Khảo sát ảnh hưởng của một số chất thuộc nhóm auxin đến khả năng tạo mô sẹo phôi hóa phục vụ chuyển gen của một số giống sắn manihot esculenta crantz

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ HUYỀN Tên đề tài: KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT THUỘC NHÓM AUXIN ĐẾN KHẢ NĂNG TẠO MƠ SẸO PHƠI HĨA PHỤC VỤ CHUYỂN GEN CỦA MỘT SỐ GIỐNG SẮN (Manihot esculenta Crantz) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành : Công nghệ sinh học Lớp : K42 CNSH Khoa : CNSH - CNTP Khoá học : 2010 – 2014 Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Anh Vũ Viện Di truyền Nông nghiệp Việt Nam Th.S Lương Thị Thu Hường Khoa CNSH – CNTP, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Thái Nguyên, năm 2014 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM NGUYỄN THỊ HUYỀN Tên đề tài: KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT THUỘC NHĨM AUXIN ĐẾN KHẢ NĂNG TẠO MƠ SẸO PHƠI HÓA PHỤC VỤ CHUYỂN GEN CỦA MỘT SỐ GIỐNG SẮN (Manihot esculenta Crantz) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo : Chính quy Chun ngành : Cơng nghệ sinh học Lớp : K42 CNSH Khoa : CNSH - CNTP Khoá học : 2010 – 2014 Giảng viên hướng dẫn: TS Nguyễn Anh Vũ Viện Di truyền Nông nghiệp Việt Nam Th.S Lương Thị Thu Hường Khoa CNSH – CNTP, Trường Đại học Nông Lâm Thái Nguyên Thái Nguyên, năm 2014 LỜI CẢM ƠN Với lòng kính trọng biết ơn sâu sắc, tơi xin cảm ơn PGS TS Nguyễn Văn Đồng (Giám đốc Phịng Thí nghiệm Trọng điểm Công nghệ Tế bào Thực vật, Viện Di truyền Nông nghiệp), TS Nguyễn Anh Vũ người tận tình bảo tạo điều kiện giúp tơi hồn thành q trình thực tập Tơi xin chân thành cảm ơn KS Lê Ngọc Quỳnh toàn thể cán nhân viên phịng Thí nghiệm Trọng điểm Quốc gia Cơng nghệ Tế bào Thực vật hết lịng giúp đỡ tơi suốt q trình thực tập Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành, lời tri ân tới ThS Lương Thị Thu Hường tận bảo, hướng dẫn thời gian qua Cuối cùng, xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình, người thân bạn bè, người ln dành cho tơi tình cảm tốt đẹp nhất, ln hỗ trợ, giúp đỡ suốt thời gian học tập nghiên cứu Do thời gian thực đề tài có giới hạn nên đề tài khơng tránh khỏi sai sót Em mong nhận đóng góp kiến thầy bạn để đề tài tơi hồn thiện Tơi xin chân thành cảm ơn! Hà Nội, tháng năm 2014 Sinh viên Nguyễn Thị Huyền DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Diện tích, suất sản lượng sắn giới từ năm 2000-2011 13 Bảng 2.2 Diện tích, sản lượng suất trồng sắn Việt Nam qua năm 2000-2013 14 Bảng 2.3 Các quốc gia phát triển nhiên liệu sinh học với quy mô lớn 16 Bảng 2.4 Tám nhà máy sản xuất Ethanol rượu 17 từ sắn Việt Nam năm 2010 17 Bảng 3.1 Các môi trường sử dụng trình nghiên cứu 24 Bảng 4.1 Kết ảnh hưởng NAA tới khả tạo mô sẹo sau 28 ngày 32 Bảng 4.2 Kết ảnh hưởng 2,4D tới khả tạo mô sẹo sau 28 ngày .34 Bảng 4.3 Kết ảnh hưởng picloram tới khả tạo mô sẹo sau q trình ni cấy .35 Bảng 4.4 Kết ảnh hưởng NAA tới khả tạo mơ sẹo phơi hóa sau q trình ni cấy 37 Bảng 4.5 Kết ảnh hưởng 2,4D tới khả tạo mơ sẹo phơi hóa sau q trình ni cấy 38 Bảng 4.6 Kết ảnh hưởng picloram tới khả tạo mơ sẹo phơi hóa sau q trình ni cấy 39 DANH MỤC CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Biểu đồ sản lượng trồng sắn Việt Nam từ năm 2000 - 2013 15 Hình 