ@ được tách chiết tuy nhiên giá thành còn cao do đó không được sử dụng rộng r@i trong thực tế

Hormone từ buồng trứng: gồm có oestrogen và progesterone do thể vàng tiết ra sau khi trứng rụng

Oestrogen: Là kích tố chủ yếu do tế bào của nang trứng tiết ra trong quá trình nang trứng phát triển Oestrogen bao gồm 3 chất là: oestradiol, oestrol và oestrion, trong đó oestradiol có hoạt tính sinh lý mạnh nhất

Tác dụng sinh lý của oestrogen là duy trì đặc điểm sinh dục thứ cấp ở con cái, tác động lên thần kinh trung ương gây ra biểu hiện động dục, tác

động tới vùng dưới đồi và tuyến yên gây ra hiện tượng tăng tiết LH, góp phần vào sự rụng trứng

Dưới tác dụng của oestrogen, các tế bào ống sinh dục tăng sinh, xung huyết, tiết dịch gây ra những biến đổi đặc trưng của cơ quan sinh dục cái khi gia súc cái động dục Đây cũng chính là biểu hiện bên ngoài của sự chuẩn bị ống sinh dục để quá trình thụ tinh và làm tổ của phôi diễn ra thuận lợi trong ống sinh dục Trong giai đoạn cuối của quá trình mang thai, nhau thai tiết ra một lượng nhỏ oestrogen có tác dụng làm tăng mẫn cảm của cơ trơn tử cung

đối với oxytoxin, hỗ trợ cho quá trình xổ thai

Progesterone Đây là loại hormone do thể vàng tiết ra Chúng có tác dụng cùng oestrogen gây tác động lên tử cung, chuẩn bị cho quá trình làm tổ

của phôi Progesterone còn tác động ngược lên vùng dưới đồi và tuyến yên ức chế sự thải tiết GnRH, FSH, LH, do đó ức chế sự phát triển của nang trứng và

ức chế động dục, có tác dụng an thai, giữ thai trong tử cung Nếu trong giai

đoạn chửa đầu mà thể vàng hoạt động không tốt, tiết ra không đủ progesterone, hoặc bằng cách nào đó phá huỷ thể vàng sẽ gây xảy thai

Ngoài nguồn do thể vàng trên buồng trứng tiết ra, progesterone còn được nhau thai tiết ra trong giai đoạn sau của quá trình mang thai Do vậy nếu thể vàng

bị tiêu biến trong giai đoạn này cũng không ảnh hưởng tới việc giữ thai

Prostaglandine: Hormone này lần đầu tiên được Eiber phát hiện có trong tinh dịch người, khi đó người ta cho rằng nó xuất phát từ tuyến tiền liệt ở con đực, do đó được đặt tên là prostaglandine Tuy nhiên sau này người ta phát hiện ra nhiều loại PGF khác nhau nhưng PGF2α là có hoạt tính hướng sinh dục mạnh nhất Đồng thời kết quả nghiên cứu cho thấy PGF2α không chỉ xuất phát từ tuyến tiền liệt mà còn được tiết ra từ tử cung con cái nên thuật ngữ prostaglandine không còn tính chính xác, tuy nhiên do thói quen người ta vẫn gọi nó là prostaglandine

Prostaglandine có bản chất là một lipoid, hoạt tính sinh học chủ yếu của nó là: phá vỡ màng no@n bào gây ra hiện tượng thải trứng, phá vỡ nang nước trên buồng trứng, làm tiêu huỷ thể vàng thông qua việc phong toả các mạch máu tới nuôi thể vàng, tăng cường co bóp cơ trơn đường sinh dục

