NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY BẠCH HOA XÀ (Plumbago zeylanica L Plumbaginaceae) KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC S I HC Nội dung báo cáo gồm: - Đặt vấn đề - tổng quan - nguyên vật liệu phơng pháp nghiên cứu - Kết bàn luận - Kết luận kiến nghị Đặt vấn đề Bạch hoa xà (Plumbago zeylanica L Họ Đuôi công: Plumbaginaceae) Theo kinh nghiệm, nhân dân sử dụng để chữa bệnh da, vết thơng, vết bỏng với tác dụng bật kháng khuẩn chống viêm Theo tài liệu Bạch hoa xà có chứa nhóm quinon chủ yếu chất Plumbagin Để nghiên cứu đầy đủ thành phần hoá học chúng em tiến hành chọn đề tài: " Nghiên cứu thành phần hoá học Bạch hoa xà" với mục tiêu: - Sơ nghiên cứu thành phần hoá học phận - Xác định hàm lợng Plumbagin phận khác cđa c©y tỉng quan 1.1 VỊ c©y BHX (Plumbago zeylanica L Plumbaginaceae) - Đặc điểm thực vật Hình 1.1: Cây Bạch hoa xà (Plumbago zeylanica L.) - Phân bố, thu hái, chế biến - Thành phần hoá học - Công dụng BHX theo YHCT theo KN dân gian *Theo YHCT: BHX cã vÞ cay, tÝnh nãng, cã tác dụng thông kinh hoạt huyết, sát khuẩn, tiêu viêm * nớc ta: ông cha ta dùng BHX chữa mụn nhọt, hắc lào, chữa chai chân, sắc nớc rửa vết thơng, vết loét - Tác dụng dợc lý ứng dụngO lâm sàng BHX 1.2 Chất Plumbagin CH3 1.2.1 CÊu t¹o:C118H8O3 HO O Tªn khoa häc: methyl - 5hydroxy - 1,4 naphtoquinon 1.2.2 Nguån gèc ph©n lËp [0] CrO3/CH3COO 1.2.3 TÝnh chÊt vËt lý:H 1.2.4 Tính chất hoá học: - Plumbagin bị khử hoá SO2 tạo thành di phenol; O OH CH3 CH3 SO2 HO O HO OH - Acetyl hoá Plumbagin tạo thành dẫn xuất acetyl có màu vàng, t0 nóng chảy: 117 - 1180C O O CH3 HO O CH3 CH3COOH H3C-C-O O O - Tan dung dịch kiềm cho màu đỏ tạo thành ion phenolat - Cho màu đỏ với muối sắt III clorid nguyên vật liệu phơng pháp NC 2.1 Nguyên vật liệu - Cây Bạch hoa xà - Dung môi, hoá chất, thuốc thử - Dụng cụ thí nghiệm 2.2 Phơng pháp nghiên cứu 2.2.1 Sơ xác định nhóm hoạt chất: phản ứng hoá học ống nghiệm (theo ph ơng pháp phân tích khoa dợc liệu - Trờng đại học dợc Rumania) - Dịch chiết ether: flavonoid, quinon, alcaloid, tinh dầu, acid hữu cơ, phytosterol - Dịch chiết cồn: quinon, flavonoid, alcaloid, acid hữu cơ, sterol, đờng khử, tanin, anthocynosid - Dịch chiết nớc acid: alcaloid, tanin, đờng khử, 2.2.2 Định tính nhóm hợp chất SKLM Lấy khoảng 1g dợc liệu phận khác (rễ, thân, lá) đem chiết với cồn 90 0, lấy dịch chiết chấm SK: - Bản mỏng dùng Silicagel G (của viện Kiểm nghiệm) chế tạo thành mỏng có kích thớc 5ì 20 cm, hoạt hoá 110oC - Dung môi chạy SK với hƯ: I) Benzen - Methanol - Níc ( 15- 1- 4) II) Ether dÇu - Ethyl acetat (7 - 3) III) Benzen - Methanol - Acid acetic ( 45-8-3 ) - Thc thư hiƯn mµu: KOH 10%/cån 2.2.3 ChiÕt xt phân nhóm hoạt chất quinon Chiết xuất: Dùng dung môi ethanol 90o Phân lập: Dùng phơng pháp SK lớp chế hoá 2.2.4 Sơ nhận dạng Plumbagin hợp chất thông qua số số lý hoá - Thể chất: cảm quan, hình dạng tinh thể, màu sắc, độ tan - Đo điểm chảy