3.1 Cây sắn ống nghiệm 24 Hình 3.3 Sơ đồ khảo sát ảnh hưởng NAA tới khả tạo mô sẹo phôi hóa 27 Hình 4.1 Ảnh hưởng NAA tới khả tạo mô sẹo 33 Hình 4.2 Ảnh hưởng 2,4D tới khả tạo mơ sẹo 34 Hình 4.3 Ảnh hưởng picloram tới khả tạo mô sẹo 36 Hình 4.4 Biểu đồ so sánh ảnh hưởng auxin công thức tối ưu tới khả tạo mô sẹo 37 Hình 4.5 Biểu đồ so sánh ảnh hưởng auxin công thức tối ưu tới khả tạo mơ sẹo phơi hóa 40 Hình 4.6 Giống TMS60444 sau lần cấy chuyển mơi trường MMS 41 Hình 4.7 Giống KM98 – sau lần cấy chuyển môi trường 41 Hình 4.8 Giống sắn sau lần cấy chuyển môi trường MMS 42 DANH MỤC TỪ, CỤM TỪ VIẾT TẮT 2,4D : Axit 2,4 dicloro-phenoxiaxetic(2,4D) ADN : Axit deoxyribonucleic BAP : 6-benzylaminopurine CIAT :International Center for Tropical Agriculture CV : Coeficient of Variation Đ/C : Đối chứng FAO : Food and Agriculture Organization HCN : Hidro xyanua LSD : Least Significant Difference MS : Murashige and Skoog’s NAA : α - Naphlene axetic axit TN : Thí nghiệm MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích mục tiêu nghiên cứu 10 1.2.1 Mục đích 10 1.2.2 Yêu cầu 10 1.3 Ý nghĩa đề tài .10 1.3.1 Ý nghĩa khoa học 10 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn .10 Phần 2: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 11 2.1 Tổng quan chung sắn 11 2.1.1 Nguồn gốc phân loại 11 2.1.2 Đặc điểm thực vật học 11 2.1.3 Đặc điểm số giống sắn nghiên cứu 12 2.1.4 Thành phần dinh dưỡng giá trị sử dụng .12 2.1.4 Tình hình sản xuất tiêu thụ 13 2.1.5 Nhu cầu sắn cho nhiên liệu sinh học .16 2.2 Auxin vai trò auxin q trình tạo mơ sẹo 18 2.3 Tình hình nghiên cứu chuyển gen sắn 19 2.3.1 Trên giới 19 2.3.2 Tại Việt Nam 23 Phần 3: ĐỐI TƯỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 24 3.1 Đối tượng vật liệu nghiên cứu .24 3.2 Môi trường nuôi cấy 24 3.3 Dụng cụ, thiết bị hóa chất 24 3.4 Địa điểm thời gian tiến hành nghiên cứu 25 3.5 Nội dung nghiên cứu 25 3.6 Phương pháp nghiên cứu 25 3.6.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng auxin (NAA, 2,4-D, picloram) tới khả tạo mô sẹo 27 3.6.2 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng auxin (NAA, 2,4-D, picloram) tới khả tạo mơ sẹo phơi hóa 29 Phần 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU .32 4.1 Kết ảnh hưởng auxin (NAA, 2,4-D, picloram) tới khả tạo mô sẹo .32 4.2 Kết ảnh hưởng auxin (NAA, 2,4-D, picloram) tới khả tạo mô sẹo phôi hóa .37 4.2.3 Kết ảnh hưởng picroram tới khả tạo mô sẹo phôi hóa 39 Phần 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 43 5.1 Kết luận 43 5.2 Kiến nghị 43 TÀI LIỆU THAM KHẢO 45 I Tài liệu tiếng Việt 45 II Tài liệu tiếng anh 45 MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Sắn (Manihot esculenta Crantz) trồng 100 nước có khí hậu nhiệt đới cận nhiệt đới thuộc ba châu: châu Á, châu Phi châu Mỹ La Tinh Tổ chức Nông lương giới (FAO) xếp sắn lương thực quan trọng nước phát triển sau lúa gạo, ngơ lúa mì Tinh bột sắn thành phần quan trọng chế độ ăn tỷ người giới [17] Ở Việt Nam, sắn xác định lồi nhiên liệu sinh học thích hợp thời gian tới Ngoài ra, sắn trở thành 10 mặt hàng xuất quan trọng Việt Nam với kim ngạch năm 2012 đạt tới 1,2 tỷ USD (FAO, 2013) [18] Tuy nhiên, xuất sản lượng sắn nước ta mức thấp, chất lượng tinh bột sắn không cao canh tác không kỹ thuật, khả