Đang tải... (xem toàn văn)
Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI ĐỊNH LƯỢNG FLAVONOL GLYCOSIDE Ở CAMELLIA SINENSIS BẰNG CHẾ ĐỘ MRM CỦA UPLC-QQQ-MS / MS Yahui Wu, Xiaolan Jiang, Shuxiang Zhang,Xinlong Dai, Yajun Liu, Huarong Tan, Liping Gao, Tao Xia Tạp chí Journal of Chromatography B, 1017 (2016) 10-17 State Key Laboratory of Tea Plant Biology and Utilization, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui, China School of Life Science, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui, China Biotechnology Center, Anhui Agricultural University, Hefei, Anhui, China ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI TỪ VIẾT TẮT HPLC : Sắc ký lỏng hiệu cao ( High performance liquid chromatography) UPLC :Sắc ký lỏng siêu hiệu (Ultra Performance Liquid Chromatography) QQQ : Bộ phận phân tích khối ba tứ cực ( Triple Quadrupole) ToF : Bộ phận phân tích khối thời gian bay ( Time of flight) MS/MS : Phổ khối/ Phổ khối PDA : Dải diode quang ( Photo diode array) UV : Quang phổ tử ngoại khả kiến ESI : Nguồn ion hóa phun điện ( Electrospray Ionisation) RSD : Độ lệch chuẩn tương đối ( relative standard deviation) LOD : Giới hạn phát ( Limit of detection) LOQ : Giới hạn định lượng ( Limit of quantification) MRM : Giám sát đa phản ứng ( Multiple reaction monitoring) ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI NỘI DUNG CHÍNH Tổng quan Giới thiệu Nguyên liệu phương pháp Kết bàn luận Kết luận ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI TỔNG QUAN 15 loại flavonol glycoside trà (Camellia sinensis) xác định phương pháp HPLC-ToF-MS định lượng dựa chế độ ghi phổ MRM (multiple reaction monitoring ) UPLC-QQQ-MS/MS Flavonol glycoside chủ yếu tích lũy non giống trà Đáng ý, myricetin 3-O-galactoside thành phần số glycoside flavonol phát ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI GIỚI THIỆU Các hợp chất phenol nước trà Catechin Flavonol Theaflavin Thearubigin ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI GIỚI THIỆU Tác dụng flavonol glycoside Đối với trà pha nồng độ thấp Tạo Khô miệng Cảm giác bị bao phủ lớp chất miệng Tăng vị đắng caffein có trà Màu hoa bảo vệ khỏi tia UV Tính kháng viêm thử nghiệm invitro in vivo Trị bệnh hemophilia bệnh lý vi mạch ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI GIỚI THIỆU UPLC-QQQ-MS/MS ( MRM mode) HPLC-PDA Áp dụng rộng rãi định tính định lượng hợp chất phenolic trà Chi phí thấp ,dễ vận hành Một số flavonol glycoside phân tách hiệu định lượng xác Độ nhạy cao trường hợp LOD LOQ thấp Tránh tượng chồng chéo peak glycoside flavonol Áp dụng định lượng lĩnh vực chuyển hóa thuốc, dược động học, nghiên cứu mơi trường phân tích sinh học ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Nguyên liệu thực vật Hóa chất thuốc thử Thiết bị Các thông số sắc ký Chiết xuất flavonol glycoside từ Thẩm định qui trình định lượng trà ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Nguyên liệu thực vật Chồi, thứ hai, thứ tư, trưởng thành, thân non, thân già rễ trà thu hái vào tháng từ trà tuổi giống chọn cho nghiên cứu Duokangxiang Baiye Nong Khangzao Shuchazao ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Hóa chất thuốc thử Dung mơi chạy HPLC Chất chuẩn Methanol Quercetin 3-O-glucoside Acetonitril Quercetin 3-O-galactoside Acid acetic Kaempferol 3-O-glucoside Kaempferol 3-O-galactoside Myricetin 3-O-galactoside Quercetin 3-O-rutinoside Tedia Co,Ltd (Fairfield, OH,USA) Sigma-Aldrich (St Louis, MO, USA) ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI Bã 0,2 g trà Lớp 1.Nước 2.Cloroform, ly tâm 1.Nghiền 2.2ml ( 99% Methanol 1% HCl), ly Dịch chiết Lớp tâm x lần Ethyl acetat, chiết x lần Dịch chiết Ethyl acetat Cắn Mẫu thử 1.200 µl methanol chạy Thu hồi Ethyl acetat HPLC áp suất thấp 2.Pha loãng lần với nước Sơ đồ chiết xuất flavonol glycoside từ trà ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP Thẩm định qui trình Độ xác: tính RSD biến thiên ngày thời gian lưu (rt) Cường độ tín hiệu (diện tích peak) LOD LOQ đánh giá theo tỷ lệ S / N 3: 10: Pha mẫu chuẩn mẹ nồng độ 10mm metanol Pha dãy mẫu chuẩn từ mẫu chuẩn mẹ có nồng độ 0,36; 0,73; 1,56; 3,12; 6,25; 12,5; 25; 50 100 µm để xây dựng đường chuẩn khoảng tuyến tính ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Định tính flavonol glycoside phương