SEMINAR đánh giá tác dụng chống oxy hoá và ức chế αlpha glucosidase của các phân đoạn dịch chiết neptunia oleracea dựa vào h1 NMR và phương pháp UHPLC MSMS _ SẮC KÝ HIỆN ĐẠI

Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác

BMC Complementary and Alternative Medicine ĐÁNH GIÁ TÁC DỤNG CHỐNG OXY HOÁ VÀ ỨC CHẾ ΑLPHA GLUCOSIDASE CỦA CÁC PHÂN ĐOẠN DỊCH CHIẾT NEPTUNIA OLERACEA DỰA VÀO H1-NMR VÀ PHƯƠNG PHÁP UHPLC-MS/MS Tác giả: Soo Yee Lee, Ahmed Mediani, Intan Safinar Ismail, Maulidiani and Faridah Abas Antioxidants and α-glucosidase inhibitors from Neptunia oleracea fractions using 1H NMR-based metabolomics approach and NỘI DUNG CHÍNH Giới thiệu (Abstract,background) Phương pháp (Method) Kết bàn luận (Result and discussion) Kết luận (Conclusion) GIỚI THIỆU GIỚI THIỆU ĐÁI THÁO ĐƯỜNG IDF diabetes atlas - 2017 Atlas GIỚI THIỆU https://bjcardio.co.uk/2015/03/embracing-the-future-not-forgetting-the-past/ GIỚI THIỆU Neptunia oleracea (rau nhút)  Protein thô  Chất xơ thơ  Các khống chất quan trọng PHENOLICS GỐC TỰ DO α-glucosidase PHƯƠNG PHÁP PHƯƠNG PHÁP Hố chất ngun liệu Hóa chất, thuốc thử - Phosphat đệm, glycin, enzym αglucosidase, PNPG, DPPH - Dung môi ethanol tuyệt đối, hexan, chloroform, ethyl acetat methanol - Hóa chất NMR: DMSO-d6 TSP - Acetonitril acid formic loại LC/MS - Nước điều chế hệ thống lọc Milli-Q Nguyên liệu thực vật Neptunia oleracea - Xác thực Nhà thực vật học Tiến sĩ Shamsul Khamis - Trồng khu Nông nghiệp Đại học Putra Malaysia Sấy mẫu chiết PHƯƠNG PHÁP Thu hoạch tháng tuổi Sơ chế 4g bột/100ml ethanol tuyệt đối Tạo chiết xuất thô Tách Làm sạch, đông lạnh -80C Nghiền thành bột Đông khô đến khối lượng không đổi Siêu âm Lấy mẫu chiết xuất riêng lẻ để có lần lặp lại Ly tâm 13000 vòng/phút 30 phút Lấy phần dịch cô đặc Phân đoạn chiết suất thô PHƯƠNG PHÁP 2g bột silica 1g chiết xuất thô Cột SPE Rửa liên tục với dung môi Hexan Chloroform Ethyl acetat Methanol Phân đoạn Hexan (HF) Phân đoạn Chloroform (CF) Phân đoạn Ethyl acetat (EF) Phân đoạn Methanol (MF) Cô đặc, đông khô giữ lạnh 4oC Cô đặc, đông khô giữ lạnh oC Cô đặc, đông khô giữ lạnh 4oC Cô đặc, đông khô giữ lạnh oC 10 PHƯƠNG PHÁP Thử nghiệm ức chế αGlucosidase • Chuẩn bị mẫu • Thêm vào 96 giếng: 10Lmẫu thử, 130 μL đệm 30 mM phosphate 10 μL enzyme α-glucosidase • Làm song song mẫu chứng âm • Ủ 5’ nhiệt độ phịng • Thêm vào đĩa 50L chất PNPG, ủ 15’ • Thêm 50L glysine 2M pH10 • Đo độ hấp thu bước sóng 405nm % Ức chế = [(An-As)/An] An As độ hấp thụ chứng âm mẫu thử tương ứng Mỗi mẫu tiến hành phân tích lần 13 Đo NMR PHƯƠNG PHÁP 5mg mẫu + 500L DMSO-d6 (chứa 0,1% TSP) Siêu âm 15’ Ly tâm 13000 vòng/phút 10’ Máy đo quang kế INOVA NMR 500MHz Tần số 499,887 MHz Phân tích NMR Nhiệt độ 26C Thời gian quét 3,54 phút, gồm 64 lần quét Chiều rộng phổ 20 ppm 14 PHƯƠNG PHÁP mg phân đoạn + ml methanol UHPLC-MS / MS Ly tâm Cột Thermo C18 (2.1 mm × 100 mm, 1,9μm) Pha động: 0,1% HCOOH/H2O (A) 0,1% HCOOH/acetonitril (B) Tốc độ dòng: 250 μL/phút