kháng virus sâu bệnh thấp, diện tích trồng khơng quy mô, tập chung Do vậy, cần tạo giống sắn cho xuất chất lượng cao đáp ứng đủ nhu cầu thực tế [21] Ngày công tác chọn tạo giống sắn, kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào áp dụng để nhân nhanh, tạo giống bệnh kỹ thuật di truyền, chuyển gen tạo giống mang đặc tính mong muốn cách nhanh chóng hiệu nghiên cứu [20] Tạo mơ sẹo phơi hóa khâu quan trọng để tạo vật liệu phục vụ chuyển gen vào sắn Mơ sẹo phơi hóa sử dụng nhiều nghiên cứu tạo giống bệnh, nghiên cứu chuyển gen bảo quản nguồn gen Tạo mô sẹo phơi hóa có ý nghĩa quan trọng cho nghiên cứu khả tiếp nhận gen giống sắn, làm sở tiến tới chuyển gen (tổng hợp tinh bột, gen kháng virus, ) nâng cao xuất, hàm lượng tinh bột phục vụ sản xuất nhiên liệu sinh học [29] Việc sử dụng số chất kích thích sinh trưởng nâng cao hiệu rõ rệt kích thích phân chia tế bào mơ phân sinh thượng tầng để hình thành mơ sẹo (callus) [11] Các chất thuộc nhóm auxin có hiệu việc cảm ứng để trì mơ để cảm ứng mơ sẹo có khả sinh phơi Tuy nhiên chất khác (2,4-D, NAA, picloram…) sử dụng nồng độ khác hiệu tạo mô sẹo không giống giống sắn Chúng kích thích ức chế q trình tạo mơ sẹo [16] Trong nghiên cứu tạo mô sẹo E Sofiari cộng sự, 2,4D cho kết cao so với NAA giống TMS90853[16] Ông cho nên sử dụng 2,4D để tạo mơ sẹo q trình ni cấy Trong Jiu Liu cộng lại sử dụng piclroram cho q trình tạo mơ sẹo mơ sẹo phơi hóa cho kết tốt giơng TMS 60444 [24] Các giống sắn Việt Nam đa dạng có nhiều giống tốt q trình nghiên cứu sắn liên quan tới tạo mô sẹo hay chuyển gen cịn nhiều khó khăn, hạn chế [1] Do vấn đề đặt cần tìm loại auxin cho hiệu tạo mơ sẹo, mơ sẹo phơi hóa cao phục vụ chuyển gen giống sắn Việt Nam Xuất phát từ thực tiễn tiến hành thực đề tài: “Khảo sát ảnh hưởng số chất thuộc nhóm auxin đến khả tạo mơ sẹo phơi hóa phục vụ chuyển gen số giống sắn (Manihot esculenta Crantz)” 1.2 Mục đích mục tiêu nghiên cứu 1.2.1 Mục đích - Khảo sát ảnh hưởng NAA, 2,4D picloram đến khả tạo mô sẹo giống sắn KM98 – giống TMS60444 1.2.2 Yêu cầu - Xác định ảnh hưởng NAA, 2,4D picloram đến hình thành mơ sẹo giống sắn KM98 – TMS60444 - Xác định ảnh hưởng NAA, 2,4D picloram đến hình thành mơ sẹo phơi hóa giống sắn KM98 – TMS60444 1.3 Ý nghĩa đề tài 1.3.1 Ý nghĩa khoa học - Thành công nghiên cứu tạo tiền đề cho việc chuyển gen phù hợp cần thiết với mục đích khác vào sắn Việt Nam 1.3.2 Ý nghĩa thực tiễn - Xây dựng quy trình tạo mơ sẹo phơi hố phục vụ chuyển gen hiệu Tạo tiền đề nguyên liệu cho trình chuyển gen sắn Việt Nam A B Hình 4.6 Giảng TMS60444 sau lản cảy chuyản môi trảảng MMS chảa 2,4 D (A) picloram (B) A B Hình 4.7 Giảng KM98 – sau lản cảy chuyản (28 ngày) môi trảảng MMS A Mảu bả thối hóa; B: Mảu phát triản tiảp Từ hình 4.6 cho thấy mô sẹo thuộc giống TMS60444 tiếp tục phát triển mô sẹo tốt sau trình cấy chuyển qua mơi trường MMS nhiều lần hứa hẹn tạo mơ sẹo phơi hóa sau khoảng 3,4 lần cấy chuyển lần cách 14 ngày Giống KM98 – thối hóa dần sau lần cấy chuyển mơi trường MMS, khơng có khả tạo mơ sẹo phơi hóa Sau lần cấy chuyển môi trường MMS kết thu rõ ràng: giống TMS60444 cho chất lượng mô sẹo tốt, số lượng mô sẹo tạo nhiều bề mặt mơ sẹo, độ đồng cao, hình dạng đặc trưng, độ nhày tạo điều kiện tốt cho mơ sẹo lấy dinh dưỡng