tinh thể: máy Boetius HMK ( Đức) môn DHQS - SKLM với hệ dung môi khác - Đo phổ tử ngoại: máy Cintra 40 ( Australia ) môn DHQS 2.2.5 Định lợng Plumbagin phận phơng pháp quang phổ tử ngoại A b b * Xây dựng đờng chuẩn: A = k.C + V n * Xác định hàm lợng Plumbagin phận k 100(%) Công thức tính C% m.10 = Kết bàn luận 3.1 Sơ xác định thành phần hoá học phận STT Các nhóm hợp chất cần tìm Quinon (++): Phản ứng dơng tính rõ (+): Phản ứng dơng tính (-): Phản ứng âm tính thuốc thử Kết xác định Rễ Thân - Dung dịch KOH 10% +++ + Flavonoid - Dung dịch KOH 10% - Nhôm clorid - Cyanydin - Phytosterol - Libermann + + - Alcaloid - - - - Tanin - Dung dịch sắt III clorid 5% -Dung dịch Gelatin Acid hữu Bảng 3.1 Kết định tính nhóm hợp chất phận BHX Ghi chú: Các phản ứng Mayer Bouchardat Dragendorff Acid picric bÃo hoà Silicotungstic - L¸ + - - - - -Tinh thĨ Na 2CO -Xanh Bromothymol + + + + + + §êng khư -Fehling A- B + + - Anthocyanosid - HCl; KOH - - - Tinh dÇu -Bay h¬i - - - 10 Caroten - H SO - - - 11 Saponin - Sinh bät + + - 10% 3.2 Định tính nhóm hợp chất quinon SKLM Hình 3.1: Sắc ký đồ nhóm hợp chất quinon Bảng 3.2: Giá trị Rf x 100 vết SK đồ: Màu sắc Các vết Rf x 100 vết cá c hệ dung môi Soi d i đè n tử ngoạ i Vàng I II III P1 Bì nh th ờng Vàng nhạ t 20 36 62 P2 Vàng đậm Hồng ®á 68 69 88 * NhËn xÐt: C¸c hƯ dung môi cho kết có vết Vết phía điều kiện ánh sáng bình thờng (vết ký hiệu P2) có màu vàng đậm, soi phát quang d ới ánh sáng tử ngoại có mầu hồng đỏ; vết phía dới (vết ký hiệu P1) mầu vàng nhạt, soi phát quang dới ánh sáng tử ngoại có màu vàng Vậy kết nhận thấy: phận Bạch hoa 3.3 Chiết xuất phân lập chất nhóm hợp chất quinon 3.3.1 Chiết xuất Bột d ợ c liệu (Rễ/thân/lá) Chiết cồn 900 Dịch chiết cồn Thu hồi dung môi Cặn Tinh chế, hoà tan cồn Dung dịch cồn để phân lập Hình 3.2: Sơ đồ quy trình chiết xuất nhóm Quinon 3.3.2 Phân lập chất nhóm Quinon SK lớp chế hoá Vết P2 Vết P1 Hình 3.3: Sắc ký đồ lớp chế hoá nhóm hợp chất quinon - Đánh dấu, cạo riêng phần silicagel P1 P2 Tiến hành tơng tự thu đợc 10 chế hoá - Bột silicagel chứa chất P1 chất P2 đợc chiết ethanol 900 (theo sơ đồ hình 3.4) Bột Silicagel cạ o từ chế hoá Ethanol 900 Dung dịch cồn Thu hồi cồn Dịch cồn đậm đặc Đ ể lạ nh 40C 12h, läc, sÊy Tinh thĨ P lÇn Tinh thể P lần Hình 3.4: Sơ đồ quy trình chiết xuất, tinh chế chất P2 sau sắc ký lớp chế hoá 3.4 Nhận dạng chất P2 chiết đợc - Thể chất: tinh thể P2 tinh thể hình kim, cã mµu vµng cam, Ýt tan níc, tan nhiều dung môi hữu - Kiểm tra tạp chất Quinon khác SKLM: Hình 3.5: Sắc ký đồ chất P2 + Đo điểm chảy tinh thể: kết quả: 78 - 790C + Đo phổ tư ngo¹i ethanol 900 1.25 Abs 210 1.0 0.75 266 0.5 421 0.25 0.0 200 250 300 350 400 450 500 550 600 nm H×nh 3.6: H×nh ¶nh phỉ tư ngo¹i cđa chÊt P2 ethanol 90o 3.5 Định lợng Plumbagin phận phơng pháp quang phổ tử ngoại 3.5.1 Kết xây dựng đờng chuẩn Bảng 3.3 độ hấp thụ (A) ë bíc sãng 266nm C (µg/ml) A 10 12 14 MÉu 0,1379 0,2720 