Nghiên cứu tinh sạch tính chất đặc trưng và ứng dụng của acetylcholinesterase từ ốc bươu vàng

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  - LÊ MINH TRÍ NGHIÊN CỨU TINH SẠCH, TÍNH CHẤT ĐẶC TRƯNG VÀ ỨNG DỤNG CỦA ACETYLCHOLINESTERASE TỪ ỐC BƯƠU VÀNG LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC H À NỘI, 2011 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  LÊ MINH TRÍ NGHIÊN CỨU TINH SẠCH, TÍNH CHẤT ĐẶC TRƯNG VÀ ỨNG DỤNG CỦA ACETYLCHOLINESTERASE TỪ ỐC BƯƠU VÀNG Chuyên ngành Mã số : Hoá sinh học : 62.42.30.15 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC GS.TS NGUYỄN QUỐC KHANG PGS.TS BÙI PHƯƠNG THUẬN H À NỘI, 2011 MỤC LỤC Trang MỞ ĐẦU CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Ốc bƣơu vàng 1.1.1 Tác hại lợi ích ốc bươu vàng 1.1.1.1 Tác hại ốc bươu vàng 1.1.1.2 Lợi ích ốc bươu vàng 1.1.2 Các biện pháp diệt ốc bươu vàng 1.1.3 Các biện pháp diệt ốc bươu vàng Việt Nam 1.2 Acetylcholinesterase (AChE) 1.2.1 Giới thiệu chung Acetylcholinesterase (AChE) 1.2.1.1 Phân loại 1.2.1.2 Cấu trúc trung tâm hoạt động AChE 1.2.2 Vai trò AChE hoạt động thần kinh 14 1.2.3 Cơ chế ức chế AChE 16 1.2.4 Nghiên cứu khả sử dụng AChE để phát thuốc trừ sâu 21 1.2.5 Ứng dụng AChE 21 1.3 Chất ức chế AChE 22 1.3.1 Chất ức chế AChE từ thiên nhiên 22 1.3.2 Các chất ức chế tổng hợp hóa học 23 1.3.2.1 Các chất độc hóa học dùng chiến tranh 23 1.3.2.2 Thuốc bảo vệ thực vật 24 CHƢƠNG ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 30 2.1 Đối tƣợng nghiên cứu 30 2.2 Phƣơng pháp 30 2.2.1 Định lượng protein 30 2.2.2 Tách chiết enzyme 30 2.2.3 Tinh enzyme 31 2.2.4 Kiểm tra độ AChE điện di biến tính gel 32 polyacrylamide (SDS - PAGE) 2.2.5 Các phương pháp xác định hoạt độ enzyme AChE 33 2.2.6 Phương pháp cố định AChE màng polymer đồng trùng hợp 35 2.2.7 Phương pháp kế hoạch hoá thực nghiệm xử lý số liệu 35 CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 37 3.1 Khảo sát hàm lƣợng AChE số đối tƣợng nghiên cứu 37 3.2 Kết khảo sát đặc điểm sinh học ốc bƣơu vàng 39 3.2.1 Kích thước vỏ tỉ lệ giới tính 39 3.2.2 Ảnh hưởng yếu tố môi trường tới đặc điểm sinh thái ốc bươu vàng 40 3.2.2.1 Ảnh hưởng bùn tới khả đẻ trứng ốc bươu vàng 40 3.2.2.2 Ảnh hưởng độ sâu lớp nước đến khả đẻ trứng tỉ lệ chết 41 ốc bươu vàng 3.2.3 Hàm lượng AChE ốc bươu vàng qua thời kỳ năm 43 3.2.4 Lựa chọn nguồn tách chiết tinh AChE 46 3.3 Tách chiết, nghiên cứu tính chất AChE từ ốc bƣơu vàng 47 3.3.1 Tinh AChE sắc ký trao đổi ion 49 3.3.2 Kiểm tra độ xác định KLPT AChE phương pháp điện di Gel SDS-PAGE 50 3.3.3 Quy trình tách chiết tinh AChE 51 3.3.4 Xác định khối lượng phân tử AChE từ ốc bươu vàng 54 3.3.4.1 Xác định khối lượng phân tử AChE phương pháp HPLC 54 3.3.4.2 Xác định hoạt độ thuỷ phân acetylcholin chế phẩm AChE từ ốc 56 bươu vàng 3.4 Ảnh hƣởng yếu tố môi trƣờng đến hoạt độ AChE từ ốc 57 bƣơu vàng 3.4.1 Ảnh hưởng pH đến hoạt độ AChE 57 3.4.2 Độ bền pH 59 3.4.3 Ảnh hưởng nhiệt độ đến hoạt độ AChE 59 3.4.4 Độ bền nhiệt 61 3.4.5 Sự biến đổi hoạt độ AChE theo thời gian 61 3.4.6 Ảnh hưởng số ion kim loại gốc phospho peroxide (P2O5) 62 đến hoạt độ AChE 3.5 Ảnh hƣởng số chế phẩm trừ sâu đến hoạt độ AChE từ ốc 64 bƣơu vàng 3.5.1 Ảnh hưởng số chế phẩm thảo mộc diệt ốc bươu vàng đến 65 hoạt độ AChE 3.5.2 Ảnh hưởng flavonoid tổng số chiết từ số thuốc đến 66 hoạt độ AChE 3.5.3 Ảnh hưởng số loại thuốc trừ sâu đến hoạt độ AChE từ ốc 67 bươu vàng 3.5.3.1 Ảnh hưởng thuốc trừ sâu Ofatox (Dipterex, Dylox) đến hoạt 68 độ AChE 3.5.3.2 Ảnh hưởng thuốc trừ sâu Secsaigon đến hoạt độ AChE 70 3.5.3.3 Ảnh hưởng thuốc diệt ốc bươu vàng Dioto 250EC đến hoạt độ 72 AChE 3.5.3.4 Ảnh hưởng thuốc trừ sâu Topsin đến hoạt độ AChE 73 3.6 Nghiên cứu động học ức chế AChE 74 3.6.1 Các thông số động học đặc trưng VM, KM AChE 74 3.6.2 Nghiên cứu ảnh hưởng ức chế flavonoid từ thuốc 76 