Đang tải... (xem toàn văn)
Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
Định tính định lượng hợp chất phenol họ Lamiaceae UPLC-DAD-ESI-MS/MS Celik S E et al (2017), "Identification and Determination of Phenolics in Lamiaceae Species by UPLC-DAD-ESIMS/MS", J Chromatogr Sci., 55 (3), pp 291-300 Giới thiệu – Phương pháp Kết Bàn luận Tóm tắt Đối tượng khảo sát: thuộc họ Lamiaceae thơm Mục tiêu: khảo sát định lượng hợp chất phenol Phương pháp: UPLC – DAD – ESI – MS/MS Nội dung: ◦ Về phương pháp: ◦ Thời gian sắc ký: 12 phút ◦ Độ xác, độ tái lặp độ tuyến tính cao ◦ Giới hạn phát hiện: 0,02 đến 18,2 ng/mL ◦ Về dịch chiết ◦ Phương pháp chiết vi sóng ◦ Dung mơi methanol – nước 60% (tt/tt) ◦ Xác định tổng khả chống oxy hóa (TAC), tổng hàm lượng phenol (TPC) khả bắt giữ gốc tự Giới thiệu – Phương pháp Hợp chất phenol Là nhóm chất chuyển hóa thực vật thứ cấp Hoạt tính lợi ích nhiều bệnh mạn tính Ngăn ngừa oxy hóa Flavonoid Tanin Giới thiệu – Phương pháp Cây khảo sát Bạc hà hăng (Mentha pulegium) Oải hương (Lavandula officinalis) Kinh giới (Origanum Majorana) Giới thiệu – Phương pháp Chuẩn bị dịch chiết dược liệu • Dung mơi khảo sát: methanol, ethanol, aceton • Nhiệt độ: 80° C • Công suất: 500 W • Lọc qua màng lọc 0,45 μm bảo quản ° C Giới thiệu – Phương pháp Phương pháp UPLC • Hệ thống UPLC ba lần tứ cực kép (MS/MS) ghép với đầu dị diod (DAD) • Bước sóng DAD: 190 – 400 nm • Nguồn ion hóa điện tích âm (ESI) theo thiết kế Z-spray • Ct sc ký: C18 (100 ì 2,1 mm; 1,7 àm) • Pha động: • Dung môi A: Acid formic 0,1% nước cất lần • Dung mơi B: Acid formic 0,1% methanol Giới thiệu – Phương pháp Phương pháp UPLC • Chương trình gradient: slope 1.0 Thời điểm (phút) Dung môi A Dung môi B 90 10 85 15 80 20 70 30 60 40 – 10 50 50 12 90 10 Giới thiệu – Phương pháp Phương pháp UPLC • Thể tích tiêm: 10 µL qua phần vịng kim (partial loop needle overfill) • Thơng số ion hóa: ESI • • • • + - + - Điện mao quản: kV Năng lượng phá mảnh: 20 V Nhiệt độ solvat hóa: 400° C Tốc độ dịng khí desolvat hóa: 650 L/h • Tốc độ khí mang (cone gas): 50 L/h Đầu dị Khí phân mảnh Kết Tối ưu hóa thơng số • MS/MS Kết Tối ưu hóa thơng số Các phân mảnh Hợp chất Precursor ion Product ion Mất nhóm COOH [M-H-44]- Acid gallic 169 125 Acid protocatechuic 153 109 Acid caffeic 179 135 Acid p-coumaric 163 119 Mất nhóm CH3 cạnh Acid syringic gốc acid Acid synapic [M-H-15]Acid ferulic 197 182 223 208 193 178 Các phân mảnh khác Rutin 609 302 Hesperidin 609 302 Acid rosmarinic 359 197, 161, 135 Quercetin Naringenin Morin Kaempferol 301 271 301 285 151 Kết Thẩm định phương pháp • Độ xác • Độ xác trung gian • Độ tái lặp • LOD, LOQ dựa S/N mẫu độ lặp lại • Độ Kết Thẩm định phương pháp Kết Định lượng Kết TAC, TPC IC50 Kết TAC theo loại dung môi chiết Bàn luận Tối ưu hóa thơng số MS/MS ESI negative mode chứng minh có độ nhạy cao với hợp chất phenol CÁC THƠNG SỐ ĐƯỢC TỐI ƯU HĨA BÀI BÁO TÀI LIỆU THAM KHẢO [35] Fragment ions