Từ năm 1966 người ta đ@ tổng hợp được PGF2α, và kích tố này được ứng dụng rộng r@i trong lĩnh vực sinh sản gia súc như điều trị bệnh sinh sản, kết hợp với các chế phẩm hormone khác để gây động dục và thụ tinh đồng loạt cho gia súc (Sato vcs, 2005 [63]; Alinmer vcs, 2005 [43]; Nguyễn Thanh Dương vcs, 1996 [8]) Hiện nay ở Việt Nam có nhiều sản phẩm prostaglandine tổng hợp được lưu hành trên thị trường như: Hanprost (HanVet), Lutalyse

2.4 Cơ chế điều tiết chu kỳ tính ở bò cái

Hoạt động sinh dục của bò cái chịu sự điều khiển chặt trẽ bởi hai cơ

chế: thần kinh và thể dịch Sự điều tiết này có thể biểu diễn qua sơ đồ sau:

(3)

Sơ đồ 1: Điều khiển hoạt động nội tiết của vùng dưới đồi

(1) Sự điều khiển ngược vòng dài (long feedback)

(2) Sự điều khiển ngược vòng ngắn (short feedback)

(3) Sự điều khiển ngược cực ngắn (ultra- short feedback)

Các tác yếu tố ngoại cảnh như: Khí hậu, nhiệt độ, ánh sáng, chế độ

quản lý nuôi dưỡng, feromol của con đực thông qua các giác quan tác động

vào đại n@o, từ đó dẫn truyền hưng phấn thần kinh xuống vùng dưới đồi gây

tiết GnRH, GnRH tác động tới tuyến yên gây tăng tổng hợp và thải tiết

Gonadotropin (FSH và LH), FSH và LH có hai tác dụng sinh lý: thứ nhất, khi

đạt nồng độ cao nó tác động ngược trở lại tuyến yên gây tác động âm tính lên

việc tổng hợp và thải tiết FSH và LH của tuyến yên Tác động thứ 2 của FSH

và LH là thúc đẩy quá trình phát sinh và phát triển của tế bào trứng trên buồng

trứng Nang trứng phát triển, chín đ@ tiết ra oestrogen gây tác động ngược, dài, dương tính (+) lên vùng dưới đồi và tuyến yên gây tăng tiết GnRH và gonadotropin, đây là mối tác động ngược, dài, dương tính (+) làm tăng cường qúa trình tiết LH của tuyến yên., từ đó đến sự rụng trứng và tạo ra thể vàng LRH kích thích thuỳ trước tuyến yên phân tiết LH LH tác động vào buồng trứng duy trì sự tồn tại của thể vàng, kích thích thể vàng phân tiết progesterone

Progesterone có chức năng bảo vệ thai, đồng thời gây ra tác động ngược âm tính (-) lên vùng dưới đồi và tuyến yên ức chế quá trình tiết GnRH, FSH và LH Nếu bò cái không có chửa, prostagladine được tiết ra làm thoái hoá thể vàng và chu kỳ mới lại bắt đầu

Sự hiểu biết ngày nay càng đầy đủ mối tương quan thể vàng- nang, đặc biệt là qua động thái nồng độ các hormone LH, FSH, progesterone, oestrogen, PGF2α và GnRH trong chu kỳ động dục, đ@ được sử dụng làm cơ sở xây dựng các phương pháp điều khiển chính xác quá trình động dục và rụng trứng Phân tích động thái hormone cho thấy các hormone oestrogen, PGF2α giữ vai trò quan trọng trong hoạt động của thể vàng, Trong giai đoạn sau rụng trứng và sau thụ tinh, LH được thải tiết liên tục, tổng hợp PGF2α bị ức chế tối đa và thể vàng được duy trì Nếu sự thụ tinh và thụ thai không được xảy ra, sự tổng hợp progesterone sẽ giảm, các nang mới được huy động và phát triển, sự tổng hợp oestrogen sẽ tăng lên, dẫn tới sự tăng tổng hợp PGF2α và sự tan thể vàng