Thể tích tiêm: μL Chương trình rửa giải: 5% B phút, 15% B phút, 20% B 15 phút, 25% B 28 phút, 100% B 30 phút Lọc qua màng 0,22 m UHPLC-MS/MS 15 KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN KẾT QUẢ Phổ 1H NMR phân đoạn N oleracea - acid béo - alanin - leucin - valin - acidoleanolic - phytosterol - α-glucose - β-glucose - fructose 10* - quercetin 11* - kaempferol 12* - myricetin 13* - apigenin 14 - catechin 15 - acidgallic 16 - 4-Odimethylgallic acid 17 - acid caffeic  * dẫn xuất Phổ 1H-NMR HF (a), CF (b), EF (c) MF (d) N oleracea 17 KẾT QUẢ Phân loại chuyển hóa phân đoạn N olunacea Điểm số PCA (a) ô liệu-loading plot (b) phân đoạn khác N oleracea 18 KẾT QUẢ Mối tương quan phenolic hoạt tính sinh học phân đoạn N oleracea Tổng hàm lượng phenolic (a), thử nghiệm kháng gốc tự DPPH (b), thử nghiệm ức chế α-glucosidase (c) phân đoạn N oleracea 19 KẾT QUẢ Mối tương quan phenolic hoạt tính sinh học phân đoạn N oleracea Mơ hình PLS Các hợp chất phenolic đều nằm ở phía phân đoạn có hoạt tính sinh học (EF, MF) 20 KẾT QUẢ UHPLC–MS/MS xác định phân đoạn có hoạt tính sinh học N.oleracea Sắc kí đồ tồn ion EF Aglycones flavonoid phát EF *Quercetin, apigenin, myricetin, kaempferol, flavonoid khác, dẫn xuất axit phenolic chất chuyển hóa khác 21 KẾT QUẢ UHPLC–MS/MS xác định phân đoạn có hoạt tính sinh học N oleracea Sắc kí đồ tồn ion MF Các dẫn xuất axit phenolic số di-flavonoid triglycoside có MF *Quercetin, apigenin, myricetin, kaempferol, flavonoid khác, dẫn xuất axit phenolic chất chuyển hóa khác 22 BÀN LUẬN HF CF Nguyên tắc Phytosterol Acid oleanolic Amino acid béo “like-dissolves-like” EF MF quercetin thay o-dihydroxyl (catechol) làm tăng hoạt tính acid caffeic Các hợp chất phenolic kaempferol apigenin diện số lượng nhóm hydroxyl phenolic Khả chống oxy hóa ức chế α-glucosidase 23 BÀN LUẬN Bảng: Xác định thành phần có hoạt tính sinh học phân đoạn N oleracea UHPLC-MS/MS 24 BÀN LUẬN 25 KẾT LUẬN KẾT LUẬN Các hoạt chất Neptunia oleracea nghiên cứu chia làm phân đoạn HF, CF, EF, MF Phân đoạn EF MF: - Chứa hoạt chất cây, chất kháng gốc tự DPPH chất ức chế alpha-glucosidase - Phân tích UHPLC-MS/MS xác định 37 hoạt chất, chủ yếu phenolic Tóm lại, N.oleracea có chứa nhiều hợp chất phenolic bao gồm chất chống oxy hoá chất ức chế alpha glucosidase, ứng dụng việc hỗ trợ kiểm soát đái tháo đường 27 ... chất ức chế alpha -glucosidase - Phân tích UHPLC- MS/MS xác định 37 hoạt chất, chủ yếu phenolic Tóm lại, N .oleracea có chứa nhiều hợp chất phenolic bao gồm chất chống oxy hoá chất ức chế alpha glucosidase, ... có hoạt tính sinh học phân đoạn N oleracea UHPLC- MS/MS 24 BÀN LUẬN 25 KẾT LUẬN KẾT LUẬN Các hoạt chất Neptunia oleracea nghiên cứu chia làm phân đoạn HF, CF, EF, MF Phân đoạn EF MF: - Chứa hoạt... phần dịch cô đặc Phân đoạn chiết suất thô PHƯƠNG PHÁP 2g bột silica 1g chiết xuất thô Cột SPE Rửa liên tục với dung môi Hexan Chloroform Ethyl acetat Methanol Phân đoạn Hexan (HF) Phân đoạn Chloroform