khác 3.6.3 Nghiên cứu ảnh hưởng ức chế flavonoid chiết từ Bạch 77 đồng nữ 3.7 Xây dựng phƣơng pháp phát HCBVTV sở sử dụng 81 AChE 3.7.1 Nghiên cứu, ứng dụng AChE tinh phát số loại thuốc 81 trừ sâu phospho hữu 3.7.2 Nghiên cứu cố định AChE màng polymer đồng trùng hợp KẾT LUẬN 86 87 ĐỀ NGHỊ 88 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC ĐÃ CƠNG BỐ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 89 TÀI LIỆU THAM KHẢO 90 MỞ ĐẦU Ốc bươu vàng loài sinh vật du nhập vào nước ta từ năm 80 kỷ trước sinh sôi diện rộng gây hại cho trồng, hoa màu; đặc biệt lúa Ốc bươu vàng có nguồn gốc từ Trung Nam Mỹ thích ứng nhanh với điều kiện khí hậu nhiệt đới nóng ẩm Việt Nam Ốc bươu vàng có mặt khắp nơi: đồng ruộng, kênh mương, ao hồ,… Vì thức ăn chủ yếu lúa nên ốc bươu vàng trở thành sinh vật phá hoại lúa nghiêm trọng Đến nay, diệt ốc bươu vàng triệt để việc dù hàng năm Nhà nước tốn nhiều tỷ đồng Bên cạnh tác hại, khía cạnh thực tiễn đó, ốc bươu vàng lại động vật có lợi Ốc bươu vàng nguồn thức ăn có hiệu kinh tế cao chăn ni nuôi trồng thuỷ hải sản; đặc biệt nuôi tơm, chúng có hàm lượng dinh dưỡng can-xi cao Về mặt hóa sinh học, ốc bươu vàng nguồn nguyên liệu tự nhiên giàu Acetylcholinesterase (AChE) AChE enzyme đóng vai trị quan trọng vận truyền tín hiệu hệ thần kinh động vật Trung tâm hoạt động AChE có nhóm chức cấu trúc không gian phù hợp với hợp chất phospho hữu nên dễ kết hợp với chất hoạt tính nhanh Nắm tính chất này, người ta sản xuất chất ức chế AChE phospho hữu làm chất độc hóa học vơ nguy hiểm sử dụng chiến tranh Tabun, Cyclosarin, Sarin, Soman, VX làm thuốc bảo vệ thực vật sử dụng sản xuất nông nghiệp Sau sử dụng, chất độc hóa học tồn dư lại mơi trường đất, nước, sản phẩm nông nghiệp (thực phẩm, rau, củ, v.v…) Chúng chất vô độc hại môi trường sinh thái, ảnh hưởng nghiêm trọng tới sức khỏe người, động vật tác nhân gây nhiều bệnh nguy hiểm, có bệnh ung thư Vì vậy, việc phân tích phát nhanh chất độc hóa học cần thiết, đặc biệt ngày chất độc người dân sử dụng tràn lan Dựa tính chất chất ức chế, nghiên cứu sử dụng enzyme AChE làm phương tiện phân tích, phát nhanh chất độc hóa học phospho hữu Kế thừa thành nghiên cứu ốc bươu vàng nhà khoa học giới, tiến hành nghiên cứu đề tài: “Nghiên cứu tinh sạch, tính chất đặc trưng ứng dụng Acetylcholinesterase từ ốc bươu vàng” Mục đích đề tài tận dụng nguồn nguyên liệu dồi nước; nghiên cứu, khai thác, ứng dụng AChE làm phương tiện phát nhanh số loại thuốc trừ sâu phospho hữu tồn dư lương thực, thực phẩm Với mục đích nêu trên, đề tài chúng tơi khơng có ý nghĩa khoa học thực tiễn mà cịn có ý nghĩa mặt kinh tế, sử dụng hợp lý tài nguyên; đặc biệt đáp ứng nhu cầu nâng cao hiệu bảo vệ môi trường sinh thái Để đạt mục tiêu nêu tiến hành thực nội dung sau: Tìm hiểu đặc điểm sinh học ốc bươu vàng, đặc biệt enzyme AChE từ đối tượng Khảo sát điều kiện sinh thái, môi trường sống ảnh hưởng đến khả sinh AChE ốc bươu vàng Nghiên cứu tinh tính chất đặc trưng AChE từ ốc bươu vàng Nghiên cứu ảnh hưởng số loại chất độc hóa học tới hoạt độ AChE từ ốc bươu vàng Nghiên cứu sử dụng AChE để xây dựng phương pháp phát nhanh số loại thuốc trừ sâu phospho hữu tồn dư lương thực, thực phẩm CHƢƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Ốc bƣơu vàng Ốc bươu vàng có tên khoa học Pomacea canaliculata thuộc họ Pilidae, lớp chân bụng (Gastropoda), ngành thân mềm (Mollusca), có nguồn gốc từ Trung Nam Mỹ [15, 24] Ốc trưởng thành có kích thước lớn, dạng mập trịn gồm đầu, thân chân Đầu có hai đơi xúc tu (một đôi dài đôi ngắn), thân nằm chân, khối xoắn ẩn kín vỏ; chân rộng, hình đĩa, màu trắng kem nằm phía bụng, mặt lưng chân có nắp vỏ che đậy, đầu chân thường thị ngồi vỏ di chuyển Toàn thể ốc nằm lớp vỏ Con đực có nắp miệng nhơ gợn sóng, có nắp miệng phẳng lõm xuống Sau thụ tinh xong, ốc bươu vàng thường đẻ trứng vào