Các kết quả nghiên cứu trên đây đ@ dẫn tới ý tưởng gây động dục đồng pha theo nguyên tắc điều khiển giai đoạn hoàng thể trong chu kỳ hoặc bằng cách rút ngắn giai đoạn hoàng thể nhờ tác động gây tan thể vàng của PGF2α

và oestrogen hoặc bằng cách kéo dài giai đoạn này nhờ việc kết hợp oestrogen

và progesterone được đưa từ ngoài vào để tạo một giai đoạn hoàng thể giả

Đồng thời sử dụng kết hợp các loại hormone khác như: FSH, PMSG, GnRH

kÝch thÝch sù ph¸t triÓn cña nang trøng Sö dông kÕt hîp víi GnRH, LH, hCG

Thể vàng

Nang Giai đoạn thể vàng Giai đoạn nang

4

Thể vàng nhân tạo Progesteron Estrogen

Sơ đồ 4: Kéo dài chu kỳ 2.5 Điều khiển nhân tạo quá trình động dục và rụng trứng

Với những kết quả về nghiên cứu hoạt động của buồng trứng, sự hiểu biết về vai trò của cac hormone và cơ chế điều khiển chu kỳ động dục, cộng với việc tổng hợp được các hormone sinh dục, việc ứng dụng hormone tác

động vào quá trính sinh sản của gia súc cái nói chung và của bò nói riêng đ@

được rất nhiều các nhà khoa học về sinh sản động vật trên thế giới công bố Các chế phẩm hormone sinh dục như: các chế phẩm chứa progesterone và dẫn xuất của nó, các chế phẩm prostaglandine tổng hợp, FSH, LH, GnRH Các chế phẩm này có thể được sử dụng đơn lẻ nhưng thông thường chúng được phối hợp với nhau để gây động dục đồng loạt cho bò trong giai đoạn sau đẻ, cho bò cái tơ (Lupez 1989 [47]; Mialot vcs, 1999 [54]; Baros vcs, 2000 [45]; Funston vcs, 2002 [50]; Alinmer MA, 2005 [43]) hay tiền xử lý đối với bò gây siêu bài no@n (Sato vcs, 2005 [63])

Trong điều kiện chăn nuôi tiêu chuẩn hoá, quản lý sinh sản tốt, việc gây

động dục đồng loạt cho bò cái có thể chỉ cần sử dụng một liều PGF2α tiêm vào ngày thứ 5 – 14 của chu kỳ động dục có thể gây động dục và dẫn tinh cho

bò cái Một chương trình khác là có thể tiêm hai mũi PGF2α vào bất kì ngày

nào của chu kỳ, cách nhau 11 ngày và cho phối giống đồng loạt vào một thời

điểm định trước hoặc phối giống vào lúc bò có biểu hiện động dục Với việc

sử dụng hai mũi PGF2α cách nhau 11 ngày, tỷ lệ xuất hiện động dục có thể là: ngày 1: 5%, ngày 2: 20%, ngày 3: 45%, ngày 4: 20%, ngày 5: 5% [66]

Funston và cộng sự, 2000 [50] sử dụng Melengestron Axetat (MGA) kết hợp với PGF2α trên bò cái tơ hướng thịt cho kết quả: 4% bò động dục ở ngày thứ nhất sau khi tiêm PG F2α, 37% động dục ở ngày thứ 2 và 23% động dục ở ngày thứ 3 Khi sử dụng công thức trên có bổ xung thêm GnRH cho kết quả: 9% bò động dục ở ngày thứ nhất, 42% bò động dục ở ngày thứ hai và 17,5% bò động dục ở ngày thứ 3

Martinez vcs, 2001 [58] sử dụng công thức GnRH - PGF2α – GnRH và oestradiol – PGF2α – GnRH cho kết quả tỷ lệ thụ thai không khác nhau Khi

bổ xung oestradiol benzoat và progesteron trên nền MGA làm bò xuất hiện

động dục sớm hơn so với bổ xung GnRH trên nền MGA, tuy nhiên tỷ lệ thụ thai ở công thức bổ xung GnRH lại cao hơn

