Đang tải... (xem toàn văn)
Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
Nghiên cứu tác dụng chống oxy hoá ức chế alpha glucosidase phân đoạn dịch chiết Neptunia oleracea kỹ thuật H-NMR phương pháp UHPLC-MS/MS Antioxidants and α-glucosidase inhibitors from Neptunia oleracea fractions using 1H NMR-based metabolomics approach and UHPLC MS/MS analysis Soo Yee Lee, Ahmed Mediani, Intan Safinar Ismail, Maulidiani1 and Faridah Abas January, 07th,2019 NỘI DUNG CHÍNH TỔNG QUAN ĐỐI TƯỢNG PHƯƠNG PHÁP KẾT QUẢ - BÀN LUẬN KẾT LUẬN TỔNG QUAN Kết điều tra STEP wise Bộ Y tế thực năm 2015 tỉ lệ mắc đái tháo đường Việt Nam TỔNG QUAN ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Đối tượng nghiên cứu: rau nhút Tên khoa học: Neptunia oleracea thuộc họ Đậu (Fabaceace) Bộ phận sử dụng: thân Cơng dụng: có tiềm việc chống chất oxi hóa tự nhiên ức chế enzyme α-glucosidase ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Hóa chất, thuốc thử - Phosphat đệm, glycin, enzym α-glucosidase, PNPG, DPPH - Dung môi ethanol tuyệt đối, hexan, chloroform, ethyl acetat methanol - Hóa chất NMR: DMSO-d6 TSP - Acetonitril acid formic loại LC/MS - Nước điều chế hệ thống lọc Milli-Q ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phân đoạn chứa chất có hoạt tính sinh học? HF CF Dược liệu Dịch chiết thô EF H-NMR UHPLCMS/MS MF ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Chuẩn bị Thu hoạch Tách lá, rửa bảo quản -80o C Đông khô Nghiền thành bột Tiến hành chiết xuất 4g mẫu bột Ngâm 100ml ethanol tuyệt đối Siêu âm Ly tâm 30 phút, v= 13000 rpm Lặp lại với mẫu chiết xuất khác Thu thập phần cô đặc ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phân đoạn dịch chiết phương pháp chiết pha rắn (SPE) 1g dịch chiết thô 2g bột sillica Cột SPE Hexane Chloroform Ethyl acetate Methanol HF CF EF MF Cô đặc Đông khô Bảo quản 4oC ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Định lượng phenolic toàn phần Dịch chiết từ phân đoạn hòa tan DMSO 20 μL mẫu thử 100 μL thuốc thử Folin-Ciocalteu Trộn ủ phút 80 μL Natri carbonat 7,5% Trộn ủ tối 30 phút Đo độ hấp thụ bước sóng 765 nm Tính TPC dựa đường cong chuẩn acid gallic 10 ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phân tích mẫu UHPLC – MS/MS Ion hóa mẫu ESI Hiệu suất va chạm có hiệu quả: 35% 15 ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phân tích mẫu UHPLC – MS/MS Tùy theo giá trị m/z ion mà thời điểm vào khác thu tín hiệu khác Bộ phận phân tích: tứ cực bẫy quỹ đạo 16 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.1 Phổ đồ 1H-NMR phân đoạn Neptunia oleracea Hình Phổ 1H-NMR HF (a), CF (b), EF (c) MF (d) N oleracea 1, fatty acids; 2, alanine; 3, leucine; 4, valine; 5, oleanolic acid; 6, phytosterol; 7, α-glucose; 8, βglucose; 9, fructose; 10, dẫn chất quercetin ; 11, dẫn chất kaempferol; 12, dẫn chất myricetin; 13, dẫn chất apigenin; 14, catechin; 15, gallic acid; 16, 3,4-O-dimethylgallic acid; 17, caffeic acid 17 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.2 Sự phân bố nhóm chất phân đoạn dịch chiết N oleracea Hình Điểm số PCA phân đoạn khác Neptunia oleracea Hình Loading plot chất phân đoạn khác Neptunia oleracea Sự diện hợp chất hóa thực vật tìm thấy phân đoạn EF MF, mức độ phân bố phụ thuộc vào độ phân cực chúng 18 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.3 Sự tương quan