chiều tối Khi đẻ, ốc leo lên giá thể cao mặt nước, trứng có màu hồng bám thành chùm giá thể lần đẻ có khoảng 150 - 500 trứng (1 chùm); sau khoảng 12 - 15 ngày trứng nở nở hết - ngày Tỉ lệ nở khoảng 70%, tỉ lệ sống sau 10 ngày tuổi khoảng 80% Tuổi thành thục sớm (khoảng 100 ngày sau nở), thời gian tái phát dục ngắn, khoảng ngày Tuổi thọ năm Trong quần đàn, tỉ lệ đực/cái khoảng 1/4 Ốc bươu vàng lồi có tốc độ sinh sản nhanh, kích thước buồng trứng phản ánh kích thước thể Có nghĩa số lượng trứng nhiều, buồng trứng lớn kích thước lớn [54] Kích thước thể ốc phản ánh điều kiện môi trường sống là: mật độ cá thể, nguồn thức ăn Tốc độ sinh trưởng, phát triển ốc bươu vàng nhanh hay chậm tuỳ thuộc vào loại thức ăn môi trường sinh sống Điều kiện sinh thái, khí 56 Filippos V.F., Trantas Emmanouil, Douglas Carl, Vollmer Guenter, Kretzschmar Georg, Panopoulos Nickolas (2007), “Biotechnology of flavonoids and other phenylpropanoid-derived natural products”, Part I: “Chemical diversity, impacts on plant biology and human health”, Biotechnology Journal, (10), pp 1214 57 Filippos V.F., Trantas Emmanouil, Douglas Carl, Vollmer Guenter, Kretzschmar Georg, Panopoulos Nickolas (2007), “Biotechnology of flavonoids and other phenylpropanoid-derived natural products”, Part II: “Reconstruction of multienzyme pathways in plants and microbes”, Biotechnology Journal, (10), pp 1235 58 Forget J., Beliaeff B and Bocquené B (2003), “Acetylcholinesterase activity in copepods (Tigriopus brevicornis) from the Vilaine River estuary, France, as a biomarker of neurotoxic contaminants”, Aquatic Toxicology, vol.62, issue 3, 12 February, pp 195-204 59 Francis M.M., Evans S.P., Jensen M., Madsen D.M., Mancuso J., Norman K.R., Maricq A.V (2005), “The Ror receptor tyrosine kinase CAM-1 is required for ACR-16-mediated synaptic transmission at the C elegans neuromuscular junction”, Neuron., 46, pp 581-594 60 Fukuto T.R (1990), Mechanism of action of organophosphorus and carbamate insecticides, Environ Health Perspect, July, 87, pp 245-254 61 Fukuto T.R (1990), Mechanism of action of organophosphorus and carbamate insecticides, Environ Health Perspect, July, 87, pp 245-254 62 Gamal S ElShafei, I.N Nasi, Ayman S.M Hassan and Mohammad S (2009), “Kinetics and thermodynamics of adsorption of cadusafos 96 on soils”, Journal of Hazardous Materials, vol.172, issues 2-3, 30 December, pp 1608-1616 63 Gammon D.W et al (1981), “Two classes of pyrethroid action in the cockroach”, Pestic Biochem Physiol., 15, pp 181-191 64 Georgievski Z., Koklanis K., Leone J (2008), “Fixation behaviour in the treatment of amblyopia using atropine”, Clinical and Experimental Ophthalmology, 36 (Suppl 2), pp A764-A765 65 Ghayur M.N., Khan H., Gilani A.H (2007), “Antispasmodic, bronchodilator and vasodilator activities of (+) - catechin, a naturally occurring flavonoid”, Arch Pharm Res., Aug, 30 (8), pp 970-975 66 Ghosal S., Saini K.S and Rasdan S (1985), “Crinum alkaloids: their chemistry and biology”, Phytochemistry, 24, pp 2141-2156 67 Ghosal S and Singh S.K (1986), “Chemical constituents ofAmarilidaceae Part 24 Crinafolin and crinafolidin, two antitumor alkaloids from Crinum latifolium”, J Chem Res (S), pp 312-313 68 Guoyi Ma et al (2007), “Pharmacological Effects of Ephedrine Alkaloids on Human {alpha}1- and {alpha}2-Adrenergic Receptor Subtypes”, J Pharmacol Exp Ther., nr 322, pp 214-221 69 Hazekamp A (2001), “Robert Verpoorte and Ampai Panthong Isolation of a bronchodilator flavonoid from the Thai medicinal plant”, Clerodendrum petasites, Journal of Ethnopharmacology, volume 78, issue 1, November, pp 45-49 70 He J., Xuan-Qin Chen, Ming-Ming Li, Yu Zhao, Gang Xu, Xiao Cheng, Li-Yan Peng, Min-Jin Xie, Yong-Tang Zheng, Yi-Ping Wang and QinShi Zhao (2009), “Lycojapodine A, a Novel Alkaloid from Lycopodium 97 