Alinmer 2005 [43] sử dụng phối hợp hai liều oestradiol benzoat với PGF2α gây động dục và thụ tinh cho bò vào thời điểm 12 giờ sau khi xuất hiện động dục, tỷ lệ động dục đạt 70%, phối giống cho những bò này tỷ lệ có thể đạt là 64% bò có chửa ở 28 ngày và 40% có chửa ở ngày thứ 45 sau khi phối giống Với công thức GnRH - PGF2α – GnRH, phối giống cho toàn bộ

số bò được thụ tinh vào một thời điểm định trước, tỷ lệ bò có chửa so với số bò thụ tinh không khác so với tỷ lệ đạt được khi sử dụng công thức phối hợp oestradiol với PGF2α ở cả giai đoạn 28 và 45 ngày sau khi phối giống, tuy nhiên tổng số bò có chửa ở công thức sử dụng GnRH lại cao hơn so với công thức sử dụng oestradiol Kết quả cũng cho thấy tuy tỷ lệ thụ thai không khác nhau ở lần phối giống đầu tiên nhưng từ lần phối giống thứ 2 tới lần thứ 4 tỷ lệ thụ thai ở công thức sử dụng GnRH lại có xu hướng cao hơn so với công thức

sử dụng oestradiol Kết quả động dục và thụ thai cao hơn ở công thức

GnRH+PGF2α+GnRH so với công thức PGF2α+PGF2α cũng được Mialot và

cộng sự , 1999 [47] thông báo

Kết quả thụ thai không khác nhau khi phối hợp giữa hCG hay GnRH

với PGF2 để gây động dục và dẫn tinh đồng loạt cho bò sữa sau khi đẻ trong

cùng một mùa và cùng một khoảng thời gian sau khi đẻ, nhưng khác nhau ở tỷ

lệ thụ thai của các nhóm bò ở các khoảng thời gian sau đẻ Tỷ lệ chửa ở nhóm

bò 90 ngày sau đẻ đạt 40%, tương ứng là 70% ở nhóm bò 130 ngày sau đẻ

(Fabio de Rensis vcs, 2002 [45]) Số lần tiêm GnRH trong một chu kỳ gây

động dục không ảnh hưởng đến tỷ lệ thụ thai khi cho phối giống, nhưng có

ảnh hưởng dương tính lên tỷ lệ động dục ở bò không có chu kỳ và sau đẻ mà

không làm ảnh hưởng tới chức năng của thể vàng Tiêm hai lần GnRH cách

nhau 3 ngày, ngày thứ 7 tiêm PGF2α làm tăng tỷ lệ bò biểu hiện động dục rõ

nhưng không làm tăng tỷ lệ có thai Tỷ lệ động dục, thời gian động dục và tỷ

lệ có thai không khác nhau ở bò có chu kỳ và không có chu kỳ (H Twagiramungu vcs, 1992 [52])