pháp HPLC Sắc ký đồ flavonol glycoside từ dịch chiết chồi trà (Shuchazao) (A) HPLC-PDA 350nm (B) HPLC-ToF-MS ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Định tính flavonol glycoside phương pháp HPLC-ToF-MS Peak/no Thời gian lưu [M-H] 12,248 – (m/z) UV Predict compounds 787.19441 280,320 myricetin 3-O- galactosylrutinoside 12,805 787.19248 280,340 myricetin 3-O-glucpsylrutinoside 15,227 625.14106 270,360 myricetin 3-O-rutinoside 15,834 479.08345 262,356 myricetin 3-O-galactoside 16,643 479.08265 262,356 myricetin 3-O-glucoside 18,127 771.22746 256,345 quercetin 3-O-galactosylrutinoside 20,335 771.19843 256,345 quercetin 3-O-glucosylrutinoside 24,213 609.14555 256,345 quercetin 3-O-rutinoside 24,280 755.23224 266,348 kaempferol 3-O-galactosylrutinoside 10 25,427 463.10548 258,354 quercetin 3-O-galactoside 11 27,179 463.08048 258,354 quercetin 3-O-glucoside 12 29,979 755.23010 266,348 kaempferol 3-O-glucosylrutinoside 13 34,059 447.08760 266,348 kaempferol 3-O-galactoside 14 35,879 593.14242 266,348 kaempferol 3-O-rutinoside 15 39,453 447.08732 266,348 kaempferol 3-O-glucoside ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Định lượng flavonol glycoside phương pháp UPLC Sắc ký đồ phát bằng UPLC detector UV bước sóng 350nm (C) chất chuẩn flavonol glycoside (D) 15 flavonol glycoside chồi ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Định lượng flavonol glycoside chế độ MRM phương pháp UPLC-QQQ-MS/MS Sắc ký đồ ion ghi lại chế độ ion hóa âm chế độ MRM hệ thống QQQ-MS / MS ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Định lượng flavonol glycoside MRM pp UPLC-QQQ-MS/MS TR2 (min) Predict compounds 10,245 myricetin 3-O-galactosylrutinoside 316 10,442 myricetin 3-O-glucosylrutinoside 316 11,006 myricetin 3-O-rutinoside 316 11,176 myricetin 3-O-galactoside 316 11,369 myricetin 3-O-glucoside 316 11,63 quercetin 3-O-galactosylrutinoside 300 11,961 quercetin 3-O-glucosylrutinoside 300 12,623 quercetin 3-O-rutinoside 300 12,649 kaempferol 3-O-galactosylrutinoside 285 10 12,006 quercetin 3-O-galactoside 300 11 13,214 quercetin 3-O-glucoside 300 12 13,207 kaempferol 3-O-glucosylrutinoside 285 13 14,151 kaempferol 3-O-galactoside 284 14 14,003 kaempferol 3-O-rutinoside 285 15 14,537 kaempferol 3-O-glucoside 284 Peak/no Bảng tóm tắt liệu hợp chất phát Product ion (m/z) ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Tối ưu hóa điều kiện khối phổ Điện áp phân mảnh tối ưu cho quercetin 3-O-glucoside quercetin 3- O-galacoside 155 V ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Tối ưu hóa điều kiện khối phổ lượng va chạm tối ưu cho quercetin 3-O-glucoside quercetin 3-O-galacoside 22 eV ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Tối ưu hóa điều kiện khối phổ Theo cách tương tự, điều kiện phổ khối tất glycoside flavonol tối ưu hóa mơ tả tro ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Thẩm định phương pháp Để đánh giá hiệu phương pháp sử dụng chế độ MRM UPLC-QQQ-MS / MS, phép thử HPLC chọn để so sánh với kết ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Thẩm định phương pháp Độ lệch chuẩn tương đối biến đổi thời gian lưu tín hiệu ngày ngày ghi lại bảng ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Tổng lượng flavonol glycoside Camellia sinensis ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI KẾT LUẬN Chế độ MRM UPLC-QQQ-MS/MS Đặc biệt giúp ích định lượng hợp chất nhiều thành phần có tính chất hóa học tương tự Có độ lặp lại,độ nhạy độ ổn định tốt để định lượng flavonol glycoside trà 15 loại flavonol glycoside giống trà xác định phương pháp Flavonol glycoside tập trung chủ yếu non Myricetin 3- ogalactoside thành phần sáu flavonol glycoside phát ... Định lượng flavonol glycoside chế độ MRM phương pháp UPLC- QQQ- MS/ MS Sắc ký đồ ion ghi lại chế độ ion hóa âm chế độ MRM hệ thống QQQ- MS / MS ỨNG DỤNG SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN Định. .. 15 loại flavonol glycoside trà (Camellia sinensis) xác định phương pháp HPLC-ToF -MS định lượng dựa chế độ ghi phổ MRM (multiple reaction monitoring ) UPLC- QQQ- MS/ MS Flavonol glycoside. .. KẾT LUẬN Chế độ MRM UPLC- QQQ- MS/ MS Đặc biệt giúp ích định lượng hợp chất nhiều thành phần có tính chất hóa học tương tự Có độ lặp lại ,độ nhạy độ ổn định tốt để định lượng flavonol glycoside