Đánh giá khả năng tiêu hoá protein của enzyme protease có trong tuỵ tạng lợn, ứng dụng trong chế tạo môi trường hottinger

luận văn, khóa luận, cao học, thạc sĩ, tiến sĩ, đề tài

BỘ GIÁO DỤC VÀ ðÀO TẠO TRƯỜNG ðẠI HỌC NÔNG NGHIỆP HÀ NỘI ---------------***------------- ðÀO QUANG THỤ ðÁNH GIÁ KHẢ NĂNG TIÊU HOÁ PROTEIN CỦA ENZYME PROTEASE CÓ TRONG TỤY TẠNG LỢN, ỨNG DỤNG TRONG CHẾ TẠO MÔI TRƯỜNG HOTTINGER LUẬN VĂN THẠC SĨ NÔNG NGHIỆP Chuyên ngành: THÚ Y Mã số : 60.62.50 Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS. TRƯƠNG QUANG HÀ NỘI - 2010 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . i LỜI CAM ðOAN Tôi xin cam ñoan ñây là công trình nghiên cứu của tôi, những số liệu trong luận văn này là hoàn toàn trung thực và kết quả nghiên cứu chưa từng ñược sử dụng. Mọi thông tin trích dẫn trong báo cáo này ñã ñược ghi rõ nguồn gốc, tác giả. Hà Nội, ngày 10 tháng 11 năm 2010 TÁC GIẢ ðào Quang Thụ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . ii LỜI CẢM ƠN ðể hoàn thành ñề tài này, ngoài sự nỗ lực cố gắng của bản thân, tôi còn nhận ñược rất nhiều sự quan tâm giúp ñỡ và ủng hộ của các thầy cô giáo, gia ñình, bạn bè và ñồng nghiệp. Trước hết tôi xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc nhất tới PGS.TS. Trương Quang Khoa Thú y Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội, người ñã tận tình hướng dẫn và giúp ñỡ tôi trong suốt quá trình thực hiện ñề tài. Xin chân thành cảm ơn các thầy cô giáo trong Viện ñào tạo sau ðại học, Ban chủ nhiệm Khoa Thú y, Bộ môn Vi sinh vật truyền nhiễm Khoa Thú y Trường ðại Học Nông Nghiệp Hà Nội ñã giúp ñỡ tôi trong suốt thời gian học tập cũng như trong thời gian thực hiện ñề tài. Xin chân thành cảm ơn Ban giám ñốc, Phòng hoá nghiệm, Phân xưởng vacxin vi trùng, Xí nghiệp thuốc thú Y TW ñã giúp ñỡ tạo ñiều kiện cho tôi trong quá trình nghiên cứu, thực hiện thí nghiệm và thu thập số liệu tại cơ sở. Xin trân trọng cảm ơn! Hà Nội, ngày 6 tháng 11 năm 2010 Tác giả ðào Quang Thụ Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . iii MỤC LỤC Lời cam ñoan i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục viết tắt trong ñề tài v Danh mục bảng vi Danh mục hình vii 1 MỞ ðẦU 1 1.1 Tính cấp thiết của ñề tài 1 1.2 Mục ñích, ñối tượng nghiên cứu 3 1.3 Ý nghĩa thực tiễn và khoa học của ñề tài 3 2 TỔNG QUAN 4 2.1 Enzyme học cơ bản 4 2.2 Dịch tuỵ và chức năng tiêu hoá: 19 2.3 Dinh dưỡng vi sinh vật 21 2.4 Sinh trưởng và phát triển của vi sinh vật 24 2.5 Môi trường nuôi cấy vi sinh vật 30 3 NỘI DUNG, NGUYÊN LIỆU, PHƯƠNG PHÁP 33 NGHIÊN CỨU 33 3.1 Nội dung nghiên cứu 33 3.2 Nguyên liệu, hoá chất, dụng cụ nghiên cứu 34 3.3 Phương pháp nghiên cứu 36 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 44 4.1 ðánh giá hoạt ñộ của enzyme protease có trong tuỵ tạng lợn 44 4.1.1 Hoạt ñộ của enzyme protease trong tuỵ tạng lợn ngay sau khi giết mổ ( tuỵ tươi ) 44 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . iv 4.1.2 Hoạt ñộ enzyme protease trong tuỵ tạng lợn sau khi bảo quản ñông lạnh tại các thời ñiểm khác nhau 47 4.2 Ứng dụng kết quả nghiên cứu hoạt ñộ enzyme protease trong tuỵ tạng lợn vào quá trình chế tạo môi trường Hottinger 54 4.2.1 So sánh kết quả hoá nghiệm môi trường Hottinger của giai ñoạn SX (2007 – 2008) và ( 2009 – 2010). 