Việc nghiên cứu sử dụng GnRH vào việc xử lý buồng trứng trước khi

gây siêu bài no@n cũng đ@ được chú ý nghiên cứu Sato vcs, 2005 [63] tiêm

GnRH cho bò ở vào ngày thứ 6 của chu kỳ động dục trước khi gây siêu bài

no@n bằng pFSH, với các liều tiêm khác nhau: 100àg, 50 àg và 25 àg cho thấy

cả ba liều GnRH này đều có tác dụng huy động một sóng nang mới trên

buồng trứng Số nang tiền rụng trứng ở bò được tiêm liều 50àg và 100àg GnRH

cao hơn so với số nang tiền rụng trứng ở bò tiêm liều 25àg GnRH, nhưng tỷ lệ

phôi bình thường ở hai nhóm bò này lại không cao hơn so với nhóm bò nhận 25àg

GnRH

Các kết quả nghiên cứu trên đây đ@ chứng tỏ được vai trò, hiệu quả và

khả năng ứng dụng rộng r@i của GnRH trong điều khiển quá trình sinh sản của

bò Do vậy việc tiếp cận và ứng dụng GnRH vào điều khiển sinh sản gia súc

nói chung và gây động dục đồng pha cho bò nhận phôi nói riêng ở Việt Nam

là một điều cần thiết

Tại Việt Nam các nhà khoa học trong nước đ@ có những công trình nghiên cứu tách chiết và sử dụng các hormone hướng sinh dục sử dụng nâng cao khả năng sinh sản và gây động dục đồng pha cho bò

Việc nghiên cứu chiết xuất chế phẩm huyết thanh ngựa chửa (PMSG) đ@

được nghiên cứu tại Việt Nam [26] Lê Xuân Cương và Vũ Sĩ Nhàn, 1997 [4]

đ@ sử dụng huyết thanh ngựa chửa để gây động dục đồng loạt cho bò cái Việc

sử dụng PMSG vào việc nâng cao khả năng sinh sản và điều khiển mùa vụ sinh sản của bò cái nội đ@ được Nguyễn Thạc Hòa 1993 [17] công bố Theo tác giả này: liều 5đvc/kg thể trọng cho kết quả tỷ lệ động dục và đẻ con thấp (tỷ lệ bò động dục phối giống và tỷ lệ đẻ là 16,6% so với tổng số bò được xử

lý gây động dục), trung bình thời gian xuất hiện động dục sau khi tiêm PMSG

là 140,5 ± 21,3 giờ Liều 10 đvc/kg thể trọng cho tỷ lệ động dục và thụ thai lần lượt là 81,1% và 66,6%, thời gian xuất hiện động dục sau khi tiêm rút xuống còn 101,08 ± 26,86 giờ Liều 15đvc/kg thể trọng cho kết quả rụng trứng cao hơn (87,5%) và thời gian xuất hiện động dục được rút ngắn còn 96,24 ± 23,04 giờ, tỷ lệ đẻ đạt 68,7% so với tổng số bò gây động dục Liều 20đvc/kg thể thể trọng là quá cao đối với bò cái nội, tuy tỷ lệ rụng trứng cao (90%) và thời gian xuất hiện động dục được rút ngắn còn 58,75 ± 11,21 giờ, tuy nhiên tỷ lệ bò đẻ so với tổng số bò được xử lý chỉ đạt 40%

Một trong những đặc điểm hạn chế khi sử dụng PMSG là thời gian bán huỷ dài nên khi sử dụng thường gây động dục kéo dài, do đó cần sử dụng kết hợp với Anti-PMSG để điều khiển động dục và siêu bài no@n trong công nghệ cấy truyền hợp tử (Nguyễn Hữu Đức, Lê Văn Ty, 1992 [9])

Sử dụng kết hợp các loại hormone hướng sinh sản như FSH, PMSG, PGF2α, progesterone tự nhiên hay tổng hợp (dạng dịch tiêm, dạng cho ăn, dạng viên cấy tai hay viên đặt âm đạo), oestrogen, LH, hCG, GnRH trong việc

khắc phục tình trạng chậm sinh, vô sinh, nâng cao sức sinh sản của bò cái cũng đ@ được nhiều nhà khoa học trong nước quan tâm nghiên cứu (Nguyễn Xuân Trạch 1996 [29], [30]; Nguyễn Thanh Dương vcs, 1996 [8]; Tăng Xuân Lưu vcs 2001 [22]; Nguyễn Thị Tú, 2001 [35]; Khuất Văn Dũng 2005 [7]), gây động dục đồng lọat và gây động dục đồng pha (Quản Xuân Hữu vcs, 2003 [18] ; Lưu Công Khánh 1996 [19] ; Nguyễn Thị Ước, 1996 [39] ; Hoàng Kim Giao vcs, 1996 [13])