giữa hợp chất phenolic hoạt tính sinh học a) Tổng hàm lượng phenol b) Giá trị hoạt tính bắt gốc tự DPPH c) Giá trị hoạt tính ức chế α-glucosidase =>Mơ hình PLS đánh giá mối tương quan phenol với hoạt tính sinh học hai phân đoạn EF MF S Y Lee et al (2018), "Comparison of partial least squares and random forests for evaluating relationship between phenolics and bioactivities of Neptunia oleracea", J Sci Food Agric, 98 (1), 240-252 19 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.3 Sự tương quan giữa hợp chất phenolic hoạt tính sinh học Đánh giá tính hợp lý cùa mơ hình PLS Hình 5.Biểu đồ hốn vị mơ tả giá trị R2 Q2 theo biến Y hoạt tính ức chế gốc tự DPPH (a) hoạt tính ức chế α-glucosidase (b) Kết quả: Thử nghiệm hốn vị R2Y = 0.925; Q2 = 0.888 Mơ hình hơp lý (not overfitting) 20 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.3 Sự tương quan giữa hợp chất phenolic hoạt tính sinh học Kết cùa mơ hình PLS Các hợp chất phenolic đều nằm ở phía phân đoạn có hoạt tính sinh học (EF, MF) Hình PLS biplot 21 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.4 Định danh chất có hoạt tính sinh học phân đoạn MF EF kỹ thuật UHPLC-MS/MS Kết phân tích phân đoạn MF EF kỹ thuật UHPLC-MS/MS - Kết sắc ký (TIC): Các hợp chất flavonoid có đỉnh rõ rệt - Có 37 hợp chất xác định kỹ thuật MS/MS gồm nhóm: Quercetin dẫn chất, Dẫn chất Apigenin Dẫn chất Myricetin Kaempferol dẫn chất Các flavonoid Dẫn chất acid phenolic Các chất khác 22 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.4 Định danh chất có hoạt tính sinh học phân đoạn MF EF kỹ thuật UHPLC-MS/MS Chỉ diện dạng flavonoid aglycon EF Chỉ diện dẫn chất acid phenolic flavonoid dạng di triglycosid MF Hình Sắc ký đồ phân đoạn EF (a), MF (b) 23 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.4 Định danh chất có hoạt tính sinh học phân đoạn MF EF kỹ thuật UHPLC-MS/MS Bảng Kết UHPLC-MS/MS nhóm dẫn chất hai phân đoạn EF MF 24 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.4 Định danh chất có hoạt tính sinh học phân đoạn MF EF kỹ thuật UHPLC-MS/MS 25 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 3.5 Nguyên tắc “LIKE-DISSOLVE-LIKE” Phytosterol Acid oleanolic Amino acid Acid béo HF ĐỘ PHÂN CỰC TĂNG DẦN CF Myricetin Quercetin EF Kaempferol Các hợp chất phenolic MF Apigenin Phenolic acid Các flavonoid Khác 26 KẾT LUẬN Dược liệu Dịch chiết thô Like-dissolve like HF CF EF MF H NMR Các nhóm dẫn chất PCA UHPLCMS/MS 37 dẫn chất thuộc nhóm dẫn chất phenolic ĐỊNH LƯỢNG PHENOLIC TỒN PHẦN THỬ NGHIỆM HOẠT TÍNH SINH HỌC PLS Có tương quan giữa hợp chất phenol hoạt tính sinh học 27 KẾT LUẬN Neptunia oleracea có chứa nhiều hợp chất phenolic có tác dụng chống oxy hóa ức chế -glucosidase xem dược liệu có tiềm kiểm soát đái tháo đường 28 CẢM ƠN 29 ... Lặp lại với mẫu chiết xuất khác Thu thập phần cô đặc ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phân đoạn dịch chiết phương pháp chiết pha rắn (SPE) 1g dịch chiết thô 2g bột... PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Phân tích mẫu UHPLC – MS/MS Ion hóa mẫu ESI Hiệu suất va chạm có hiệu quả: 35% 15 ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU... giai đoạn đường sở: Dựa vào phần mềm Chenomx v 8.1 (Alberta, Canada) 13 ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Chuẩn bị mẫu cho phân tích UHPLC – MS/MS mg phân đoạn UHPLC