phat triển thành mơ sẹo phơi hóa Giống KM98-7 mô sẹo cho chất lượng xấu, màu sắc vàng đậm, mơ sẹo thối hóa dần khơng có khả tạo mơ sẹo phơi hóa Sau lần cấy chuyển giống KM98 – bị thoái hóa hết, khơng tạo mơ sẹo Các giống KM98 – bị thối hóa Giống TMS60444 tạo mơ sẹo phơi hóa Hình 4.8 Giảng sản sau lản cảy chuyản (42 ngày) môi trảảng MMS Phản KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 Kết luận Kết thí nghiệm cho thấy sinh trưởng phát triển mô sẹo chịu ảnh hưởng môi trường nuôi cấy chất giống Thành phần nồng độ chất kích thích sinh trưởng ảnh hưởng mạnh rõ đến hiệu tạo mô sẹo mô sẹo phơi hóa Sử dụng NAA nồng độ 10mg/l cho tỷ lệ tạo mô sẹo tốt giống sắn TMS60444 (33,67%) – giống sắn có nguồn gốc từ châu Phi giống Việt Nam KM98 – (28,33%) Sử dụng 2,4D nồng độ 8mg/l cho tỷ lệ tạo mô sẹo tốt giống sắn TMS60444 (66,67%) KM98 – (53,67%) Sử dụng picloram nồng độ 12mg/l tạo mô sẹo cho chất lượng tốt (79% - TMS60444, 62,67% - KM98 – 7) Tỷ lệ mô sẹo đạt cao hẳn so với sử dụng NAA, 2,4D Sử dụng NAA nồng độ khơng tạo mơ sẹo phơi hóa giống CT đối chứng khơng có NAA cho kết tương tự Sử dụng 2,4D, giống sắn KM98 – thối hóa dần cấy mơi trường MMS, tỷ lệ mô sẹo giảm mạnh sau lần cấy chuyển khơng có khả tạo mơ sẹo phơi hóa Giống sắn TMS60444 tạo mơ sẹo phơi hóa với tỷ lệ cao (57,33%) nồng độ 8mg/l Sử dụng picloram giống TMS60444 phát triển cho chất lượng mô sẹo tốt (68,33%) môi trường MMS sau lần cấy chuyển mà tạo tỷ lệ mơ sẹo phơi hóa cao (cao 2,4D) Giống sắn KM98 – thối hóa dần cấy mơi trường MMS, chất lượng xấu, khơng có khả tạo mơ sẹo phơi hóa 5.2 Kiến nghị Do thời gian thực thí nghiệm cịn ngắn, chúng tơi chưa thể tiến hành thí nghiệm tiếp theo: tiếp tục cấy chuyển sang môi trường MMS nhiều lần để tạo nhiều mơ sẹo phơi hóa, sau biến nạp chuyển gen sắn, tái sinh tạo thành chuyển gen hồn chỉnh,… Vì chúng tơi có số kiến nghị sau: Tiếp tục tiến hành bước để hồn thành quy trình chuyển gen tái sinh sắn thành hồn chỉnh Nghiên cứu để tạo mơ sẹo phơi hóa giống Việt Nam Ở sử dụng giống Việt Nam giống đối chứng, cần tiến hành nghiên cứu thêm nhiều giống Việt Nam khác TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tài liệu tiếng Việt Bùi Lan Anh, Nguyễn Phan Cẩm Tú, Trần Nguyên Vũ, Bùi Văn Lệ (2008), Xây dựng quy trình biến nạp gen bar – gen kháng thuốc diệt cỏ vào khoai mì (manihot esculenta crantz) phương pháp bắn gen, Science & Technology Development Phạm Văn Biên, Hoàng Kim (1995), Cây sắn, Nhà xuất Nông nghiệp, thành phố Hồ Chí Minh Phạm Sỹ Tiệp (1999), Nghiên cứu giá trị dinh dưỡng số giống sắn Trung du miền núi phía Bắc, ảnh hưởng phương pháp chế biến đến thành phần hóa học củ, khả sử dụng bột sắn để vỗ béo lợn F1 (ĐB x MC), Luận án Tiến sĩ Nông nghiệp, Viện Chăn nuôi Đường Hồng Dật (2004), Cây sắn từ lương thực chuyển thành công nghiệp, Nhà xuất Lao động - Xã hội, Hà Nội Hoàng Kim (2013), Báo cáo Tổng kết Dự án: “Xây dựng mơ hình sản xuất sắn theo hướng bền vững tỉnh Đắc Lăk”, Sở Nông nghiệp &PTNT Đăk Lak, 68 trang Nguyễn Hồng Lộc (2007), Giáo trình Nhập môn Công nghệ sinh học, Nhà xuất Đại học Huế Trần Thị Lệ, Nguyễn Hoàng Lộc, Trần Quốc Dũng (2007), Giáo trình Cơng nghệ gen nơng nghiệp, Nhà xuất Nông nghiệp, Hà Nội Trần Ngọc Ngoạn (2007), Giáo trình Cây sắn, Nhà xuất Nông nghiệp Phạm