58 4.2.2 Khảo sát sự tương quan giữa các thành phần trong môi trường Hottinger bằng phương trình hồi quy ở hai giai ñoạn SX (2007 – 2008) và (2009 – 2010) 67 4.2.3 ðánh giá chất lượng môi trường Hottinger thông qua chỉ số vi sinh vật 72 5 KẾT LUẬN VÀ ðỀ NGHỊ 77 5.1 Kết luận 77 5.2 ðề nghị 78 TÀI LIỆU THAM KHẢO 79 PHỤ LỤC 86 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . v DANH MỤC VIẾT TẮT TRONG ðỀ TÀI BQðL : Bảo quản ñông lạnh CP : Chế phẩm ðL : ðông lạnh ðVTD : ðơn vị tác dụng. E : Enzyme Hð : Hoạt ñộ I : Chất kìm hãm KN : Kháng nguyên KT : Kháng thể MT : Môi trường P : Pancreatin PT : Phân tích S : Cơ chất SX : Sản xuất THT GC : Tụ huyết trùng gia cầm TTHð : Trung tâm hoạt ñộng TW : Trung Ương VK : Vi khuẩn Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . vi DANH MỤC BẢNG STT Tên bảng Trang 4.1 Kết quả ñánh giá hoạt ñộ enzyme protease có trong tuỵ tạng lợn lấy ngay sau khi giết mổ. 44 4.2 Kết quả ñánh giá hoạt ñộ của enzyme protease có trong tuỵ tạng lợn sau khi bảo quản ñông lạnh tại các thời ñiểm khác nhau 48 4.3 Phân nhóm các giá trị hoạt ñộ enzyme protease trong tuỵ tạng lợn sau khi bảo quản ñông lạnh tại các khoảng thời gian khác nhau 52 4.4 Thống kê các kết quả hoá nghiệm môi trường Hottinger ñược sản xuất ở giai ñoạn (2007 – 2008) 56 4.5 Thống kê kết quả hoá nghiệm môi trường Hottinger ñược sản xuất ở giai ñoạn (2009 – 2010) 57 4.6 Số lượng vi khuẩn THT gia cầm trong 1ml canh trùng tại thời ñiểm thu hoạch ñể sản xuất vacxin các năm: 2007, 2008, 2009 và 2010 73 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . vii DANH MỤC HÌNH STT Tên hình Trang 2.1 Mô tả quy trình chế tạo vacxin vi trùng 31 3.1 Sơ ñồ minh họa quy trình chế biến, bảo quản tuỵ tạng 36 3.2 Sơ ñồ minh họa quy trình ñiều chế dung dịch pancreatin 0,02% 37 3.3 Sơ ñồ minh họa quy trình ñiều chế dung dịch casein 0,2 % 38 3.4 Mô tả thí nghiệm xác ñịnh hoạt ñộ enzyme protease 40 3.5 Minh họa phương pháp ñếm số vi trùng 43 4.1 Hoạt ñộ của enzyme protease có trong tuỵ tạng lợn lấy ngay sau khi giết mổ 45 4.2 Hoạt ñộ của enzyme protease có trong tuỵ tạng lợn giết mổ sau khi bảo quản ñông lạnh tại các thời ñiểm khác nhau 49 4.3 Hoạt ñộ trung bình của enzyme protease có trong tuỵ tạng của lợn tại các thời ñiểm khác nhau sau khi bảo quản ñông lạnh 53 4.4 So sánh hàm lượng tổng ñạm trong môi trường Hottinger ñược sản xuất ở hai giai ñoạn (2007 – 2008) và (2009 – 2010) 59 4.5 So sánh hàm lượng ñạm toan trong môi trường Hottinger ñược sản xuất ở hai giai ñoạn (2007 – 2008) và (2009 – 2010) 62 4.6 So sánh hàm lượng axit amin tryptophan trong môi trường