Môi trường nuôi cấy tự nhiên: còn ñượ cg ọi là môi trường thực nghiệm là những môi trường có sẵn trong tự nhiên như sữa, nước chi ế t th ị t

Một phần của tài liệu Đánh giá khả năng tiêu hoá protein của enzyme protease có trong tuỵ tạng lợn, ứng dụng trong chế tạo môi trường hottinger (Trang 39 - 43)

bò, nước chiết các loai rau c hoc ngũ cc cha ñựng nhiu cht hu cơ vô cơ tan trong nước có thể ñáp ng ñược yêu cu v dưỡng cht ca mt s

ln vi sinh vt. Môi trường nuôi cy t nhiên có nhiu ưu ñim là r tin nhưng có nhược ñim không th biết chính xác thành phn dinh dưỡng.

Môi trường nuôi cy tng hp: Các thành phn dinh dưỡng ca môi trường

ñược biết rõ và ñược kim soát v hàm lượng và cht lượng. Môi trường này cho phép người nuôi cy vi sinh vt theo dõi mt cách d dàng tác ñộng ca cht dinh dưỡng ñối vi vi sinh vt, ñặc bit nhng loài vi sinh vt ñã ñược biết rõ. Tuy nhiên môi trường nuôi cy tng hp thường rt ñắt tin, ch s

dng cho tng loài vi sinh vt thích hp, chun b khá phc tp và tn nhiu thi gian. [19, tr. 60]

* Môi trường nuôi cy vi sinh vt trong chế to vacxin:

ðể có th thu ñược lượng ging là tế bào dinh dưỡng người ta thường to ñiu kin môi trường nuôi cy, thành phn môi trường ñảm bo ti ưu cho s sinh trưởng nhanh (tc là tăng v s lượng không to sn phm) trong trường hp này s dng phương pháp nuôi cy dch th (nuôi cy chìm). [20, tr. 44]

Trong chế to vacxin, môi trường nuôi cy vi sinh vt ñóng vai trò rt quan trng. Thông thường các loi môi trường dùng trong sn xut vacxin hin nay là môi trường t nhiên hn hp, là sn phm ca quá trình phân gii protein, gluxit hoc là nước chiết ca các t chc cơ thể ñộng vt như: cơ, gan, tim,... ; dch chiết ca cơ th như: máu, huyết thanh ; sn phm ca các

Trường ðại hc Nông nghip Hà Ni – Lun văn thc sĩ nông nghip ... 31 quá trình lên men sinh hc s dng các nguyên liu là thc vt như: mch nha, mm lúa, ngô, ñậu tương, to bin, cao nm men....

Ti xí nghip thuc thú y TW, các loi môi trường nuôi cy vi trùng hin nay ñều da trên quy trình chế to môi trường Hottinger cơ bn. Môi trường Hottinger ñược nhà khoa hc người ðức có tên là Hottinger phát minh ra vào nhng năm ñầu thế k XX. Cho ñến nay môi trường này vn ñang

ñược s dng rng rãi trong ngành vi sinh vt ñặc bit là trong chế to vacxin. Ngoài môi trường Hottinger còn có mt s thành phn khác thường dùng ñể phi hp cùng vi môi trường Hottinger như: nước gan chiết xut, nước tht bò chiết xut, nước d dày tiêu hoá, pepton, huyết thanh, máu... Các loi vi trùng khác nhau thì thành phn môi trường nuôi cy sn xut cũng khác nhau v t l phi hp các thành phn và ñộ pH môi trường thành phm.

Năm 1976, bác s thú y Nguyn Văn Lãm và cng sựñã chế to thành công môi trường Hottinger từ ñậu ph thay thế cho tht bò và ñã thu ñược công môi trường Hottinger từ ñậu ph thay thế cho tht bò và ñã thu ñược nhng kết qu nht ñịnh.

Hình 2.1. Mô t quy trình chế to vacxin vi trùng

MT Hottinger Hottinger MT kim tra, kim nghim MT thành phm nhân ging SX Vacxin MT thch thường MT nước tht MT thch máu MT nhân ging nhMT nhân ging ln sn xuMT t Ging VSV Cy g ing X canh trùng Ra chai Vacxin MT yếm khí

Kim tra thun khiết, vô trùng Vacxin

thành phm MT gi. nhân ging gc VSV Kim nghim Vacxin

Trường ðại hc Nông nghip Hà Ni – Lun văn thc sĩ nông nghip ... 32 Sơ ñồ 2.1 cho thy môi trường Hottinger ñóng mt vai trò rt quan trng khi tiến hành sn xut vacxin. T môi trường cơ bn này người ta chế

to ra các loi môi trường thành phm nuôi cy vi trùng như: môi trường ging nh, ging ln và môi trường sn xut, các loi môi trường dùng trong kim tra và kim nghim khi sn xut vacxin như: môi trường thch thường, nước tht ng, nước tht l, nước tht gan yếm khí, thch máu, thch ñếm s.