Hoàng Kim Giao vcs, 1996 [13] sử dụng PGF2α gây động dục đồng loạt cho bò cái mà buồng trứng có thể vàng ở giai đoạn 5 – 14 ngày tuổi cho kết quả: với bò LaiSind tỷ lệ động dục đạt 71,43% trong đó có 52% số bò

động dục trong vòng 72 – 96 giờ sau khi tiêm PGF2α, Với bò lai hướng sữa các chỉ tiêu này tương ứng là 78,87% và 80,36%

Tác giả Lưu Công Khánh, 1996 [19] nghiên cứu gây động dục đồng pha bằng PGF2α , progesterone kết hợp với PMSG trên đàn bò nội, LaiSind và bò

HF cho kết quả rất tốt: 71 - 78% bò động dục, thời gian động dục tập trung trong khoảng 48 – 72h là từ 70 – 80%

Tác giả Nguyễn Thị Ước, 1996 [39] gây động dục đồng pha cho bò LaiSind bằng các công thức gây động dục khác nhau cho kết quả : Bổ xung PMSG và PGF2α trên nền SMB cho kết quả tốt nhất, với 100% số bò có biểu hiện động dục, tỷ lệ rụng trứng là 94,7% Sử dụng hai liều PGF2α tiêm cách nhau 11 ngày, hoặc bổ xung PMSG hai ngày trước khi tiêm mũi PGF2α thứ 2, cho kết quả tỷ lệ rụng trứng đều tương đương nhau ở cả hai công thức, lần lượt

đạt 58,8% và 55%

Mục đích việc chuẩn bị cặp cho - nhận là tạo được tối đa bò có biểu hiện động dục đồng pha trong thời gian ngắn nhất, thông qua việc điều chỉnh thời điểm giải phóng chu kỳ động dục trên cơ sở sử dụng đơn lẻ hay phối hợp các loại kích dục tố

Hiệu quả gây động dục ở bò chịu ảnh hưởng của bản thân chế độ hormone được sử dụng, dinh dưỡng và trạng thái buồng trứng của bò trước khi

xử lý Trong điều kiện dinh dưỡng kém, Crestar (một tên thương phẩm khác của SMB) tỏ ra có hiệu lực hơn CIDR-B Điều kiện dinh dưỡng tốt (phản ánh qua thể trạng) làm tăng tỷ lệ động dục và có chửa của bò sau khi xử lý [29]

Trạng thái của no@n bao trước khi xử lý hormone có ảnh hưởng đến kết quả gây động dục No@n bao lớn nhất có kích thước càng lớn thì tỷ lệ thụ thai sau khi xử lý càng thấp (Nguyễn Xuân Trạch, 1996 [29]) Sử dụng kết hợp PMSG với progesterone, tác giả này công bố: một liều 550 UI PMSG tiêm sau khi kết thúc xử lý progesterone cho tỷ lệ rụng trứng ở bò cao hơn liều 450 UI (95,4% với 85,5%, P< 0,05) mặc dù không có sự khác nhau có ý nghĩa giữa 2 liều lượng trên về tỷ lệ thụ thai sau đó Tuy nhiên, giữa liều lượng PMSG và trạng thái chu kỳ tính của bò có tương tác có ý nghĩa lên tỷ lệ thụ thai Liều

450 UI tỏ ra tốt hơn cho bò đ@ có thể vàng, trong khi đó liều 550 UI lại tốt hơn với bò không có thể vàng [29]

Nói chung các công trình nghiên cứu trên đây chưa sử dụng nhiều đến GnRH để gây động dục đồng loạt cho bò mà chỉ mới sử dụng hạn chế trong việc nâng cao khả năng sinh sản của gia súc [7])