Thị Nhạn, Đinh Văn Cường, Nguyễn Hữu Hỷ (2013), “Một số kết nghiên cứu sắn giai đoạn 2007- 2012” Tấng cấc Thấng kê, (2014), Diấn tích, suất, sấn lấấng sấn cấa Viất Nam phân theo đấa phấấng năm 2013 II Tài liệu tiếng Anh 10 Abhary M1, Siritunga D, Stevens G, Taylor NJ, Fauquet CM (2011), “Transgenic biofortification of the starchy staple cassava (Manihot esculenta) generates a novel sink for protein”, PLoS One, 6(1), 16256 11 Baba, A.I Abdulrazak I Baba a, Fabio C.S Nogueira b, Camila B Pinheiro b, Juliana N Brasil, Emmanuel S Jereissati, Thiago L Juca, Arlete A Soares, Marise F Santos, Gilberto B Domont , Francisco A.P Campos, (2008), “Proteome analysis of secondary somatic embryogenesis in cassava (Manihot esculenta)”, Plant Science, 175, 717–723 12 Balagopalan, C., G., Padmaja, S K., Nanda and S N Moorthy (1998), “Cassava in Food, Feed and industry”, Science Public, New Delhi, 3-12 13 Balat, M., Balat, H (2009), “Recent trends in global production and utilization of bio-ethanol fuel”, Plant Cell Rep , (86), 2273–2282 14 Chellappan P, Masona MV, Vanitharani R, Taylor NJ, Fauquet CM (2004), "Broad spectrum resistance to ssDNA viruses associated with transgeneinduced gene silencing in cassava", Plant Molecular Biology, 56(4), 601-611 15 Fabiano, E., Masamba W.R.L., Masumbu.F.F (2001), “Processing of starch from cassava: modification and utilisation of cassava starch in Malawi In: Mahungu, N.M., J.W Banda and C Mataya (eds.) Cassava commercialisation for economic development in Malawi Proceedings of the Symposium held at Kwacha International Conference Centre, Blantyre, Malawi, 21–23 May 2001, 121 16 E Sofiari, J.E.M Bergervoet, C.J.J.M Raemakers, E.Jacobsen, R.G.F Visser (1997), “The investigation of somatic embryos and leaves as sources for protoplast culture in cassava”, Plant Cell, Tissue and Organ Culture, 50, 45-56 17 FAO (2009), Food Outlook : Corporate document repository, December, 2009 18 FAO Statistical Yearbook (2013), "World food and agriculture", Food and Agriculture organization of the United nations Rome 2013 19 Ghosh S P., Ramanujam T., Jos J S N., and Nair R G (1988), “Tuber Crops”, Oxford & IBH Publishing Co., New Delhi, 3-146 20 Gonzalez AE, Schopke C, Taylor NJ, Beachy RN, Fauquet CM (1998), “Regeneration of transgenic cassava plants (Manihot esculenta Crantz) through Agrobacterium-mediated transformation of embryogenic suspension cultures, Plant Cell Rep 17, 827–831 21 Hoàng Kim Nguyễn Văn Bộ (2011), Cassava for biofuel in Vietnam Final meeting : linking the poor to global markets : Pro-poor development of biofuel supply chains in Ho Chi Minh city, 14-14 April 2011 22 Hong-Qing Li, christof sautter, Ingo Potrykus and Johanna Puonti-Kaerlas (1996), “Genetic transformation of cassava (Manihot esculenta Crantz”), Nature Biotechnology, 14, 736-740 23 Jarowenko, W (1977) Starch based adhesives: In: Irving, S (ed.) Handbook of Adhesives Second Edition, Van Nostrand Reinhold Co., New York, USA, 192-211 24 Jia Liu, Qijie Zheng, Qiuxiang Ma, Kranthi Kumar Gadidasu and Peng Zhang (2011), “Cassava Genetic Transformation and its Application in Breeding”, Journal of Integrative Plant Biology, 53 (7), 552–569 25 Jos J S (1969), “Cytological aspects of cassava”, Cassava