japonicum”, Org Lett., 11 (6), pp 1397-1400 71 He X.C., Yu C.L., Bai D.L (2003), “Studies on analogues on huperzine A for treatment of senile dementia Asymetric total synthesis of 14-nor-huperzine A and its inhibitory activity of acetylcholinesterase”, Yao Hsueh Hsueh Pao., 38, pp 346-349 72 Hirasawa Y., Morita H., Shiro M., Kobayashi J (2003), “Sieboldine A, a novel tetracyclic alkaloid from Lycopodium sieboldii, inhibiting acetylcholinesterase”, Org Lett., 5, pp 3991-3993 73 Hostettmann K., Borloz A., Urbrain A., Marston A (2006), “Natural product inhibitors of acetylcholinesterase”, Curr Org Chem., 10, pp 825-847 74 Houghton P.J., Ren Y.H., Howes M.J (2006), “Acetylcholinesterase inhibitors from plants and fungi”, Nat Prod Rep., 23, pp 181-199 75 Hussein A.S., Michael E Grigg and Murray E Selkirk (1999), “Nippostrongylus brasiliensis: Characterisation of a Somatic Amphiphilic Acetylcholinesterase with Properties Distinct from the Secreted Enzymes”, Experimental Parasitology, volume 91, issue 2, February, pp 144-150 76 Ingkaninan K., Changwijit K and Suwanborirux K (2006), “Vobasinyl-iboga bisindole alkaloids, potent acetylcholinesterase inhibitors from Tabernaemontana divaricata root”, J Pharm Pharmacol., 58, pp 847-852 77 Inglis F (2002), “The tolerability and safety of cholinesterase inhibitors in the treatment of dementia”, Int J Clin Pract., (127), pp 45-63 78 Jang C.H., Eun J.S., Park H.W., Seo S.M., Yang J.H., Leem K.H., Oh 98 S.H., Oh C.H., Baek N.I., Kim D.K (2003), “An acetylcholinesterase inhibitor from the leaves of Securinega suffruticosa”, Korean J Pharmacogn, 34, pp 14-17 79 Jennings N.A., Pezzementi L., Lawrence A.L., Watts S.A (2008), “Acetylcholinesterase in the sea urchin Lytechinus variegatus: characterization and developmental expression in larvae”, Comp Biochem Physiol B., Biochem Mol Biol., Mar, 149 (3), pp 401-409 80 Ji H.F and Zhang H.Y (2006), “Theoretical evaluation of flavonoids as multipotent agents to combat Alzheimer's disease”, J Mol Struct - Theochem, 767, pp 3-9 81 Jiunn-Wang Liao, Jaw-Jou Kang, Shing-Hwa Liu, Chian-Ren Jeng, Yu-Wen Cheng, Chien-Ming Hu, San-Fu Tsai, Shun-Cheng Wang and Victor-Fei Pang (2000), “Effects of Cartap on Isolated Mouse Phrenic Nerve Diaphragm and Its Related Mechanism”, Toxicological Sciences, 55, pp 453-459 82 Kalauni S.K., Choudhari M.Y., Shaheen F., Manandhar M.D., Rahman A.U., Gewali M.B., Khalid A (2001), “Steroidal alkaloids from the leaves of Sarcococca coriacea of Nepalese origin”, J Nat Prod., 64, pp 842-844 83 Kalauni S.K., Choudhary M.I., Khallid A., Manandhar M.D., Dshaheen F., Rahman A.U., Gewali M.B (2002), “New cholinesterase inhibiting steroidal alkaloids from the leaves od Sarcococca coriacea of Nepalese origin”, Chem Pharm Bull., 50, pp 1423-1426 99 84 Kamil Kuca, Lucie Musilova, Jiri Palecek, Vladimir Cirkva, Martin Paar, Kamil Musilek, Martina Hrabinova, Miroslav Pohanka, Jana Zdarova Karasova (2009), “Novel Bisquaternary Oximes Reactivation of Acetylcholinesterase and Butyrylcholinesterase Inhibited by Paraoxon”, Molecules., 14 (12), pp 4915-4921 85 Kato L., Braga R.M., Koch I and Kinoshita L.S (2002), “Indole alkaloids from Rauvolfia bahiensis ADC (Apocynaceae)”, Phytochemistry, 60, pp 315-320 86 Khang S.Y., Lee K.Y., Sung S.H., Park M.J., Kim Y.C (2001), “Coumarins isolated from Angelica gigas inhibit acetylcholinesterase: structure-activity relationships”, J Nat Prod., 64, pp 683-685 87 Kim H., Rogers M.J., Richmond J.E., McIntire S.L (2004), “SNF-6 is an acetylcholine transporter interacting with the dystrophin complex in Caenorhabditis elegans”, Nature, 430, pp 891-896 88 Kim W.G., Cho K.M., Lee C.K., Yoo I.D (2002), “Terreulactone A, a novel sesquiterpenoid with anti-acetylcholinesterase activity from Arpergillus terreus”, Tetrahedron