SEMINAR định lượng các flavonol glycosid trong cây trà (camellia sinensis) bằng chế độ MRM của phương pháp UPLC QQQ MSMS _ SẮC KÝ HIỆN ĐẠI

ỨNG DỤNG KỸ THUẬT SẮC KÝ LỎNG HIỆN ĐẠI Định lượng flavonol glycosid trà (Camellia sinensis) chế độ MRM phương pháp UPLC-QQQ-MS/MS* Quantification of flavonol glycosides in Camellia sinensis by MRM mode of UPLC-QQQ-MS/MS Journal of Chromatography B NỘI DUNG Tổng quan Nguyên liệu Phương Kết & & Hóa chất pháp bàn luận Kết luận Tổng quan 1.1 Camellia sinensis Catechin Flavonol Theaflavin Thearubigins http://www.uphcm.edu.vn/caythuoc/index.php?q=node/306 Tổng quan 1.2 Các flavonol glycosid Camellia sinensis     Quercetin, Rutin, Myricetin … http://www.cesti.gov.vn/images/cesti/files/STINFO/Năm%202011/Số%203%20-%202011/Falvonoid.pdf T Guardia, A.E Rotelli, A.O Juarez, L.E Pelzer, Il Farmaco 56 (2001) 683–687 C.H Jung, J.Y Lee, C.H Cho, C.J Kim, Arch Pharmacal Res 30 (2007)1599–1607 1 Tổng quan 1.3 Các kỹ thuật phân tích  Sắc ký giấy, sắc ký lớp mỏng  Phổ khối  1H 13C-NMR  HPLC, UPLC  PDA, QQQ-MS/MS-MRM Nguyên liệu, hóa chất, thiết bị 2.1 Nguyên liệu thực vật  Chồi, thứ hai, thứ tư, trưởng thành, thân non, thân già rễ trà  Các giống Duokangxiang, Baiye, Nong Khangzao, Shuchazao Nguyên liệu, hóa chất, thiết bị 2.2 Hóa chất Nhà cung cấp Hóa chất Metanol, Acetonitril Tedia Co, Ltd Acid acetic (HPLC) Chất chuẩn Quercetin 3-O-glucosid Sigma-Aldrich Quercetin 3-O-galactosid Kaempferol 3-O-glucosid Kaempferol 3-O-galactosid Myricetin 3-O-galactosid Quercetin 3-O-rutinosid Nguyên liệu, hóa chất, thiết bị 2.3 Thiết bị Nhà cung cấp HPLC-PDA SHI-MAZDU HPLC-ESI-ToF/MS-PDA Agilent Technologies UPLC-ESI-QQQ-MS/MS Agilent Technologies Cột HPLC Phenomenex Cột UPLC Phenomenex 0.2 g mẫu/ nitơ lỏng Nghiền Phương pháp Chiết lần Mẫu/ ml (MetOH/HCl 99:1) 3.1 Chuẩn bị mẫu Chiết, ly tâm Phần bã Phần dịch + nước (đồng lượng) CHCl3, đồng lượng Chiết, ly tâm Phần EtOAc, đồng lượng Chiết lần Cô áp suất giảm Lớp EtOAc Cắn Hòa tan/ MetOH Pha loãng lần với nước Mẫu phân tích Phương pháp 3.2 Kỹ thuật HPLC-ToF/MS         Nhiệt độ buồng cột: 250C, Thể tích tiêm: µl Tốc độ dịng: ml/phút Pha động: Acid acetic 1% acetonitril, gradient Thời gian phân tích: 55 phút Đầu dị PDA (190nm đến 600nm) Q trình ion hóa ESI chế độ ion hóa âm, điện áp mức 175V, m/z 100-800 Tốc độ dịng khí khơ 12 l/phút, nhiệt độ 350 0C, áp suất 45 psi điện áp mao quản 3500V 10 Phương pháp 3.2 Kỹ thuật HPLC-ToF/MS 11 Phương pháp 3.2 Kỹ thuật UPLC-QQQ-MS/MS (chế độ MRM-QQQ)         Nhiệt độ buồng cột: 40oC, Thể tích tiêm: µl, Tốc độ dịng: 0,4 ml/phút Pha động: Acid acetic 1% acetonitril, gradient Thời gian phân tích: 20 phút Đầu dị UV bước sóng 350nm Q trình ion hóa ESI chế độ ion hóa âm, m/z 100-800 Tốc độ dịng khí khô l/phút, nhiệt độ 350 0C, áp suất 45 psi điện áp mao quản 3500V 12 Phương pháp 3.2 Kỹ thuật UPLC-QQQ-MS/MS (chế độ ghi phổ MRM-QQQ) 13 https://www.researchgate.net/publication/227401317_Multiple_Reaction_Monitoring_MRM_Principles_and_Application_to_Coronary_Artery_Disease Phương pháp 3.3 Tối ưu hóa điều kiện MS  Điện áp phân mảnh  Năng lượng va chạm 14 Phương pháp 3.4 Thẩm định phương pháp      Độ xác Độ xác trung gian Độ phục hồi LOD LOQ Tính tuyến tính 15 Kết bàn luận 4.1 Xác định flavonol glycosid kỹ thuật HPLC-ToF/MS 16 Kết bàn luận 4.2 Phương pháp định lượng flavonol glycosid chế độ MRM kỹ thuật UPLC-QQQMS/MS 17 Kết bàn luận 4.2 Phương pháp định lượng flavonol glycosid chế độ MRM kỹ thuật UPLC-QQQMS/MS Thẩm định phương pháp 18 Kết bàn luận 4.2 Phương pháp định lượng flavonol glycosid chế độ MRM kỹ thuật UPLC-QQQMS/MS Thẩm định phương pháp 19 Kết bàn luận 4.3 Định lượng flavonol glycosid giống Camellia sinensis 20 Kết luận  Chế độ MRM UPLC-QQQ-MS / MS có độ tái lặp, độ nhạy độ ổn định tốt Tiết kiệm thời gian phân tích so với phương pháp HPLC-ToF/MS  Kết quả: - Flavonol glycosid có nhiều non chồi, trưởng thành thân - Myricetin 3-O-galactosid thành phần flavonol glycosid định lượng 21 CÁM ƠN THẦY VÀ CÁC BẠN ĐÃ THEO DÕI 22 ... thuật UPLC- QQQMS/MS 17 Kết bàn luận 4.2 Phương pháp định lượng flavonol glycosid chế độ MRM kỹ thuật UPLC- QQQMS/MS Thẩm định phương pháp 18 Kết bàn luận 4.2 Phương pháp định lượng flavonol glycosid. .. glycosid chế độ MRM kỹ thuật UPLC- QQQMS/MS Thẩm định phương pháp 19 Kết bàn luận 4.3 Định lượng flavonol glycosid giống Camellia sinensis 20 Kết luận  Chế độ MRM UPLC- QQQ- MS / MS có độ tái lặp, độ. .. Độ xác trung gian Độ phục hồi LOD LOQ Tính tuyến tính 15 Kết bàn luận 4.1 Xác định flavonol glycosid kỹ thuật HPLC-ToF/MS 16 Kết bàn luận 4.2 Phương pháp định lượng flavonol glycosid chế độ MRM