III Đối tượng, nội dung

và phương pháp nghiên cứu

3.1 Đối tượng nghiên cứu

Đối tượng nghiên cứu của chúng tôi là đàn bò cái giống LaiSind, bò sữa Holstein Friesian (HF) ở độ tuổi sinh sản từ lứa 2 tới lứa 5, đ@ động dục lại hoặc chưa động dục lại sau khi đẻ, thời gian từ lứa đẻ gần nhất cho tới khi tiến hành thí nghiệm không ít hơn 30 ngày, buồng trứng hoạt động bình thường, không bị thiểu năng, không viêm nhiễm đường sinh dục, có trong lượng cơ thể

từ 230kg trở lên Những bò này được chăn nuôi trong điều kiện tập trung trong trang trại nhỏ, trang trại lớn hay chăn nuôi cá thể trong nông hộ tại các

địa phương: Bắc Ninh, Hưng Yên, Vĩnh Phúc, thành phố Hồ Chí Minh

Trước khi tiến hành gây động dục đồng pha, bò được khám cơ quan sinh sản qua trực tràng để thăm khám về trạng thái buồng trứng thế nào? buồng trứng có thể vàng hay không, thể vàng tốt hay xấu, tử cung, âm đạo có bình thường không? cổ tử cung có biến dạng không? có thể đưa súng cấy phôi qua được không?

3.2 Nội dung nghiên cứu

Nội dung nghiên cứu của đề tài này là: nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng tới kết quả gây động dục đồng pha, bao gồm:

- Mùa vụ gây động dục đồng pha

- Công thức sử dụng hocmone gây động dục đồng pha

- Điều kiện chăn nuôi tập trung hay chăn nuôi cá thể

Những nội dung này được đánh giá thông qua các chỉ tiêu cụ thể trong gây động dục đồng pha như sau:

- Tỷ lệ bò động dục

- Tỷ lệ động dục rõ, tỷ lệ động dục ngầm,

- Tỷ lệ động dục có rụng trứng và động dục không rụng trứng

- Tỷ lệ bò có rụng trứng so với tổng số bò xử lý

- Thời gian xuất hiện động dục

- Biểu hiện động dục

- Mức độ xuất hiện động dục tập trung

3.3 Vật liệu nghiên cứu

3.3.1: Synchro- Mate-B:(SMB)

Intervet, Boxmeer, The Netherlands

Sản phẩm này được bào chế dưới dạng một viên silicon để cấy dưới da, thông thường là cấy dưới da tai Trong viên silicol này có chứa 3mg norgestomet (một dạng progesterone tổng hợp), đi kèm với một ống tiêm chứa 5mg oestradiol valerat

Suprefact iniettabile, Aventis Pharma S.p.A Milano-Italia

3.4 Phương pháp gây động dục đồng pha

3.4.1 Công thức 1

Gây động dục đồng pha bằng tổ hợp PGF2α -PMSG-PGF2α:

Hai mũi PGF2α được tiêm cách nhau 11 ngày, ngày thứ 9 tiêm PMSG

đ−ợc tiêm vào bắp thịt một liều vào thời điểm tháo SMB

Tháo SMB + PGF2α SMB

Thời gian cú thể cấy phụi

3.4.4 Công thức 4

Gây động dục bằng tổ hợp GnRH- PGF2α - hCG:

Ngày thứ nhất tiêm GnRH, ngày thứ 7 tiêm PGF2α, ngày thứ 9 tiêm hCG

GnRH PGF2α hCG Theo dừi ủộng dục

Ngày 0 Ngày 7 Ngày 9 Thời gian cú thể cấy phụi

3.4.5 Công thức 5

Gây động dục đồng pha bằng tổ hợp hormone PMSG- PGF2α

Tiêm một liều PMSG, sau đó 48 giờ tiêm một liều PGF2α

3.5 Phương pháp theo dõi động dục và đánh giá chất lượng động dục

3.5.1 Phương pháp theo dõi động dục

Động dục được quan sát qua các biểu hiện động dục bên ngoài như: sự thay đổi của cơ quan sinh dục ngoài, sự xuất hiện dịch nhày, các biểu hiện sinh lý đặc trưng trong thời gian động dục và bò được khám buồng trứng qua trực tràng theo phương pháp của Kanai vcs 1984 (Kanai Y., Shimizu, 1984 [56]; Unal vcs, 1986 [64]) Các thông số cụ thể gồm:

*Thời điểm xuất hiện động dục: được quy định là thời điểm bò xuất hiện các biểu hiện, các dấu hiệu của sự động dục như: âm hộ xung huyết tiết dịch, bò nhảy lên con khác

*Thời gian xuất hiện động dục: được quy định là thời gian kể từ khi thực hiện biện pháp gây động dục (thời điểm tiêm PGF2α, tháo SMB) đến thời

điểm xuất hiện động dục

* Tỷ lệ động dục: là tỷ lệ phần trăm (%) giữa số bò có biểu hiện động dục bên ngoài so với tổng số bò gây động dục đồng pha

*Tỷ lệ rụng trứng: là tỷ lệ phần trăm (%) giữa tổng số bò có rụng trứng sau khi gây động dục so với tổng số bò gây động dục đồng pha

*Động dục ngầm: động dục ngầm là trường hợp bò không có biểu hiện

động dục bên ngoài nhưng buồng trứng có nang phát triển và rụng trứng Tỷ lệ

động dục ngầm được đánh giá bằng tỷ lệ giữa số bò động dục ngầm so với tổng số bò gây động dục đồng pha

*Động dục giả: động dục giả là trường hợp bò có biểu hiện động dục nhưng không có sự giải phóng trứng Tỷ lệ động dục giả được tính bằng tổng

số bò có biểu hiện động dục so với tổng số bò gây động dục đồng pha

3.5.2 Đánh giá phản ứng cá thể Các chỉ tiêu đánh giá cụ thể là:

* Mức độ biểu hiện động dục: mức độ biểu hiện động dục được phân làm hai lọai: tốt và kém ở mức độ biểu hiện động dục tốt bò có biểu hiện

động dục bên ngoài điển hình, biểu hiện động dục mạnh

Biểu hiện động dục kém: gồm những bò có các biểu hiện động dục không điển hình

*Sự rụng trứng: thể hiện thông qua sự hình thành thể vàng mới trên buồng trứng

*Đánh giá mức độ động dục đồng pha: khái niệm đồng pha trong cấy chuyển phôi được hiểu là sự tương quan giữa tuổi của phôi và trạng thái cơ quan sinh sản nơi phôi sẽ được cấy vào, và biểu hiện bên ngoài qua sự tương quan về thời điểm xuất hiện động dục, chịu đực và kết thúc động dục giữa bò cho phôi và bò nhận phôi

Trong cấy chuyển phôi thụ tinh ống nghiệm, sự đồng pha được hiểu là

sự tương quan giữa trạng thái sinh lý của cơ thể mẹ nhận với tuổi phôi tính từ khi thụ tinh ống nghiệm

Tỷ lệ động dục đồng pha biểu hiện số bò có biểu hiện động dục trong cùng một khoảng thời gian quy ước trước, đó là thời điểm có số bò xuất hiện

động dục nhiều nhất

Lô 8.1: bò LaiSind đ−ợc nuôi tập trung trong trang trại nhỏ tại Miền Bắc, gây

Vụ Hè-Thu ở Miền Bắc kéo dài từ tháng 4 đến hết tháng tháng 8, vụ

Đông-Xuân kéo dài từ tháng 9 đến hết tháng 3 năm sau

Các lô thí nghiệm: lô 1.1, lô 2.1 và lô 3.2 đ−ợc tiến hành trong cùng tháng 5 Thời điểm này ở Miền Bắc thời tiết nắng nóng, còn ở Miền Nam đang