Lett., 43, pp 3197-3198 89 Kristoff G., Noemi R Verrengia Guerrero and Adriana C Cochón (2010), “Inhibition of cholinesterases and carboxylesterases of two invertebrate species, Biomphalaria glabrata and Lumbriculus variegatus, by the carbamate pesticide carbaryl”, Aquatic Toxicology, volume 96, issue 2, 31 January, pp 115-123 90 Liston D.R., Jann A Nielsen, Anabella Villalobos, Douglas Chapin, Shawn B Jones, Sean T Hubbard, Ismail A Shalaby, Andres Ramirez, Deane Nason and Frost White W (2004), “Pharmacology 100 of selective acetylcholinesterase inhibitors: implications for use in Alzheimer's disease”, European Journal of Pharmacology, volume 486, issue 1, 13 February, pp 9-17 91 Liu L., Sun J.X (2005), “Advances on study of organophosphate poisoning prevented” by Huperzine A, Wei Sheng Yan Jiu, Mar, 34 (2), pp 224-226 92 Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L and Randall R.J (1951), “Protein measurement with the Folin phenol reagent”, J Biol Chem., 193, pp 265-275 93 Matthies D.S., Fleming P.A., Wilkes D.M., Blakely R.D (2006), “The Caenorhabditis elegans choline transporter CHO-1 sustains acetylcholine synthesis and motor function in an activity-dependent manner”, J Neurosci., 26, pp 6200-6212 94 Meshorer E., Soreq H (2006), “Virtues and woes of AChE alternative splicing in stress-related neuropathologies”, Trends Neurosci., 29 (4), pp 216-224 95 Millard C.B., Kryger G., Ordentlich A., Greenblatt H.M., Harel M., Raves M.L., Segall Y., Barak D., Shafferman A., Silman I., Sussman J.L (1999), “Crystal structures of aged phosphonylated acetylcholinesterase: nerve agent reaction products at the atomic level”, Biochemistry, 38, pp 7032-7039 96 Monnerat C., De Souza J.J., Mathias L., Braz-Filho R and Vieira I.J.C (2005), “A new indole alkaloid isolated from Tabernaemontana hystrix Steud (Apocynaceae)”, J Braz Chem Soc., 16, pp 1331-1335 101 97 Monteiro M., Quintaneiro C., Morgado F., Soares A.M.V.M and Guilhermino L (2005), “Characterization of the cholinesterases present in head tissues of the estuarine fish Pomatoschistus microps: Application to biomonitoring”, Ecotoxicology and Environmental Safety, volume 62, issue 3, November, pp 341-347 98 NC-IUBMB (1992), Nomenclature Committee of the International Union of Biochemistry and Molecular Biology (NC-IUBMB) Enzyme Nomenclature Recommendations 99 Nakamura M., Igarashi T., Yamada S and Aizawa S (2000), “Fluorometric determination of Ethofenprox in water by using solidphase extraction Fresenius”, Journal of Analytical Chemistry (Springer Berlin/Heidelberg), volume 367, Number 7/July, pp 658-660 100 Oláh S., Füle M., Komlósi G et al (2009), “Regulation of cortical microcircuits by unitary GABA-mediated volume transmission”, Nature, 461, pp 1278-1281 101 Orhan I., Sener B., Choudhary M.I., Khalid A (2004), “Acetylcholinesterase and butyrylcholinesterase inhibitory activity of some Turkish medicinal plants”, J Ethnopharmacol, 91, pp 57-60 102 Pakaski M., Kasa P (2003), “Role of acetylcholinesterase inhibitors in the metabolism of amyloid precursor protein”, Current drug targets, CNS and neurological disorders, (3), pp 163-171 103 Palmer K., Berger A.K., Monastero R., Winblad B., Bäckman L., Fratiglioni L (2007), “Predictors of progression from mild cognitive impairment to Alzheimer disease”, Neurology, 68 (19), pp 1596-1602 104 Panthong A., Kanjanapothi D., Taesotikul T., Wongcome T and 102 Reutrakul V (2003), Journal of Ethnopharmacology, volume 85, issue 1, March, pp 151-156 105 Pereira C.G., Marques M.O.M., Barreto A.S., Siani A.C., Fernandes E.C and Meireles M.A.A (2004), “Extraction of indole alkaloids from Tabernaemontana catharinensis using supercritical CO2 plus ethanol: an evaluation of the process variables and the raw material origin”, J Supercrit Fluids, 30, pp 