Production Technologies, Central Tuber Research Institute, Trivandrum, India, 10-14 26 Mary Dell Chilton, Randall K saiki, Narendra Yadavt, Milton P Gordon and Francis Quetieri (1980), “T-DNA from Agrobacterium Ti plasmid is in the nuclear DNA fraction of crown gall tumor cells”, Proc Nati Acad Sci USA, Vol 77 (7), 4060-4064 27 Radley, J A (1976) Industrial uses of starch and its derivatives Applied Science Publishers 28 Rogers Appan DJ (1973), “Abstracts on cassava (Manihot esculenta Crantz), Cassava Information Center, Centro Internacional de Agricultura Tropica”, Fl Neotropica, 13, 247 29 S E Bull, J A Owiti, M Niklaus, J R Beeching, W Gruissem & H Vanderschuren (2009), “Agrobacterium-mediated transformation of friable embryogenic calli and regeneration of transgenic cassava”, Nature Protocols, 4(12), 1845-1854 30 Sarria, R., E Torres, F Angel, P Chavarriaga and W.M Roca (2000), "Transgenic plants of cassava (Manihot esculenta) with resistance to basta obtained by Agrobacterium-mediated transformation”, Plant Cell Reports, 19, 339-344 31 Schöpke C , Taylor N , Cárcamo R , Konan NK , Marmey P , Henshaw GG , Beachy RN , Fauquet C., (1996), “Regeneration of transgenic cassava plants (Manihot esculenta Crantz) from microbombarded embryogenic suspension cultures”, Nature Biotechnology, 14, 731–735 32 Schreuder, M.M., Raemakers, C.J.J.M., Jacobsen, E & Visser, R.G.F (2001), “Efficient production of transgenic plants by Agrobacterium-mediated transformation of cassava (Manihot esculenta Crantz)”, Euphytica 120, 35–42 33 Siritunga D, Sayre R (2007), “Transgenic approaches for cyanogen reduction in cassava”, Journal of AOAC international, 90(5), 1450-1455 34 Taylor, N., Chavarriaga, P., Raemakers, K., Siritunga, D & Zhang, P (2004), “Development and application of transgenic technologies in cassava”, Plant Biology, 56, 671–688 35 Uzoma Ihemere, Diana Arias-Garzon, Susan Lawrence and Richard Sayre (2006), “Genetic modification of cassava for enhanced starch production”, Plant Biotechnology Journal, 4, 453–465 36 Vanderschuren, H., Alder, A., Zhang, P & Gruissem, W., (2009), “Dosedependent RNAi-mediated geminivirus resistance in the tropical root crop cassava”, Plant Molecular Biology, 70, 265–272 37 Wurzburg, O.B (1986), Modified Starches: Properties and Uses CRC Press, Boca Raton, USA 38 You-Hua Cai, Ze-Xin Liang, Shuang Li, Ming-Jun Zhu, Zhen-Qiang Wu, Shang-Tian Yang, and Ju-Fang Wang (2012), “Bioethanol from Fermentation of Cassava Pulp in a Fibrous-bed Bioreactor Using Immobilized ∆ldh, a Genetically Engineered Thermoanaerobacterium aotearoense”, Biotechnology & Bioprocess Engineering, 17(6), 1270 39 Zhang, X.R., Henriques, R., Lin, S.S., Niu, Q.W & Chua, N.H (2006), “Agrobacterium-mediated transformation of Arabidopsis thaliana using the floral dip method”, Nature Protocol, 1, 641–646 PHỤ LỤC XỬ LÝ SỐ LIỆU 1.1 Nội dung 1: Nghiên cứu ảnh hưởng auxin (NAA, 2,4-D, picloram) tới khả tạo mơ sẹo 1.2 Thí nghiệm Giống TMS60444 BALANCED ANOVA FOR VARIATE MO.SEO FILE TN1A 2/ 6/** 23:43 PAGE VARIATE V003 MO.SEO LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1562.27 390.567 344.62 0.000 * RESIDUAL 10 11.3332 1.13332 * TOTAL (CORRECTED) 14 1573.60 112.400 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN1A 