Hottinger ñược SX ở hai giai ñoạn (2007 – 2008) và (2009 – 2010) 64 4.7 So sánh hiệu suất tiêu hoá protein trong quá trình chế tạo môi trường Hottinger ở hai giai ñoạn SX (2007 – 2008) và (2009 – 2010) 66 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . viii 4.8 Phương trình hồi quy tương quan giữa hàm lượng ñạm toan và tổng ñạm trong môi trường Hottinger ñược SX ở giai ñoạn (2007 – 2008) 68 4.9 Phương trình hồi quy tương quan giữa hàm lượng ñạm toan và tổng ñạm trong môi trường Hottinger ñược SX ở giai ñoạn (2009 – 2010) 68 4.10 Phương trình hồi quy tương quan giữa hàm lượng axit amin tryptophan và hàm lượng ñạm toan trong môi trường Hottinger ở giai ñoạn SX (2007 – 2008). 70 4.11 Phương trình hồi quy tương quan giữa hàm lượng axit amin Tryptophan và hàm lượng ñạm toan trong môi trường Hottinger ñược SX ở giai ñoạn (2009 – 2010). 71 4.12 Số lượng vi khuẩn THT gia cầm có trong 1 ml canh trùng tại thời ñiểm thu hoạch ñể sản xuất vacxin ở các năm: 2007, 2008, 2009, 2010 74 Trường ðại học Nông nghiệp Hà Nội – Luận văn thạc sĩ nông nghiệp . 1 1. MỞ ðẦU 1.1. Tính cấp thiết của ñề tài Tiêm phòng bằng vacxin là biện pháp phòng bệnh không thể thiếu ñược trong phòng chống dịch bệnh hàng năm tại các cơ sở chăn nuôi nhằm tạo ra miễn dịch ñặc hiệu chủ ñộng bảo hộ cho ñàn gia súc, gia cầm chống lại mầm bệnh xâm nhập từ bên ngoài. [5, tr.72] Vacxin là chế phẩm sinh học có tính kháng nguyên dùng ñể tạo miễn dịch ñặc hiệu chủ ñộng, nhằm tạo ra sức ñề kháng của cơ thể ñối với tác nhân gây bệnh cụ thể. [9, tr.44] Kháng nguyên là chất mà ñược hệ thống miễn dịch nhận biết một cách ñặc hiệu, là một chất gây ra ñáp ứng miễn dịch (tính sinh kháng thể hay tính gây mẫn cảm) và rồi phản ứng với các sản phẩm của ñáp ứng này (tính ñặc hiệu). [1, tr.26] Chế tạo vacxin là tạo ra kháng nguyên có nguồn gốc từ vi sinh vật gây bệnh hoặc vi sinh vật có cấu trúc kháng nguyên tương tự vi sinh vật gây bệnh nhưng ñược làm vô hoạt hoặc mất tính ñộc, ñã ñược bào chế ñảm bảo ñộ an toàn cần thiết, kích thích cơ thể tự tạo ra tình trạng miễn dịch chống lại tác nhân gây bệnh. [16, tr. 146-150] Xí nghiệp thuốc thú y Trung Ương là một trong những ñơn vị ñầu ngành trong cả nước có truyền thống sản xuất các loại vacxin phòng bệnh cho gia súc, gia cầm. Tại ñây tất cả các loại vacxin ñược sản xuất ñều là vacxin thế hệ I. Tại phân xưởng vi trùng của Xí nghiệp thuốc thú y TW, quy trình chế tạo vacxin là quá trình nhân giống liên tục từ giống gốc ban ñầu trên môi trường nuôi cấy: giống gốc → giống nhỏ → giống lớn → cấy sản xuất → thu hoạch canh trùng → xử lý canh trùng → ra chai → kiểm nghiệm vacxin. . tài khoa học: “ðánh giá khả năng tiêu hoá protein của enzyme protease có trong tuỵ tạng của lợn, ứng dụng trong chế tạo môi trường Hottinger ” 1.2. Mục. giữa tuỵ tạng với thịt bò sử dụng trong quá trình tiêu hoá chế tạo môi trường Hottinger ñóng một vai trò rất quan trọng trong việc tạo ra chất lượng môi trường