51-61 106 Perola E., Luciano Cellai, Doriano Lamba, Luigi Filocamo and Mario Brufani (1997), “Long chain analogs of physostigmine as potential drugs for Alzheimer's disease: new insights into the mechanism of action in the inhibition of acetylcholinesterase”, Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Protein Structure and Molecular Enzymology, volume 1343, issue 1, 14 November, pp 41-50 107 Perry N.S.L., Houghton P.J., Theobald A., Jenner P., Perry E.K (2000), “In-vitro inhibition of human erythrocyte acetylcholinesterase by Salvia lavandulaefolia essential oil and constituent terpenes”, J Pharm Pharmacol, 52, pp 895-902 108 Pressley T.A and Longbottom J.E (1982), The Determination of Benomyl and Carbendazim in Industrial and Municipal Wastewater, Method 61, EPA-600/4-82-012, PB82-156068 109 Putkome S., Voravit Cheevaporn and Herbert F Helander (2008), “Inhibition of Acetylcholinesterase Activity in the Golden Apple Snail (Pomacea canaliculata Lamarck) Exposed to Chlorpyrifos, Dichlorvos or Carbaryl Insecticides”, Environment Asia, 2, pp 15-20 110 Qadri Y.H., Swamy A.N., Rao J.V (1994), “Species differences in 103 brain acetylcholinesterase response to monocrotophos in vitro”, Ecotoxicol Environ Saf., Jun, 28 (1), pp 91-98 111 Qing Li., Ari N., Kazuyoshi T., Tomoyuki K (2004), “Dimethyl 2,2-dichlorovinyl phosphate (DDVP) markedly inhibits activities of natural killer cells, cytotoxic T lymphocytes and lymphokineactivated killer cells via the Fas-ligand/Fas pathway in perforinknockout (PKO) mice”, Toxicology, vol.204, no1, pp 41-50 112 Qizilbash N., Whitehead A., Higgins J et al (1998), “Cholinesterase inhibition for Alzheimer disease: a meta-analysis of the tacrine trials”, J.A.M.A., 280 (20), pp 1777-1782 113 Racchi M., Mazzucchelli M., Porrello E., Lanni C., Govoni S (2004) “Acetylcholinesterase inhibitors: novel activities of old molecules”, Pharmacol Res., 50, pp 441-451 114 Rahman A.U., Parveen S., Khalid A., Farooq A., Choudhary M.I (2001), “Acetyl and butyrylcholinesterase-inhibiting triterpenoid alkaloids from Buxus papillosa”, Phytochemistry., 58, pp 963-968 115 Rahman A.U., Haq Z.U., Khalid A., Anjum S., Khan M.R., Choudary M.I (2002), “Preganane-type steroidal alkaloids of Sarcococca saligna: a new class of cholinesterase inhibitors”, Helv Chim Acta., 85, pp 678-687 116 Rieger F., Bon S., Massoulié J., Cartauld J., Picard B., Benda P (1976), “Torpedo marmorata acetylcholinesterase; a comparison with the Electrophorus electricus enzyme Molecular forms, subunits, electron microscopy, immunological relationship”, Eur J Biochem., 15, 68 (2), pp 513-521 104 117 Ruiz C.A, Rotundo R.L, (2009), “Dissociation of transcription, translation, and assembly of collagen-tailed acetylcholinesterase in skeletal muscle”, J Biol Chem., 284 (32), pp 21488-21495 118 Russell W.S., Siân M Henson, Ayman S Hussein, John R Tippins and Murray E Selkirk (2000), “Nippostrongylus brasiliensis: Infection Induces Upregulation of Acetylcholinesterase Activity on Rat Intestinal Epithelial Cells”, Experimental Parasitology, volume 96, issue 4, December, pp 222-230 119 San Martins R., Claudio Gelmi, Jaime Vargas de Oliveira, Jos Luis Galo, Honorio Pranto (2009), “Use of a saponin based molluscicide to control Pomacea canaliculata snails in Southern Brazil”, Natural product communications, volume ISSN:1934-578X ISO, Publication Date 2009-11-16, Completed Date 2010-01-04, pp 1327-1330 120 Sarin (GB) (2009), Emergency Response Safety and Health Database, National Institute for Occupational Safety and Health, Accessed, April 20 121 Satcharoen V., Neville J McLean, Stephen C Kemp, Nicholas P Camp and Richard C.D Brown (2007), “Stereocontrolled Synthesis of (-)-Galanthamine”, Org Lett., (10), pp 1867-1869 122 Schmaltz F (2006), “Neurosciences and