2/ 6/** 23:43 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 3 DF MO.SEO 3.66667 9.33333 16.6667 33.6667 19.6667 SE(N= 3) 0.614634 5%LSD 10DF 1.93673 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN1A 2/ 6/** 23:43 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE MO.SEO GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 16.600 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 10.602 1.0646 6.4 0.0000 | | | | Giống KM98 – BALANCED ANOVA FOR VARIATE M.SEO FILE TN1A 2/ 6/** 16:15 PAGE VARIATE V003 M.SEO LN SOURCE OF VARIATION DF SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 1143.60 285.900 536.06 0.000 * RESIDUAL 10 5.33338 533338 * TOTAL (CORRECTED) 14 1148.93 82.0667 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN1A 2/ 6/** 16:15 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 M.SEO 3.66667 11.3333 28.3333 12.6667 5.33333 SE(N= 3) 0.421639 5%LSD 10DF 1.32860 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN1A 2/ 6/** 16:15 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE M.SEO 1.3 GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 12.267 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 9.0591 0.73030 6.0 0.0000 | | | | Thí nghiệm Giống TMS60444 BALANCED ANOVA FOR VARIATE M.SEO FILE TN2A 2/ 6/** 16:22 PAGE VARIATE V003 M.SEO LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 7715.33 1928.83 340.38 0.000 * RESIDUAL 10 56.6669 5.66669 * TOTAL (CORRECTED) 14 7772.00 555.143 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN2A 2/ 6/** 16:22 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ SE(N= 5%LSD 3) 10DF NOS 3 3 DF M.SEO 4.66667 55.0000 66.6667 62.3333 36.3333 1.37437 4.33070 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN2A 2/ 6/** 16:22 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE M.SEO GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 45.000 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 23.561 2.3805 5.3 0.0000 | | | | Giống KM98 – BALANCED ANOVA FOR VARIATE M.SEO FILE TN2B 2/ 6/** 15:49 PAGE VARIATE V003 M.SEO LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 5034.93 1258.73 325.54 0.000 * RESIDUAL 10 38.6664 3.86664 * TOTAL (CORRECTED) 14 5073.60 362.400 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN2B 2/ 6/** 15:49 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 DF M.SEO 3.00000 44.3333 53.6667 49.6667 31.3333 SE(N= 3) 1.13529 5%LSD 10DF 3.57733 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN2B 2/ 6/** 15:49 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE M.SEO 1.4 GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 36.400 Thí nghiệm Giống TMS60444 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 19.037 1.9664 5.4 0.0000 | | | | BALANCED ANOVA FOR VARIATE M.SEO FILE TN3A 2/ 6/** 15:53 PAGE VARIATE V003 M.SEO LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 11179.6 2794.90 499.10 0.000 * RESIDUAL 10 55.9993 5.59993 * TOTAL (CORRECTED) 14 11235.6 802.543 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN3A 2/ 6/** 15:53 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 DF M.SEO 4.33333 42.0000 74.3333 79.0000 63.3333 SE(N= 3) 1.36625 5%LSD 10DF 4.30511 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN3A 