0,4068 0,5413 0,6759 0,8095 0,9450 MÉu 0,1371 0,2715 0,4060 0,5414 0,6760 0,8099 0,9444 MÉu 0,1372 0,2716 0,4066 0,5407 0,6755 0,8103 0,9448 MÉu 0,1370 0,2721 0,4067 0,5408 0,6751 0,8104 0,9445 MÉu 0,1379 0,2724 0,4061 0,5413 0,6754 0,8103 0,9449 X 0,1374 0,2719 0,4064 0,5411 0,6756 0,8101 0,9447 SD 0,0004 0,0004 0,0004 0,0003 0,0004 0,0004 0,0003 Abs 0,9447 0,1374 10 12 14 C(àg/ml) Hình 3.7: Sự tơng quan tuyến tính (C) (A) Sự tơng quan đợc biểu thị phơng trình: A = k.C + b, cã r = 0,9999 Víi k = 0,06728; b = 0,00281 VËy A = 0,06728 C + 0,00281 3.5.2 Kết định lợng Plumbagin phận Sau đo đợc độ hấp thụ (A), theo phơng trình: C% = Ab V n k 100(%) m.10 Víi: k = 0,06728, b = 0,00281 V: thể tích ban đầu (100ml) n: hệ số pha loÃng phận Rễ = 75 (lần) Thân = (lần) Lá = 1,25 (lần) m: khối lợng mẫu đem chiết phận (Rễ: 30g; thân: 20g; lá: 20g) Sẽ tính đợc hàm lợng % Plumbagin phận Bảng 3.4 Kết độ hấp thụ (A) nồng độ ( C ) tơng ứng rễ, thân, Bạch hoa xà bớc sóng = 266nm Rễ Thân Lá Độ hấp thụ A A CR(%) A CT(%) A CL(%) MÉu 0,7991 0,2959 0,9431 0,03494 0,8516 0,00788 MÉu 0,7978 0,2954 0,9428 0,03493 0,8524 0,00789 MÉu 0,7973 0,2952 0,9427 0,03492 0,8527 0,00790 MÉu 0,7977 0,2954 0,9425 0,03492 0,8518 0,00789 MÉu 0,7985 0,2957 0,9444 0,03499 0,8523 0,00789 X 0,7981 0,2955 0,9431 0,03494 0,8522 0,00789 SD 0,0007 0,0003 0,0008 0,0003 0,0005 0,00001 VËy:% Plumbagin trong: 0,0003 (%) RƠ c©y= 0,2955 ± Th©n c©y= 0,03494 KÕt luận kiến nghị 4.1 Sơ nghiên cứu thành phần hoá học phận Bạch hoa xà: - Rễ Bạch hoa xà có: Quinon, phytosterol, acid hữu cơ, đờng khử saponin - Thân Bạch hoa xà có: Quinon, phytosterol, acid hữu cơ, đờng khử saponin - Lá Bạch hoa xà có: Quinon acid hữu * Bằng sắc ký lớp mỏng silicagel G với hệ dung môi khác nhau: Nhóm Quinon gåm chÊt * ChiÕt xuÊt, ph©n lËp nhãm Quinon từ phận Bạch hoa xà có chÊt thuéc nhãm quinon lµ P vµ P2 ChÊt P2 kết tinh thành tinh thể hình kim màu vàng cam Dựa vào thông số lý, hoá (sắc ký lớp mỏng, điểm chảy tinh thể, phổ tử ngoại) đà sơ xác định Plumbagin 4.2 Định lợng Plumbagin phận cho kết quả: Rễ : 0,2955 Thân : 0,03494 Lá 0,0003 (%) ± 0,0003 (%) : 0,00789 ± 0,00001 (%) 4.3 Kiến nghị: Đề nghị tiếp tục nghiên cứu sâu thêm thành phần hoá học phận riêng rẽ Cải tiến quy trình chiết xuất dung môi trình chiết xuất Plumbagin để nâng cao hiệu xuất trình ... Theo tài liệu Bạch hoa xà có chứa nhóm quinon chủ yếu chất Plumbagin Để nghiên cứu đầy đủ thành phần hoá học chúng em tiến hành chọn đề tài: " Nghiên cứu thành phần hoá học Bạch hoa xà" với mục... RÔ cây= 0,2955 Thân cây= 0,03494 Kết luận kiến nghị 4.1 Sơ nghiên cứu thành phần hoá học phận Bạch hoa xà: - Rễ Bạch hoa xà có: Quinon, phytosterol, acid hữu cơ, đờng khử saponin - Thân Bạch hoa. .. - Sơ nghiên cứu thành phần hoá học phận - Xác định hàm lợng Plumbagin phận khác tỉng quan 1.1 VỊ c©y BHX (Plumbago zeylanica L Plumbaginaceae) - Đặc điểm thực vật Hình 1.1: Cây Bạch hoa xà (Plumbago