Chế to môi trường Hottinger chính là giai ñon tiêu hoá cơ cht (thu

phân protein) dưới tác dng ca enzyme protease có trong tu tng ca ln ñể

to thành các axit amin (ñạm toan) và các peptid ñơn gin. Chính vì vy hot ñộ

ca enzyme protease ñóng mt vai trò rt quan trng trong quá trình thu phân cơ cht. Hot ñộ ca enzyme là ñơn vịño lượng enzyme xúc tác quá trình phân gii hết 1 micromol cơ cht trong thi gian 1 giây ởñiu kin ti ưu (ñược gi là microkatal) . ðể xác ñịnh hot ñộ enzyme protease theo dược ñin quy ñịnh phi tiến hành phân tách enzyme ra tng loi riêng bit sau ñó tiến hành chun ñộ

phn ng thu phân ở ñiu kin ti ưu, s dng mt loi cơ cht chun (benzoylarginine ethyl este hydrochloride) có phân t lượng xác ñịnh, sau ñó so sánh vi hot ñộ ca enzyme chun theo dược ñin quy ñịnh [46, tr. 1668-1669]. Thí nghim này rt khó thc hin ti nhng cơ s không có có ñủñiu kin và trang thiết b. Thay vì phương pháp xác ñịnh hot ñộ enzyme theo dược ñin, ti các cơ s sn xut người ta thường s dng phương pháp ñánh giá hot ñộ

enzyme d dàng thc hin hơn do phương pháp này không ñòi hi các ñiu kin quá kht khe như phương pháp xác ñịnh hot ñộ.

Hin nay vic chế to môi trường nuôi cy vi sinh vt ñã tr nên d dàng hơn khi trên th trường có rt nhiu loi môi trường tng hp ñược chế sn dưới dng bt, khi s dng ch cn cân khi lượng thích hp hoà vào nước ct ñem lc vô trùng hoc hp tiêu ñộc là có th s dng ñược. Tuy nhiên giá thành ca các loi môi trường này thường cao ch có th áp dng nghiên cu trong phòng thí nghim hoc gi ging vi sinh vt. Trong sn xut ñại trà phn ln vn phi chế to môi trường theo phương pháp truyn thng vi nguyên liu sn có.

Trường ðại hc Nông nghip Hà Ni – Lun văn thc sĩ nông nghip ... 33 3. NI DUNG, NGUYÊN LIU, PHƯƠNG PHÁP

NGHIÊN CU

3.1. Ni dung nghiên cu

ðề tài ñược thc hin ti Phòng hoá nghim, Phân xưởng vacxin vi trùng thuc Xí nghip thuc thú y T.W vi các ni dung như sau:

3.1.1. ðánh giá kh năng tiêu hoá protein (hot ñộ) ca enzyme protease có

trong tu tng ly t ln giết m.

3.1.1.1. ðánh giá hot ñộ ca enzyme protease có trong tu tng ln ñược ly sau khi giết m (tu tươi). sau khi giết m (tu tươi).

3.1.1.2. ðánh giá hot ñộ ca enzyme protease có trong tu tng ln ñược bo qun ñông lnh (-10o ÷ -12oC) ti các thi ñim sau: 1, 3, 5, 7, 9, 12, 15, bo qun ñông lnh (-10o ÷ -12oC) ti các thi ñim sau: 1, 3, 5, 7, 9, 12, 15, 18 tun.

3.1.2. ng dng kết qu nghiên cu hot ñộ enzyme protease trong tu tng

ln vào vic chế to môi trường Hottinger sn xut vacxin

Giai ñon (2007 – 2008): môi trường ñược sn xut theo cách truyn thng: t l s dng tu tng khi tiêu hoá cơ cht là cốñịnh = 0,13 (1,3 kg tu

tng + 10 kg tht bò + 100 lit nước), enzyme protease có trong tu tng ln chưa ñược kim tra ñánh giá hot ñộ trước khi chế to môi trường Hottinger.

Giai ñon (2009 – 2010): Enzyme protease có trong tu tng ln trước khi s dng trong quá trình tiêu hoá protein chế to môi trường Hottinger ñã ñược

ñánh giá hot ñộ và xác ñịnh t l phi hp thích hp gia tu tng vi cơ

cht (tht bò).

3.1.2.1. So sánh các ch tiêu hoá nghim môi trường Hottinger hai giai

ñon SX: (2007 – 2008) và (2009 – 2010).

3.1.2.2. Kho sát s tương quan gia các thành phn trong môi trường Hottinger ñược sn xut hai giai ñon SX (2007 – 2008) và (2008 – 2009) Hottinger ñược sn xut hai giai ñon SX (2007 – 2008) và (2008 – 2009)

Trường ðại hc Nông nghip Hà Ni – Lun văn thc sĩ nông nghip ... 34 bng phương trình hi quy.

- Tương quan gia hàm lượng ñam toan và tng ñạm giai ñon SX (2007 – 2008) và (2009 – 2010)

- Tương quan gia hàm lượng axit amin tryptophan và ñạm toan giai

ñon SX (2007 – 2008) và (2009 – 2010).

3.1.2.4. ðánh giá cht lượng môi trường Hottinger thông qua ch s vi sinh: kho sát, so sánh s lượng vi trùng/ml canh trùng ca các lô vacxin t huyết kho sát, so sánh s lượng vi trùng/ml canh trùng ca các lô vacxin t huyết trùng gia cm ti thi ñim thu hoch sn xut hai giai ñon (2007 – 2008) và (2009 – 2010).

3.2. Nguyên liu, hoá cht, dng c nghiên cu

3.2.1. Nguyên liu

3.2.1.1. Tuy tng ln

Một phần của tài liệu Đánh giá khả năng tiêu hoá protein của enzyme protease có trong tuỵ tạng lợn, ứng dụng trong chế tạo môi trường hottinger (Trang 39 - 43)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(105 trang)