Đang tải... (xem toàn văn)
Trắc nghiệm, bài giảng pptx các môn chuyên ngành Y dược hay nhất có tại “tài liệu ngành Y dược hay nhất”; https://123doc.net/users/home/user_home.php?use_id=7046916. Slide kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại ppt dành cho sinh viên ngành Y dược. Trong bộ sưu tập có trắc nghiệm kèm đáp án chi tiết các môn, giúp sinh viên tự ôn tập và học tập tốt môn kiểm nghiệm seminar về sắc ký hiện đại bậc cao đẳng đại học ngành Y dược và các ngành khác
NGHIÊN CỨU CÁC CHẤT CHUYỂN HÓA GINSENOSID BẰNG KỸ THUẬT UPLC-QTOF/MS ỨNG DỤNG TRONG ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG CỦA SẢN PHẨM NHÂN SÂM ĐÃ CHẾ BIẾN NỘI DUNG ĐẶT VẤN ĐỀ TỔNG QUAN ĐỐI TƯỢNG VÀ PPNC KẾT QUẢ BÀN LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO ĐẶT VẤN ĐỀ • Nhân sâm loại thảo dược quý phổ biến giới => kiểm soát chất lượng => phát triển phương pháp phân tích cần thiết để đánh giá thành phần saponin kiểm sốt chất lượng • Dạng chế biến: • Bạch sâm (WG), Sâm Triều Tiên (TG), Hồng sâm (RG) Hắc sâm (BG) Thành phần hóa học ginsenosid Sau chế biến ginsenosid bị cắt đường khử nhóm OH tạo thành chất chuyển hóa ginsenosid phân cực • Kĩ thuật UPLC-QTOF / MS áp dụng để xác định đánh giá chất chuyển hóa Đánh giá chất lượng sản phẩm TỔNG QUAN NGUYÊN LIỆU NHÂN SÂM PP chế biến Bạch sâm Sâm Triều Tiên sấy nhân sâm hấp với nước o 80-95 C 20- tươi 25’ Hồng sâm hấp 95o 100 C 2- 3h Hắc sâm hấp WG chu kỳ o 95-100 C 2- 3h Rd, Rk1, Rg5, Rg3 Thành phần đặc trưng M-Rb1, MRb2, M-Rc, Re, Rg1 Rb2 , Rc, Rd, Re, Rg1, Rb1, Rb2, Rc, Rd, hợp chất chưa biết Re, Rg1 Đặc biệt: CK, CY, Rh2, Rk2, Rh3 TỔNG QUAN NGUYÊN LIỆU NHÂN SÂM Tác dụng dược lý ginsenosid sản phẩm nhân sâm Chống kết tập tiểu cầu, kháng viêm Chống ung thư Rc, Rb2 Chống đái tháo đường chống Rk1, Rg5, Rg3 Rd, Rb2, Re Chống ung thư, kháng viêm bảo vệ CK Kháng viêm WG, RG TG Rd, Rb2, Re, Rg1 ung thư Rh2, Rh3 gan Chống ung thư kháng viêm BG TỔNG QUAN NGUYÊN LIỆU NHÂM SÂM • Các cơng trình nghiên cứu Nhân sâm sau chế biến có tác dụng dược lý gia tăng có nhiều tác dụng dược lý • Hồng sâm Hắc sâm thể tác dụng dược lý mạnh so với Bạch sâm, sâm Triều Tiên chống ung thư, chống kết tập tiểu cầu, chống oxy hóa tạo ginsenosides riêng biệt Ginsenosid thành phần tạo tác dụng dược lý riêng biệt cho loại nhân sâm, nên việc xác định đánh giá lượng ginsenosid sản phẩm cần thiết TỔNG QUAN NGUYÊN LIỆU NHÂN SÂM Cấu trúc ginsenosid TỔNG QUAN NGUYÊN LIỆU NHÂN SÂM Qúa trình hình thành chất chuyển hóa WG TỔNG QUAN NGUYÊN LIỆU NHÂM SÂM Qúa trình hình thành chất chuyển hóa TỔNG QUAN PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH • Trong phân tích nhân sâm, HPLC kết hợp với loại đầu dò UV, DAD (PDA), ELSD, CAD, PAD MS sử dụng phổ biến • • Đặc biệt, UPLC-QTOF/MS sử dụng để phân tích chất chuyển hóa nhân sâm QTOF/MS kết hợp phận phân tích: Phân tích tứ cực (Quadrupole) + thời gian bay ( Time of Fly) Đơn giản, chạy chế độ scan mode Độ phân giải cao, đo xác số khối, có chế độ full chọn lọc ion (SIM) scan Áp dụng cho định lượng theo dõi chất mục tiêu Chọn lọc ion mục tiêu, giúp phân tích xác 10 TỔNG QUAN PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH UPLC-QTOF/MS UPLC giúp phân tích nhanh QTOF/MS hiệu hợp chất với độ phân chất chuyển hóa khác giải cao bao gồm việc phát ginsenosid, dựa vào nhóm chức chúng 11 TỔNG QUAN PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH CÁC PHÂN TÍCH ĐA BIẾN PAC giúp phân tích cho biết OPLS-DA giúp phát thành phần khác biệt mẫu ginsenosid chuyển hóa khác biệt =>phân biệt TG với RG, TG với BG RG với BG, theo thứ tự 12 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU CHẤT CHUẨN VÀ DUNG MÔI THỬ Methanol, nước acetonitril For HPLC (Seoul, Hàn Quốc) Acid formic For HPLC (Buchs, Thụy Sĩ) Các ginsenoside tiêu chuẩn Mua/phân lập tinh chế từ rễ P ginseng hồng sâm trình sắc ký 13 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU MẪU THỬ 14 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU CHUẨN BỊ MẪU Ly tâm (13.500 vòng/phút 5p) Lọc 0,22 µm tiêm mẫu vào hệ thống UPLC Bột mịn (200 mg) /2ml metanol 70%chiết xuất siêu âm o 50 C/30 phút Nghiền mịn đồng trộn mẫu Rễ củ loại sâm có kích thước tương đương, loại bỏ rễ nhỏ 15 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ UPLC-QTOF/MS Loại máy Waters ACQUITY H-Class UPLC (Waters Corp, Milford, MA, USA) Cột C18 ACQUITY BEH (2.1 mm x 100 mm x 1.7µm) Nhiệt độ cột o 40 C Nhiệt độ phận o C tiêm mẫu Pha động Dung môi A Nước: acid formic = 100:0,1, v/v Dung môi B Acetonitril: acid formic = 100: 0,1, v/v Tốc độ dịng 0,4 mL/phút Thể tích tiêm mẫu µL 16 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ UPLC-QTOF/MS Chương trình rửa giải gradient Thời gian (phút) %A (Nước: acid formic) %B (Acetonitril: acid formic) 0.5 85 15 85-80 15-20 80 20 13 80-70 20-30 23 70-65 30-35 24 65-62 35-38 27 62-40 38-60 31 40-10 60-90 32 10-85 90-15 35 85 15 17 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ĐIỀU KIỆN SẮC KÝ UPLC-QTOF/MS Loại máy Waters Xevo G2-S QTOF MS (Waters Corp, Milford, MA, USA) Chế độ ion hóa ESI− (m/z = 100-2500 Da) Điện cone 40V Điện mao quản 3.0 kV Nhiệt độ nguồn o 120 C Nhiệt độ khí bay o 550 C Tốc độ dịng khí cone 30 L/h Tốc độ dịng khí bay 800 L/h Chất đối chiếu