Các phản ứng lên men cổ ñ iển (yếm khí và hiếu khí) có thể thực hiện trong bình Enron, hấp thụ CO 2 bằng dung dịch BaSO4.

Một phần của tài liệu Đánh giá khả năng tiêu hoá protein của enzyme protease có trong tuỵ tạng lợn, ứng dụng trong chế tạo môi trường hottinger (Trang 25 - 28)

- Phương pháp quang ph kế:

Thường dùng ñể xác ñịnh hot ñộ các enzyme mà cơ cht, coenzyme, sn phm phn ng có kh năng hp th ánh sáng khác nhau nhng bước sóng xác ñịnh. S biến ñổi hp thụ ở bước sóng y trong quá trình phn ng là do hot ñộ enzyme. Phương pháp này ñược s dng rng rãi ñể nghiên cu các enzyme thuc nhóm oxy hoá kh oxydoreductase, chng hn:

+ Các dehydrogenase vi coenzyme NAD+ hoc NADP+. Tc ñộ phn

ng enzyme ñược xác ñịnh theo mc ñộ kh hoc oxy hoá coenzyme ca chúng. Dng kh NADH, NADPH và dng oxy hoá ca các coenzyme này

Trường ðại hc Nông nghip Hà Ni – Lun văn thc sĩ nông nghip ... 17 khác nhau rõ rt v kh năng hp th bước sóng 340nm, s biến ñổi này phn ánh mc ñộ chuyn hoá gia hai dng và cũng chính là tc ñộ và hot ñộ phn

ng enzyme.

Phương pháp này ch cn lượng nguyên liu ít nhưng li có ñộ nhy rt cao cho phép xác ñịnh chính xác, nhanh chóng hot ñộ enzyme. Vì vy ñây là mt trong nhng phương pháp s dng ph biến nht trong nghiên cu enzyme hc.

- Phương pháp chun ñộ liên tc:

ðược dùng ñể nghiên cu các phn ng enzyme mà kết qu ca nó to thành axit hoc bazơ. Lúc ñó dùng thiết b tự ñộng thêm kim hoc axit vào

ñể gi pH môi trường phn ng cố ñịnh ñồng thi tự ñộng ghi ñường biu din kim hoc axit ñã tiêu tn vào phn ng trung hoà. Lưu lượng kim hoc axit này phn ánh tc ñộ phn ng enzyme.

Phương pháp này có thểñược mô t m rng ra ñể nghiên cu các ñôi tượng khác nhưng trên nguyên tc liên tc ñịnh lượng (sn phm to thành hay lượng cơ cht tiêu hao), chng hn gián tiếp ño thế oxy hoá kh vi ñin cc tiêu chun khi nghiên cu các enzyme oxy hoá.

+ Phương pháp sc ký:

ðây là phương pháp hin ñại, hin nay ñược s dng rt nhiu và trong nhiu trường hp dùng tinh chế enzyme. Tt c các phương pháp sc ký ñều có th áp dng ñể xác ñịnh hot ñộ enzyme. T phương pháp lâu ñời nht như

sc ký giy. sc ký trao ñổi ion cho ñến các phương pháp hin ñại như sc ký lng cao áp, sc ký kết hp vi các phương pháp phân tích hin ñại khác (phân tích axit amin tự ñộng, cng hưởng t ht nhân, cc ph). Lượng enzyme và cơ cht cũng như sn phm phn ánh rt ít cũng cho kết qu chính xác, nhanh chóng.

+ Phương pháp hoá hc:

Trường ðại hc Nông nghip Hà Ni – Lun văn thc sĩ nông nghip ... 18 ht hoc sn phm phn ng to thành dưới tác dng ca enzyme. Các phn

ng này thuc loi to màu ñặc trưng, to màu vi thuc thử ñặc trưng,... nói chung là mt du hiu ñể nói lên mc ñộ hay thi ñim kết thúc phn ng. (ví dụ ñim tương ñương khi ñịnh phân axit bazơ ñược xác ñịnh bi sự ñổi màu ca phenolphtalein, qu tím...).