X MRM transition (m/z) X Dwell Time X X Collision Energy X X Cone Voltage X X The fragmentation energies of Q1 X SO SÁNH VỚI TÀI LIỆU THAM KHẢO [35] Xie et al (2011), “Rapid identification and determination of 11 polyphenols in Herba lycopi by HPLC-MS/MS with multiple reactions monitoring mode (MRM)”, Journal of Food Composition and Analysis, 24, 1069–1072 Bàn luận LOD, LOQ, Khoảng tuyến tính, Độ lặp lại, Độ phục hồi Bàn luận SO SÁNH VỚI HPLC-ESI-MS/MS [35] LOD ng/ml HPLC UPLC i c a R d i c a P d i ff e a C c id c a r Fe ic l u id c a r e u Q t e c in ut R in Xie et al (2011), “Rapid identification and determination of 11 polyphenols in Herba lycopi by HPLC-MS/MS with multiple reactions monitoring mode (MRM)”, Journal of Food Composition and Analysis, 24, 1069–1072 Bàn luận SO SÁNH VỚI HPLC-ESI-MS/MS [35] LOQ ng/ml HPLC UPLC id c a R ci a P d f af C c ei id c a r e F ic ul id c a r ue Q c in t e in t Ru Xie et al (2011), “Rapid identification and determination of 11 polyphenols in Herba lycopi by HPLC-MS/MS with multiple reactions monitoring mode (MRM)”, Journal of Food Composition and Analysis, 24, 1069–1072 Bàn luận SO SÁNH VỚI HPLC-ESI-MS/MS [35] KHOẢNG TUYẾN TÍNH (ng/ml) Rosmarinic acid Protocatechuic acid Caffeic acid Ferulic acid Quercetin Rutin HPLC [35] UPLC 10-2000 7,2 -3600 15-900 1,5-1540 15,5-1550 2,3-230 15-750 6,1-610 9-1800 1,9-1940 3,4-3300 6,1-6100 Xie et al (2011), “Rapid identification and determination of 11 polyphenols in Herba lycopi by HPLC-MS/MS with multiple reactions monitoring mode (MRM)”, Journal of Food Composition and Analysis, 24, 1069–1072 Bàn luận Về pp chiết để đánh giá tính chống oxy hóa • Dung mơi chiết với tỷ lệ 60% Methanol (v/v) chọn MeOH cồn có khả tốt việc thúc đẩy trình oxy hóa thơng qua việc ion hóa hợp chất aryloxy • Nước thêm vào tỷ lệ phù hợp giúp tăng độ tan hợp chất chống oxh, ngồi nước cịn tăng hiệu suất chiết mở rộng bề mặt tiếp xúc pha Kết Mối liên quan hoạt tính chống oxy hóa hàm lượng phenol • Các thử nghiệm cho thấy TAC, TPC, IC50 có mối tương quan với Origanum majorana L có khả chống OXH tồn phần cao tổng hàm lượng phenol cao • Cả khảo sát giàu hợp chất phenol có tính chống oxh Những thuộc họ Lamiaceae thành phần giúp bảo vệ tế bào khỏi tổn thương oxy hóa gây gốc tự CÁM ƠN THẦY VÀ CÁC BẠN ĐÃ CHÚ Ý LẮNG NGHE! ... thuộc họ Lamiaceae thơm Mục tiêu: khảo sát định lượng hợp chất phenol Phương pháp: UPLC – DAD – ESI – MS/MS Nội dung: ◦ Về phương pháp: ◦ Thời gian sắc ký: 12 phút ◦ Độ xác, độ tái lặp độ tuyến tính. .. Giới thiệu – Phương pháp Thẩm định phương pháp UPLC • Tính tuyến tính • LOD • LOQ • Độ xác • Độ Giới thiệu – Phương pháp Định lượng phenol Tổng hàm lượng phenol Xác định phương pháp Folin - Ciocalteau... (tt/tt) ◦ Xác định tổng khả chống oxy hóa (TAC), tổng hàm lượng phenol (TPC) khả bắt giữ gốc tự Giới thiệu – Phương pháp Hợp chất phenol Là nhóm chất chuyển hóa thực vật thứ cấp Hoạt tính lợi ích