Leucine-enkephalin (200 pg/mL, 10 µL/phút) Độ xác Hệ số biến thiên (CV) RT (0,1%) Cường độ peak 7,9% Dữ liệu thu thập xử lý phương pháp phát peak thuật toán UNIFY 1.8, sau xuất đến phần mềm EZinfo 3.0 để thực phân tích đa biến PCA OPLS-DA 18 KẾT QUẢ CÁC CHẤT CHUYỂN HÓA CỦA NHÂN SÂM CHẾ BIẾN WG TG RG BG Hình 1: Sắc ký đồ chất từ WG, TG, RG BG 19 KẾT QUẢ CÁC CHẤT CHUYỂN HÓA CỦA NHÂN SÂM CHẾ BIẾN Thứ tự rửa giải hàm lượng ginsenosid từ sản phẩm nhân sâm chế biến 20 KẾT QUẢ PHÂN TÍCH ĐA BIÊN PHÂN BIỆT SP NHÂN SÂM CHẾ BIẾN Dựa vào đồ thị OPLS-DA S-PLOT WG TG RG BG Số lượng mẫu 10 10 10 10 Số lượng 26 28 34 36 M-Rb1, M-Rb2, Rb2 , Rc, Rd, Re, Rb1, Rb2, Rc, Rd, Rd, Rk1, Rg5, Rg3 M-Rc, Re, Rg1 Rg1, hợp chất Re, Rg1 ginsenosid Thành phần đặc trưng chưa biết Đặc biệt: CK, CY, Rh2, Rk2, Rh3 21 BÀN LUẬN • Đây nghiên cứu sử dụng phương pháp UPLC–QTOF/MS đánh giá chất chuyển hóa chất lượng sản phẩm nhân sâm, nghiên cứu chứng minh hữu ích phân tích => tương lai ứng dụng đánh giá sản phẩm chế biến khác từ phận khác nhân sâm lá, hoa, thân, • Các phân tích đa biến cho ta biết ginsenosid chất chuyển hóa đặc trưng loại nhân sâm => sử dụng để đánh giá tác dụng dược lý nhân sâm sản phẩm chế biến, đồng thời tối ưu hóa quy trình sản xuất 22 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1: JaeWon Lee, Seung-Heon Ji, Bo-Ram Choi, Doo Jin Choi, Yeong-Geun Lee, Hyoung-Geun Kim, GeumSoog Kim, Kyuil Kim, Youn-Hyung Lee, Nam-In Baek and Dae Young Lee (2018), UPLC-QTOF/MS-Based Metabolomics Applied for the Quality Evaluation of Four Processed Panax ginseng Products, Molecules 2018, 23, 2062 2: Le Thi Hong Van, Nguyen Thanh Dat, Nguyen Ngoc Khoi, Jeong Hill Park, Nguyen Minh Duc, Ginsenoside-Rk1 and ginsenoside-Rg5 isolated from processed Vietnamese ginseng, Journal of medicinal materials, 2015 3: Le Thi Hong Van, Nghien cứu thành phần hóa học tác dụng sinh học sâm Việt Nam chế biến, Luận án tiến sĩ dược học 2018 23 Xin chân thành cảm ơn ý lắng nghe ! Insert the title of your subtitle Here 24 ... QUẢ CÁC CHẤT CHUYỂN HÓA CỦA NHÂN SÂM CHẾ BIẾN WG TG RG BG Hình 1: Sắc ký đồ chất từ WG, TG, RG BG 19 KẾT QUẢ CÁC CHẤT CHUYỂN HÓA CỦA NHÂN SÂM CHẾ BIẾN Thứ tự rửa giải hàm lượng ginsenosid từ sản. .. cực • Kĩ thuật UPLC- QTOF / MS áp dụng để xác định đánh giá chất chuyển hóa Đánh giá chất lượng sản phẩm TỔNG QUAN NGUYÊN LIỆU NHÂN SÂM PP chế biến Bạch sâm Sâm Triều Tiên sấy nhân sâm hấp với nước... phẩm nhân sâm, nghiên cứu chứng minh hữu ích phân tích => tương lai ứng dụng đánh giá sản phẩm chế biến khác từ phận khác nhân sâm lá, hoa, thân, • Các phân tích đa biến cho ta biết ginsenosid chất