Research on Chemical Weapons of Mass Destruction in Nazi Germany”, Journal of the History of the Neurosciences, 15 (3), pp 186-209 123 Schwartz A.R., Pizon A.F., Brooks D.E (2008), “Dextromethorphaninduced serotonin syndrome”, Clinical Toxicology (Philadelphia Pa.), 46 (8), pp 771-773 105 124 Shen T., Tai K., Henchman R.H., McCammon J.A (2003), “Molecular dynamics of acetylcholinesterase”, Acc Chem Res., 35 (6), pp 332-340 125 Shigeaki Kobayashi et al (2003), “The Sympathomimetic Actions of l-Ephedrine and d-Pseudoephedrine: Direct Receptor Activation or Norepinephrine Release?”, Anesth Analg., 97, pp 1239-1245 126 Silvah D.A.C., Guiherme H.S., Fanta E., Bacilam M (1993), “Sublethal effects of the organophosphate Folidol 600 (methyl parathion) on Callichthys callichthys (Pisces:Teleostei)”, Comparative pharmacology and toxicology , vol.105, no2, pp 197-201 127 Small B.J., Gagnon E., Robinson B (April 2007), “Early identification of cognitive deficits: preclinical Alzheimer's disease and mild cognitive impairment”, Geriatrics, 62 (4), pp 19-23 128 Spencer J.P.E (2008), “Flavonoids: modulators of brain function?”, The British journal of nutrition, 99, E Suppl1, pp ES60-ES77 129 Strelitz F (1944), “Studies on cholinesterase Purification of pseudo-cholinesterase from horse serum”, Biochem J., 38, pp 86-88 130 Tabun (GA) (2009), Nerve Agent, National Institute for Occupatinal Safety and Health, Emergency Response Safety and Health Database, Accessed, April 30 131 Tadeusz Aniszewski (2007), Alkaloids - secrets of life, Amsterdam, pp 90-110 132 Tai K., Shen T., Henchman R.H., Bourne Y., Marchot P., Mc Cammon J.A (2002), “Mechanism of acetylcholinesterase inhibition by fasciculin: a 5-NS molecular dynamic simulation”, J Amer Chem 106 Soc., 124, pp 6153-6161 133 Takahashia T., Naoya Hamaueb N (2010), “Molecular characterization of Hydra acetylcholinesterase and its catalytic activity”, Edited by Michael R Bubb., volume 584, issue 3, pp 511-516 134 Tan C.H., Chen G.F., Ma X.Q., Jiang S.H., Zhu D.Y (2002), “Huperzine R, a novel 15-carbon lycopodium alkaloid from Huperzia serrata”, J Nat Prod., 65, pp 1021-1022 135 Tomizawa C., Uesugi Y., Ueyama I., Yamamoto H (1977), “Movement and phosphorothiolate metabolism (Kitazin P) of S-benzyl and O,O-diisopropyl O-ethyl S,S-diphenyl phosphorodithiolate (edifenphos) in various types of soil”, J Environ Sci Health, 11, pp 231-251 136 Touchon J., Bergman H., Bullock R., Rapatz G., Nagel J., Lane R (2006), “Response to rivastigmine or donepezil in patients with Alzheimer’s disease and symptoms suggestive of concomitant Lewy body pathology”, Curr Med Res Opin., 22, pp 49-59 137 Trevisan M.T.S., Macedo F.V.V (2003), “Selecao de plantas com atividade anticolinesterase para tratamento da doenca de Alzheimer”, Quim Nova, 26, pp 301-304 138 UAF (2004), Chemical composition of flesh Golden Apple Snail (GAS), Animal nutrition Laboratory of University of Agriculture and Forestry UAF (Nong Lam University), Ho Chi Minh City, Vietnam 139 Waldemar G., Dubois B., Emre M et al (2007), “Recommendations for the diagnosis and management of Alzheimer's disease and other disorders associated with dementia: EFNS guideline”, Eur J Neurol., 107 14 (1), pp 21-26 140 Wang B.S et al (2009), “Efficacy and safety of natural acetylcholinesterase inhibitor huperzine A in the treatment of Alzheimer's disease: an updated meta-analysis”, J Neural Transm., vol.116, no4, pp 457-465 141 Wang H., Wei Z., Song Y., Zhang L., Chen H (2009), “Efficacy and safety of natural acetylcholinesterase inhibitor huperzine a in the treatment of Alzheimer's disease: an updated meta-analysis”, Journal of neural transmission (Vienna, Austria), 116 (4), pp 457-465 142 Wang C., Zhang N., Ling Li, Quan Zhang, Meirong Zhao (2009), “Enantioselective interaction