Đang tải... (xem toàn văn)
Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
Xây dựng THẨM ĐỊNH phương pháp UHPLC-MS/MS định lượng chất chủ vận Beta nước tiểu người ứng dụng TRên mẫu thử lâm sàng Tác giả: Cristina Bozzolino, Marta Leporati, Federica Gani, Cinzia Ferrero, Marco Vincenti NỘI DUNG THUYẾT TRÌNH GIỚI THIỆU PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU KẾT QUẢ - BÀN LUẬN KẾT LUẬN GIỚI THIỆU GIỚI THIỆU Các chất chủ vận β2 thường dùng điều trị hen suyễn, rối loạn viêm đường hơ hấp mãn tính, COPD Chất chủ vận β2 bị lạm dụng thể thao chăn ni chất kích thích tăng trưởng Đòi hỏi việc xác định định lượng chất chủ vận β2 dịch sinh học cần phương pháp phân tích nhạy chọn lọc Trong nước tiểu, chất chủ vận β2 thường tiết dạng chất chuyển hóa pha I pha II , kèm theo tỷ lệ lớn thuốc không biến đổi Phương pháp UHPLC-MS/MS phát 24 chất chủ vận β2 nước tiểu người Phương pháp nghiên cứu PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu hoá chất Hoá chất Ghi Amoni hydroxit Sigma-Aldrich (St Louis, MO, Hoa Kỳ) Indacaterol formoterol-13C-d3 AlsaChim (Pháp) Salmeterol xinafoate Quality of Medicines & Health Care (Strasbourg, Pháp) Zilpaterol Spectra 2000 srl (Rome, Ý) Clenbuterol-d6 RIVM, Bilthoven, Hà Lan Salbutamol-d3 LGC (Tashington, Anh) Salmeterol-d3 CDN Isotope (Canada) PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Vật liệu hoá chất Vật liệu Hoá chất Ghi Axit clohydric (HCl) 37% Carlo Erba (Milan, Ý) Nước tinh khiết sử dụng máy Milli-Q® UF (Millipore, Hoa kỳ) DD chuẩn gốc methanol với nồng độ 1mg/ml Bảo quản 20 ˚C Các mẫu nước tiểu trắng Từ tình nguyện viên khỏe mạnh Chuẩn bị mẫu PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Ly tâm 3500 vòng/ph 5ph Mẫu nước tiểu (3ml) Lấy 2.5ml phía Ống tt 30ml +2.5 µL Amoni acetat 0.2M, PH=5 chuẩn nội (0.1µg/ml) +10µL β-glucuronidase Ủ 2h, 37˚C Làm nguội t˚ phịng SPE Strata-XC 33 µm (làm ẩm với 2ml methanol +2ml nước tk) Bay N2, 50 ˚C +100µL methanol +dd 2ml HCl 0.1M+ acid Formic0.1% (5:95) Mẫu thử 2ml methanol Dịch rửa giải Chất phân tích mục tiêu Rửa giải 2ml methanol +amoni hydroxit 5%(v/v) Thông số hệ thống PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Cột BEH C18 (2.1 mm ì 100 mm ì 1.7 àm),Ct BEH C18 tiền cột (2,1 mm mm, 1,7 µm), Nhiệt độ côt : 40°C Agilent Infinity 1290 Thể tích mẫu tiêm: 1µl Agilent UHPLC LC-MS/MS Tốc độ dịng 0.4ml/phút Dung mơi pha động: Methanol + acid.formic 0.1% Tổng thời gian chạy ; 15 phút 5% Methanol : 95% A.Formic (2 phút) Methanol : 5% - 80% (8 phút) 80% Methanol : 20% A.Formic (1 phút) PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Agilent Infinity Thông số hệ thống Chế độ ion hố phun điện ion hóa dương (ESI) 1290 Nguồn: Agilent UHPLC Điện áp 3500 V Nhiệt độ hóa : 550 °C Khí mang: 35 psi LC-MS/MS Nguồn khí phun: 45 psi Nguồn khí tạo nhiệt: 40 psi 10 KẾT QUẢ - BÀN LUẬN Thẩm định quy trình Bảng Khoảng hiệu chỉnh, bình phương hệ sớ tương quan(R ), giá trị LOD LOQ, Lack of Fit’s, ANOVA, Mandel, RSD độ dớc kết kiểm tra tính tốn lại cho tất phân tích 19 KẾT QUẢ - BÀN LUẬN • Thẩm định quy trình Tính tuyến tính • Độ tuyến tính nghiên cứu dải nồng độ trình bày Bảng với hệ số tương quan (r ) cao 0,99 • LOD LOQ • Các giá trị LOD LOQ (Bảng 2) thấp bậc độ lớn so với giá trị ghi lại phương pháp fast-GC-MS trước • Sự tăng độ nhạy đặc biệt quan trọng số chất phân tích (salmeterol) thường tiết nồng độ thấp sau dùng 20 KẾT QUẢ - BÀN LUẬN Thẩm định quy trình Bảng Độ xác ngày (CV%), độ (bias%), hiệu ứng tỉ lệ phục hồi cho tất phân tích kiểm tra 21 KẾT QUẢ - BÀN LUẬN • Thẩm định quy trình Độ xác độ • Dữ liệu ngày độ báo cáo bảng • CV% thấp 15% cho tất phân tích pha nồng độ thấp, trung bình cao, có năm ngoại lệ (16% cho cimaterol, 19% cho ritodrine, 16% cho ractopamine, 17% cho mapenterol 18% cho salmeterol mức hiệu chuẩn thấp nhất) • Phần trăm độ lệch (bias%) nằm khoảng từ -4,7% đến + 15% 22 KẾT QUẢ - BÀN LUẬN • Thẩm định quy trình Hiệu ứng độ phục hồi • Các giá trị độ thu hồi hiệu ứng đưa Bảng • Độ thu hồi trung bình 100%: tối thiểu 80% mapenterol mức 0,03 ng / mL, tối đa 116% fenoterol 0,15 ng / mL • Hiệu ứng trung bình ước tính khoảng +1,2%: tối thiểu −33% cimaterol, tối đa +23% clenbuterol 23 KẾT QUẢ - BÀN LUẬN • Thẩm định quy trình Carry-over • Các sắc ký đồ khơng có diện tín hiệu quan trọng (tức tỉ lệ S / N luôn