Trong tt c các phương pháp nêu trên, tu theo ñiu kin, yêu cu nghiên cu thc tế mà quyết ñịnh phương thc tiến hành (chng hn tiến hành trong ñiu kin thi gian như nhau, hay nng ñộ enzyme, nng ñộ cơ cht không ñổi...) qui hoch thc hin ñể xác ñịnh các thông s ti ưu.

* Chun b dch chiết enzyme ñể xác ñịnh hot ñộ:

Chế phm enzyme có thể ở dng rn, lng, bao gm (cơ cht, cht

ñộn, ht cc), các b phn khác nhau ca cơ th sinh vt sinh enzyme (mô, tế bào, khun ty, bào t...) và môi trường sinh tng hp enzyme (ch yếu là nước) có th cha c enzyme trong ñó. Vì vy cn phi x lý nhm ly enzyme ñể xác ñịnh

- Vi enzyme ngoi bào:

Nếu quá trình nuôi cy hay tích lu enzyme bng phương pháp b sâu trong môi trường lng. Sau khi ly mu xong cn làm lnh nhanh chóng trong môi trường lng. Sau khi ly mu xong cn làm lnh nhanh chóng xung 0oC ri ly tâm tc ñộ cao 5000 – 6000 vòng /phút ñể thu ñược dung dch trong sut.

Nếu quá trình nuôi cy hay tích lu enzyme bng phương pháp b mt trên môi trường rn (hay ht cc) thì ly mu 10-20 gam, chiết rút bng dung trên môi trường rn (hay ht cc) thì ly mu 10-20 gam, chiết rút bng dung dch ñệm tương ng vi pH xác ñịnh trong ñiu kin lnh (OoC) ñể enzyme không b biến tính hay gim hot tính, lượng dung dch này khong 200ml (gp 10-20 ln chế phm). Lc qua phu hay ly tâm vt ñể thu ñược dung dch trong sut.

- Vi enzyme ni bào:

Trường ðại hc Nông nghip Hà Ni – Lun văn thc sĩ nông nghip ... 19 + Phương pháp cơ hc: Ph biến nht là nghin (thông thường trong ci chày s, thu tinh, máy nghin quay tay, máy nghin có ñộng cơ), nghin vi cát, vn thu tinh.

+ Phương pháp hoá sinh: dùng enzyme thích hp (xenlulose, pectinase) ñể phân hu màng tế bào, mô ñể gii phóng enzyme (trước hết có th nhn ñược tế bào trn rt có giá tr trong nghiên cu tế bào hc, enzyme hc).

Tiếp ñó có th dùng các phương pháp chiết rút thích hp (dùng dung dch ñệm, dùng (NH4)2SO4, axeton...) ñể nhn ñược dung dch trong sut.

Trong trường hp sau khi xác ñịnh xong hot ñộ ca dch chiết cn tính toán hot ñộ ca chế phm ban ñầu (quy v hàm lượng cht khô tuyt

ñối). [17, tr. 68-72]

2.2. Dch tu và chc năng tiêu hoá:

Dch tu do tuyến tu tiết ra theo ng dn tu Wirsung ñổ vào tá tràng (chc năng ngoi tiết). Tuyến tu có 1 hoc hai ng dn riêng, chó và nga thường có hai ng dn. Dch tu có ý nghĩa rt quan trng ñối vi s tiêu hoá: dch tu có tác dng phân gii t 60-80% protein, gluxit, lipit ca thc ăn.

2.2.1. ðặc tính thành phn ca dch tu:

- Dch tu tinh khiết là mt cht lng trong sut, không màu, t trng = 1,008- 1,010, có phn ng kim pH = 7,8 - 8,4 (các loài gia súc khác nhau thì pH ca dch tu khác nhau: nga: 7,3 - 7,58, ln: 7,7 - 7,9, bò: 8,0). ðộ kim ca dch tu tương ng vi ñộ axit ca dch v. Nếu hn hp hai loi này vi nhau thì có th thu ñược mt dch th trung tính. ðộ kim ca dch tuỵ ñược

ñảm bo nh các mui vô cơ, ch yếu là NaHCO3. [22, tr. 135]

Một phần của tài liệu Đánh giá khả năng tiêu hoá protein của enzyme protease có trong tuỵ tạng lợn, ứng dụng trong chế tạo môi trường hottinger (Trang 25 - 28)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(105 trang)