with acetylcholinesterase of an organophosphate insecticide fenamiphos”, Published Online: Nov 143 Weinstock M and Groner E (2008), “Rational design of a drug for Alzheimer's disease with cholinesterase inhibitory and neuroprotective activity”, Chemico-Biological Interactions, volume 175, issues 1-3, 25 September, pp 216-221 144 Wiener S.W., Hoffman R (2004), “Nerve Agents: A Comprehensive Review”, Journal of Intensive Care Medicine, 19, 1, pp 22-37 145 Worek F., Eyer P., Aurbek N., Szinicz L., Thiermann H (2007), “Recent advances in evaluation of oxime efficacy in nerve agent poisoning by in vitro analysis”, Toxicol Appl Pharmacol., Mar, 219 (2-3), pp 226-234 146 Yoichi Yusa (2007), “Causes of variation in sex ratio and modes of sex determination in the Mollusca - an overview”, American Malacological Bulletin, 23 (1), pp 89-98 108 147 Zarotsky V., Sramek J.J., Cutler N.R (2003), “Galanthamine hydrobromide: an agent for Alzheimer's disease” Am J HealthSystem Pharmacist., 60, pp 446-452 148 Xiaowen Gong et al (2009), “RanBPM is an acetylcholinesteraseinteracting protein that translocates into the nucleus during apoptosis”, Acta Biochim Biophys Sin., 41, pp 883-891 149 Zhang Q., Tang X.C (2002), “Effects of huperzine A on acetylcholinesterase isoforms in vitro: comparison with tacrine, donezepil, rivastigmine and physostigmine”, Eur J Pharmacol., 455, pp 101-107 150 Zhang H.Y., Liang Y.Q., Tan X.C., He X.C., Bai D.L (2002), “Stereoselectivities of enantiomers of huperzine A in protection against amyloid-25,35-induced injury in PC12 and NG108-15 cells and cholinesterase inhibition in mice”, Neurosci Lett., 317, pp 143-146 151 Zhao Q and Xi Can Tang (2002), “Effects of huperzine A on acetylcholinesterase isoforms in vitro: comparison with tacrine, donepezil, rivastigmine and physostigmine”, European Journal of Pharmacology, volume 455, issues 2-3, 29 November, pp 101-107 Tiếng Nga 152 Achnazarova: Ахназарова С.Л., Кафаров В.В (1978), Оптимизация эксперимента в химии и химической технологии, Изд.“Высшая школа”, Москва 153 Meskova: Мешковa Н.П., Севeрин С.Е (1979), Практикум по биохимии, Издательство Московского Университета, pp 87-88 Từ internet 109 154 ATSDR-MMG (2008), “Nerve Agents: Tabun (GA), Sarin (GB), Soman (GD) and VX”, Atsdr.cdc.gov., http://www.atsdr.cdc.gov/MHMI/mmg166.html 155 “Chemical Warfare Weapons Fact Sheets-Tabun-GA Nerve Agent”, Usmilitary.about.com., http://usmilitary.about.com/library/milinfo/blchemical-3.htm 156 “Encyclopedia: Acetylcholinesterase inhibitor”, A Dictionary of Nursing, (2008), Encyclopedia.com., Feb 2010, http://www.encyclopedia.com 157 Sebastian S.L (2001), “Management options for the Golden Apple Snails Philippine Rice Research Institute”, http://www.applesnail.net 158 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/article/PMC1403007/pdf/jphysiol 01668-0024.pdf 159 http://www.animalresearch.info/en/medical/timeline/Neurotransmission 160 http://nobelprize.org/nobel prizes/medicine/laureates/1936/dale-lecture.html 161 http://jpet.aspetjournals.org/content/6/2/147.full.pdf+html 162 http://www.nature.com/nature/journal/v228/n5275/abs/228917a0.html 163 http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1760728 110 ... thành nghiên cứu ốc bươu vàng nhà khoa học giới, tiến hành nghiên cứu đề tài: ? ?Nghiên cứu tinh sạch, tính chất đặc trưng ứng dụng Acetylcholinesterase từ ốc bươu vàng? ?? Mục đích đề tài tận dụng. .. vàng, đặc biệt enzyme AChE từ đối tượng Khảo sát điều kiện sinh thái, môi trường sống ảnh hưởng đến khả sinh AChE ốc bươu vàng Nghiên cứu tinh tính chất đặc trưng AChE từ ốc bươu vàng Nghiên cứu. ..ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN  LÊ MINH TRÍ NGHIÊN CỨU TINH SẠCH, TÍNH CHẤT ĐẶC TRƯNG VÀ ỨNG DỤNG CỦA ACETYLCHOLINESTERASE TỪ ỐC BƯƠU VÀNG Chuyên ngành