2/ 6/** 15:53 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE M.SEO GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 52.600 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 28.329 2.3664 4.5 0.0000 | | | | Giống KM98 – BALANCED ANOVA FOR VARIATE M.SEO FILE TN3B 2/ 6/** 15:57 PAGE VARIATE V003 M.SEO LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 6861.60 1715.40 216.23 0.000 * RESIDUAL 10 79.3325 7.93325 * TOTAL (CORRECTED) 14 6940.93 495.781 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN3B 2/ 6/** 15:57 PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 DF M.SEO 3.66667 32.6667 59.3333 62.6667 45.3333 SE(N= 3) 1.62617 5%LSD 10DF 5.12411 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN3B 2/ 6/** 15:57 PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ | (N= 15) SD/MEAN | | NO BASED ON BASED ON % | | OBS TOTAL SS RESID SS | | M.SEO 15 40.733 22.266 2.8166 6.9 0.0000 Nội dung 2: Nghiên cứu ảnh hưởng auxin (NAA, 2,4-D, picloram) tới khả tạo mơ sẹo phơi hóa 2.1 Thí nghiệm Giống TMS60444 BALANCED ANOVA FOR VARIATE M.SEO FILE TN5 2/ 6/** 16: PAGE VARIATE V003 M.SEO LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 5522.67 1380.67 ****** 0.000 * RESIDUAL 10 10.6669 1.06669 * TOTAL (CORRECTED) 14 5533.33 395.238 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN5 2/ 6/** 16: PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 DF M.SEO 0.000000 19.3333 38.3333 57.3333 33.3333 SE(N= 3) 0.596292 5%LSD 10DF 1.87894 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN5 2/ 6/** 16: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE GRAND MEAN (N= 15) NO STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | | | | M.SEO 2.2 OBS 15 29.667 TOTAL SS 19.881 RESID SS 1.0328 | 3.5 0.0000 | Thí nghiệm Giống TMS60444 BALANCED ANOVA FOR VARIATE M.SEO FILE TN6 2/ 6/** 16: PAGE VARIATE V003 M.SEO LN SOURCE OF VARIATION SUMS OF MEAN F RATIO PROB ER SQUARES SQUARES LN ============================================================================= CT$ 8431.07 2107.77 608.01 0.000 * RESIDUAL 10 34.6664 3.46664 * TOTAL (CORRECTED) 14 8465.73 604.695 TABLE OF MEANS FOR FACTORIAL EFFECTS FILE TN6 2/ 6/** 16: PAGE MEANS FOR EFFECT CT$ CT$ NOS 3 3 DF M.SEO 0.000000 27.3333 49.6667 66.6667 55.6667 SE(N= 3) 1.07496 5%LSD 10DF 3.38725 ANALYSIS OF VARIANCE SUMMARY TABLE FILE TN6 2/ 6/** 16: PAGE F-PROBABLIITY VALUES FOR EACH EFFECT IN THE MODEL SECTION - VARIATE M.SEO GRAND MEAN (N= 15) NO OBS 15 39.867 STANDARD DEVIATION C OF V |CT$ SD/MEAN | BASED ON BASED ON % | TOTAL SS RESID SS | 24.591 1.8619 4.7 0.0000 | | | | ... tài: KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA MỘT SỐ CHẤT THUỘC NHÓM AUXIN ĐẾN KHẢ NĂNG TẠO MƠ SẸO PHƠI HĨA PHỤC VỤ CHUYỂN GEN CỦA MỘT SỐ GIỐNG SẮN (Manihot esculenta Crantz) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hệ đào tạo. .. tài: ? ?Khảo sát ảnh hưởng số chất thuộc nhóm auxin đến khả tạo mơ sẹo phơi hóa phục vụ chuyển gen số giống sắn (Manihot esculenta Crantz) ” 1.2 Mục đích mục tiêu nghiên cứu 1.2.1 Mục đích - Khảo sát. .. 33 Hình 4.2 Ảnh hưởng 2,4D tới khả tạo mô sẹo 34 Hình 4.3 Ảnh hưởng picloram tới khả tạo mô sẹo 36 Hình 4.4 Biểu đồ so sánh ảnh hưởng auxin công thức tối ưu tới khả tạo mô sẹo